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【摘要】 目的 检测K．Cl协同转运子1(KCC1)在子宫内膜癌组织中的表达，评价其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测42例子宫内膜癌，15例子宫内膜不典型增生及20例正常子宫内膜组织中的表达情况，对KCC1表达与子宫内膜癌各临床病理参数之间的关系进行分析。结果 KCC1蛋白表达在子宫内膜癌、不典型增生及正常子宫内膜组织上阳性率分别为71．43%(30/42)，40%(6/15)，10%(2/20)。KCC在子宫内膜癌组织中的表达显著高于子宫内膜非典型增生和正常内膜组织。42例子宫内膜癌组织中，中、低分化腺癌组和高分化腺癌组KCC1蛋白阳性表达率分别为82．76%(24/29)，46．15(6/13)，差异有统计学意义(χ2=8．734，P2=0．091，P>0．05)、临床分期(χ2=0．525，P>0．05)、肌层浸润深度(χ2=0．045，P>0．05)及淋巴结转移(χ2=0．386，P>0．05)无关。 结论 子宫内膜癌组织中KCC1蛋白参与子宫内膜癌的发生和发展。
K-Cl协同转运子(K-Cl cotransporter，KCC)是一种存在于细胞膜上的膜转运蛋白，在细胞体积调节、上皮细胞转运和离子稳态等方面起重要作用[1]。已有研究表明KCC的活性和表达与多种恶性肿瘤细胞的增殖和侵袭能力密切相关,但有关其在子宫内膜癌组织中表达的研究还未涉及。本研究应用免疫组化方法，检测KCC1在子宫内膜癌组织中的表达，结合临床分期、病理分级等参数探讨其与子宫内膜癌发生、发展的关系。
1 材料与方法
1．1 标本及来源 收集中国医科大学附属盛京医院妇产科2005．2007年收治的子宫内膜癌标本42例，患者均行广
泛或次广泛全子宫切除术，术前均未接受放、化疗及激素治疗。按照FIGO 2000年子宫内膜癌分期标准进行临床分期，Ⅰ期18例，Ⅱ期10例，Ⅲ8例，Ⅳ期6例；组织学分级，G1级13例，G2级15例，G3级14例，组织类型均为子宫内膜腺癌，患者平均年龄为54．3岁，均经临床病理检查确诊。选取诊断性刮宫术确诊为子宫内膜不典型增生标本15例。选取同期宫腔镜手术获得的正常子宫内膜标本20例作为对照组，其中增殖期子宫内膜组织10例，分泌期子宫内膜组织10例。
1．2 试剂与方法 山羊抗人KCC1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，即用型SP试剂盒，DAB显色试剂盒购于北京中杉生物技术有限公司。用链酶亲和素．生物过氧化物酶法(SP)免疫组化法。用磷酸盐缓冲液PBS代替一抗作为阴性对照，将已知阳性切片作为阳性对照。
1．3 结果判定 KCC1蛋白表达阳性为细胞膜上出现棕黄色细颗粒。按照Zhong[2]等的方法，在高倍镜(400倍)下对每张切片随机选择5个视野，每视野计数200个肿瘤细胞，共计数1 000个肿瘤细胞。阳性细胞计分：无着色，0分；50%且强度着色，4分。评分结果：0~1分定为阴性，2~4分定为阳性。
1．4 统计方法 应用SPSS11．0统计软件进行χ2检验分析，P2=20．471，P2=4．692，P2=2．839，P>0．05。说明KCC1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达显著高于子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织。
2．2 KCC1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系 42例子宫内膜癌组织中，中、低分化腺癌组和高分化腺癌组KCC1蛋白阳性表达率分别为82．76%(24/29)，46．15%(6/13)，差异有统计学意义(χ2=8．734，P2=0．091，P>0．05)、临床分期(χ2=0．525，P>0．05)、肌层浸润深度(χ2=0．045，P>0．05)及淋巴结转移(χ2=0．386，P>0．05)无关。见表1。
3 讨论
子宫内膜癌是世界范围内危害女性健康的常见恶性肿瘤，占女性癌症发病率的7%,占女性生殖道恶性肿瘤20%~30%,近年发病率有上升趋势。目前，对于离子转运系统在子宫内膜上皮细胞向癌细胞转化过程中发生的一系列变化了解甚少。
K．Cl协同转运(K．Cl cotransport)是K+和Cl-电中性的配对运动，在细胞体积调节，跨上皮运输和［Cl-］调节中有重要的生理功能[1]。KCC是定位于细胞膜上的膜转运蛋白，目前已发现4种编码人类KCCS基因的遗传密码，KCC1、2、3、4，而且这4种KCC基因的cDNA产物已被克隆[3]。KCC1与KCC4对渗透压改变敏感，参与细胞的体积调节[4]，KCC2具有神经特异性，在中枢神经系统中通过控制细胞内Cl-浓度阻碍抑制性递质Y．氨基丁酸GABA的成熟[5]，KCC3最初在血管内皮中克隆[6]，可能在细胞增殖有生理学意义[7]。KCC4在颅神经、脊神经以及周围神经中高度表达[8]。
细胞维持其自稳态是哺乳动物细胞的基本特征，KCC最突出特征是由细胞肿胀激活，并参与细胞体积的恢复，是一个调节性体积减少(regulatory volume decrease，RVD)的过程[9]，细胞肿胀可由KCC及Ca2+激活的K+通道介导改变细胞的稳态，引起依赖Cl-浓度及不依赖Cl-浓度的细胞内K+外流，K+外流将刺激细胞的有丝分裂，加速细胞增殖。
正常细胞的KCC在生理条件下处于静止状态，即使在低渗条件下也相对稳定。肿瘤细胞的KCC在正常生理条件下接近稳定，但在低渗应激时有较高的转运速度，并随着细胞外渗透压的下降而成比例地增高。在渗透压改变期间，多数细胞都具有调节自身体积的能力，以维持其相对的内环境平衡和细胞的正常功能。而正常细胞向肿瘤细胞的转化以及肿瘤细胞本身增殖和侵袭能力的增强，破坏细胞自身稳定状态，因此使维持细胞自稳态的离子转运系统也发生相应的变化。细胞体积稳定，细胞生长、新陈代谢间的紧密联系意味着体积调节的离子转运系统在恶性转化过程中起非常重要的作用。研究表明，KCC在调节肿瘤体积方面起重要作用，在宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤中表达增强[10,11]。
本研究结果显示KCC1蛋白在子宫内膜癌组织中表达的阳性率为71．43%，表达显著高于子宫内膜非典型增生组织及正常子宫内膜组织，提示KCC1蛋白参与子宫内膜癌的发生和发展，KCC1蛋白在子宫内膜非典型增生组织和正常子宫内膜组织中差异无统计学意义，可能与样本量太少有关。本研究进一步显示，子宫内膜癌中KCC表达与患者年龄、临床分期、宫颈浸润深度及淋巴结转移情况无明显关系，而与肿瘤的分化程度、病理分级明显相关。中、低分化组KCC1表达水平明显高于高分化组，差异有统计学意义，提示KCC1表达可能在一定程度上反映了子宫内膜癌的分化程度，在肿瘤的发展中起一定的作用。
本结果提示KCC1可能在子宫内膜癌的发生、发展中起着重要的作用，因此阻断KCC活性，可能对阻断子宫内膜癌的浸润和增殖有所帮助，将为子宫内膜癌的治疗提供新的理论依据。
参考文献
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