【www.zhangdahai.com--考察材料】
【摘要】 目的 制备注射用右丙亚胺,建立其质量控制方法并考察其稳定性。 方法 制备注射用右丙亚胺;采用高效液相色谱法测定其含量及有关物质,并对制剂进行稳定性考察。 结果 本品处方以100 mg/瓶甘露醇作为赋形剂,用0.1 mol/L盐酸调节pH为1.9;右丙亚胺在4.4～44 μg/ml浓度范围内线性关系良好,r =0.999 9(n =5),恒温加速试验6个月及长期留样24个月时主药含量及有关物质未见明显变化。 结论 该制剂处方工艺可行,质量可控,稳定性良好;所建立的含量测定方法重复性好,专属性强,结果准确可靠。
【关键词】 注射用右丙亚胺;制备;质量控制;稳定性
Dexrazoxane for injection: preparation, quality control and stability study
CHEN Xiang-feng, ZHAO Yan-rong, LIU Liu-cheng.Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.,Ltd(Nanjing 211112, China
【Abstract】 Objective To prepare Dexrazoxane for injection,establish its quality control and determine its stability.Methods The dexrazoxane for injection was prepared and its content determined by HPLC. Meanwhile its stability was tested. Results 100 mg per bottle Mannitol solution was selected with 0.1 mol/L hydrochloric acid as the major adjuvant adjusting pH of 1.9 .The linear range of Dexrazoxane was 4.4～44 μg/ml,r =0.999 9(n =5).No obvious changes were observed at 6 months of an accelerated test or 24 months of long-term storage test. Conclusion The preparation is controllable and stable in quality, and the established method is reliable and specific for the quantitation of Dexrazoxane.
【Key words】 Dexrazoxane for injection;Preparation;quality control;Stability
右丙亚胺(dexrazoxane)[1]为双内酰类化合物,1970年由Creighton合成,是一种强有力的细胞内交联剂。经研究表明[2,3]:右丙亚胺可以对抗阿霉素累积量诱导的心脏毒性,提供较为有效的临床安全性,这就允许应用较大剂量的阿霉素和更多的治疗疗程。本品由美国Pharmacia & Upiohn生产上市,商品名为Zinecard,为右旋光学异构体。本公司研发了注射用右丙亚胺,并同时建立其质量控制方法和考察其稳定性。
图1 右丙亚胺结构式
1 仪器及试药
1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪系统包括LC-10ATvp泵,SPD-10Avp紫外检测器,C-R6A色谱数据处理仪;PHS-3C型精密数显 pH计(上海精科);303-1电热培养箱(江苏东台仪器厂)。
1.2 试药 右丙亚胺对照品(纯度99.76%,批号:051205);右丙亚胺原料(批号:051201)由江苏奥赛康药业有限公司提供;注射用右丙亚胺(规格:0.25 g/支,批号:20060101、20060105、20060109)由江苏奥赛康药业有限公司提供;甘露醇(山东烟台海藻工业公司提供);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯;注射用水(自制)。
2 制备工艺
2.1 辅料的选择及用量与中间体pH的确定 按表1中的处方设计不同的冻干药液进行配制,观察右丙亚胺溶解性及溶液的颜色。配制方法为按下述处方称取相应的主药,取盐酸置无菌容器,加注射用水至80%配制量,使溶液的pH约为2.5,降温并保温在2℃～6℃之间,加入右丙亚胺,搅匀,加注射用水至全量,在搅拌下慢慢滴加1.0 mol/L盐酸至表1规定的pH值,加0.2%活性炭吸附30 min,脱炭,测定中间体含量合格后,用0.22 μm微孔滤膜过滤,滤液按每瓶10 ml的装量灌装于25 ml西林瓶中,部分塞上丁橡胶塞,装盘,送入冻干箱中,插入温度探头,关闭箱门,分阶段升温升华干燥,充氮气,压塞,出箱,轧口,质检,包装即得注射用右丙亚胺。
表1
辅料及pH选择试验结果
编号主药/mg•瓶��-1�甘露醇/mg•瓶��-1�中间体pH溶解性成型性制品pH可见异物
125002.1不溶
225001.9溶解粉末4.27合格
3250501.9溶解一般4.25不合格
42501001.9溶解块状物4.22不合格
表1本品在pH≤1.9时有良好的溶解性,同时考虑到人体对pH的耐受程度,故将本品的pH定为1.9。处方中加入甘露醇作为赋型剂,冻干制品颜色变深,冻干制品复溶后不能
�
作者单位:211112江苏奥赛康药业有限公司
完全溶解,有不溶性颗粒物存在。
2.2 中间体稳定性考察 按编号6处方配制好右丙亚胺中间体溶液,室温下放置,与第0、1、2、4、6、8 h分别取样,考察溶液外观性状、可见异物、pH值、含量及有关物质,结果见表2。
表2
中间体溶液稳定性考察
时间(h)外观性状可见异物pH含量有关物质/%
0淡黄色符合规定1.9125.060.64
1淡黄色符合规定1.9025.080.67
2淡黄色符合规定1.9325.050.65
4淡黄色符合规定1.9325.030.71
6淡黄色符合规定1.9424.990.82
8淡黄色符合规定1.9824.861.03
实验结果表明:注射用右丙亚胺中间体溶液于室温下放置6 h,各项考察指标未见明显变化;放置8 h,pH、含量、有关物质略有变化,但仍在标准范围内。故右丙亚胺从配制到灌装结束最好在6 h内完成。
3 质量控制
3.1 色谱条件 色谱柱:shim-pack CLC-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液-甲醇(85:15);检测波长:208 nm;流速:1.0 ml/min;进样体积:20 μl。
3.2 系统适应性注射用右丙亚胺经酸、氧化、高温、光照破
坏后,产生数个降解产物峰。各降解峰与主峰在上述色谱条件下都得到很好分离,同时本品空白辅料不干扰测定,色谱条件能满足本品有关物质检查的需要。
图1 HPLC色谱图
A.空白辅料(accessories) B.样品有关物质(samples related substance) C.酸破坏(samples treated with acid) D.碱破坏(samples treated with alkali) E.热破坏(samples treated by heat)
F.光破坏(samples treated by light)1.右丙亚胺(dexrazoxane)
3.3 标准曲线的绘制 取右丙亚胺对照品适量(约40 mg),精密称定,置100 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀;分别精密量取该溶液1、3、5、7、10 ml,置100 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为标准曲线系列溶液;精密量取上述标准曲线系列溶液各20 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,以进样浓度(C)为横坐标,右丙亚胺峰面积(A)纵坐标进行线性回归,得回归方程:A =3165.87C+294.41 r =0.999 9(n =5)。
结果表明,右丙亚胺在4.4～44 μg/ml的浓度范围内,进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。
3.4 精密度试验 进样精密度:精密量取标准曲线制备下的中间浓度22 μg/ml连续进样5次,峰面积的RSD=0.38%,精密度良好。
中间精密度:取同一批样品,照“含量测定”项下的方法,由2人分2 d在不同的液相色谱仪上分别测定含量,结果RSD=0.71%。
3.5 重复性试验 取同一批样品,照“含量测定”项下的方法,平行制备6份供试品溶液,分别测定其含量,结果平均含量为99.8%,RSD=0.42%。
3.6 供试品溶液的稳定性试验 取“重复性试验”项下供试品溶液1份,分别于0、1、2、4、6、8 h进样,测定右丙亚胺峰面积,结果RSD=0.95%,供试品溶液在8 h内稳定。
3.7 回收率试验 按本品处方主药量的80%、100%、120%,精密称取右丙亚胺对照品,按处方工艺加入辅料配制,精密分装后冻干,取冻干品,照“含量测定”项下方法,分别测定每批样品中右丙亚胺的含量,根据测得量与加入量的比值,计算回收率,结果见表3。
表3
回收率试验结果
投料量加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)
80%18.0318.20100.9100.80.20
18.4718.57100.5
18.2218.36100.8
100%20.6420.5799.799.70.32
20.1720.18100.0
20.9320.8199.4
120%24.8824.6599.199.50.43
24.0123.9999.9
25.1225.0399.6
3.8 有关物质测定 取本品内容物适量(约相当于右丙亚胺20 mg),精密称定,置100 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1 ml,置100 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。照“3.1”项下的色谱条件,取对照溶液20 μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～25%,再精密量取供试品溶液与对照溶液各20 ?l注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。按上述方法对批号为20060101、20060105、20060109的样品进行检测,结果有关物质分别为0.71%、0.68%、0.74%,单杂分别为0.42%、0.41%、0.44%。
3.9 含量测定 照“3.1”项下的色谱条件,精密量取浓度约为20 μg/ml对照品溶液和供试品溶液各20 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算,测得批号20060101、20060105、20060109样品的标示量分别为99.6%,99.2%,100.3%。
4 稳定性考察[4]
4.1 影响因素试验 取注射用右丙亚胺在光照(4500±500) lx、高温(60 ±2 )℃、低温(4±2)℃条件下放置10 d,分别于0、5、10 d取样考察,比较外观性状、溶液的澄清度与颜色、碱度、标示量、有关物质等指标与放置前相比均无明显变化。经光照条件下放置10 d,其含量有所下降,有关物质增加,溶液颜色变为浅红色。
4.2 恒温加速试验 取3批注射用右丙亚胺(批号:20060101、20060105、20060109)置于温度(40±2)℃,RH(75±5)%条件下,放置6个月,在此期间分别于第0、1、2、3、6月取样,考察其外观性状、溶液的澄清度与颜色、碱度、标示量、有关物质等方面的变化,结果显示本品在加速试验条件下放置6个月,各项考察指标与放置前比较均未发生明显变化。
4.3 长期留样试验 取3批注射用右丙亚胺(批号:20060101、20060105、20060109)置于温度(25±2)℃,RH(60±10)%条件下,放置24个月,在此期间分别于第0、3、6、9、12、18、24月取样,考察其外观性状、溶液的澄清度与颜色、碱度、标示量等方面与放置前相比均无明显变化;12、24月无菌、细菌内毒素检查仍合格;但随着放置时间的延长,有关物质有所增加,但仍在合格范围内。结果显示本品在长期试验条件下放置24个月较为稳定。
5 讨论
5.1 由于本品在水及碱性溶液中不稳定,颜色变黄,我们参照国外5904方进行配制,首先将注射用水配成0.05 mol/L的盐酸溶液,然后再将右丙亚胺加入,确保其不被水解。
5.2 由于右丙亚胺中间体溶液对温度及光照极为敏感,故从配制到灌装完成应在6 h内。在样品检验过程中,配样要迅速,并采取避光措施,配好的样品溶液及对照溶液应放在冰箱(2～8)℃中避光保存。
5.3 右丙亚胺处方中加入甘露醇,冻干过程中溶液粘稠,导致冻干制品中水分很难被抽出,右丙亚胺溶融,浓缩,致使冻干制品成块状物;同时由于冻干制品含水分较多,右丙亚胺极易发生消旋化,生成丙亚胺,使得冻干制品有关物质超标。
5.4 右丙亚胺为丙亚胺的右旋光学异构体,易消旋化,金属离子对其消旋化起催化作用,故在右丙亚胺整个配制过程中,应尽可能使用玻璃瓶、玻璃棒,而不使用金属桶,金属棒,还应尽量采用避光操作。
参 考 文 献
[1] Zinecard dexrazoxane for injection 国外说明书.
[2] J M Sargent, C J Willianson, et al. Dexrazoxane significantly impairs the induction of doxorubicin resistance in the human leukaemia line, K562. British Journal of Cancer, Apr,2001,84,7:959-964.
[3] Michael Pearlman, David Jendiroba, et al. Dexrazoxane’s protection of jejunal crypt cells in the jejunum of C3Hf/Kam mice from doxorubicin-induced toxicity. Cancer chemotherapy and Pharmacology, Dec,2001,52,6: 477-481.
[4] ChP(中国药典),2005.Vol Ⅱ(二部):Appendix(附录) XIX.
