【www.zhangdahai.com--其他范文】
苗文佳， 谷 昊， 李 刚
（国家儿童医学中心 首都医科大学附属北京儿童医院 北京市儿科研究所血液疾病研究室，北京 100045）
出血性疾病是止血功能障碍引起自发或轻微外伤后出血不止或反复出血的一组疾病，儿童期较为常见，约占儿科血液病的30%[1]。血小板功能异常所致先天性出血性疾病较为罕见，临床上主要分为血小板无力症（Glanzmann thrombasthenia，GT）、巨大血小板综合征（Bernard-Soulier syndrome，BSS）、贮存池病。光学比浊法（light transmittance aggregometry，LTA）是血小板功能检测的金标准[2]，主要通过各种生理性致聚剂诱导血小板聚集来检测血小板最大聚集率（maximum aggregation rate，MAR）。血栓弹力图（thromboelastography，TEG）是一种新型的床旁检测血液黏弹性的方法，可综合评价全血凝溶状态，其参数血栓最大振幅（maximum amplitude，MA）可用来评价血小板聚集功能。目前，关于通过MAR、MA来鉴别GT和BSS的研究较少。本研究通过比较不同致聚剂诱导的MAR和MA值在GT和BSS中的差异，分析2项指标在伴血小板功能障碍的先天性出血性疾病中的诊断价值。
1.1 研究对象
选取2014年7月—2021年6月首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心确诊为先天性出血性疾病的患儿57例，其中男36例、女21例，年龄5.5（2.3～8.1）岁，包括GT患儿24例（GT组）、BSS患儿13例（BSS组）和凝血因子缺乏症患儿20例（对照组）。3个组性别、年龄差异均无统计学意义（P>0.05）。以二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）诱导的MAR<55%和MA值<52 mm作为阳性判断标准[3-4]。本研究经首都医科大学附属北京儿童医院医学伦理委员会审批通过，审批号为[2021]-E-244-R。
1.2 主要仪器与试剂
美国Helena公司AggRAM血小板聚集仪和配套诱导剂[5 μmol/L ADP、2.5 μg/mL胶原蛋白（collagen，Col）、500 μg/mL花生四烯酸（arachidonic acid，AA）、1.5 mg/mL瑞斯托霉素（Ristocetin，Risto）]。美国Haemoscope公司TEG5000血栓弹力图仪和配套分析软件 。
1.3 样本采集和处理
采集所有患儿空腹静脉血4 mL，枸橼酸钠抗凝，用于血小板聚集试验。先将血液样本200×g离心10 min，分离富血小板血浆；
再1 500×g离心15 min，提取乏血小板血浆。用乏血小板血浆调整富血小板血浆中的血小板数量至（200～250）×109/L待测[5]。采用全血样本直接上机分析TEG。所有血液样本确保表观无溶血、乳糜、黄疸。
1.4 方法
将AggRAM血小板聚集仪预热20 min，至恒温（37 ℃）后进行光路定标。将乏血小板血浆作为空白对照，测定透光度；
在富血小板血浆中加入小磁珠和致聚剂，待血小板聚集浊度出现变化，形成血小板聚集曲线5 min后，记录MAR。将20 μL氯化钙加入测试杯，再将用340 μL高岭土激活的血液样本缓缓加入测试杯中，记录MA值，2 h内完成检测。
1.5 统计学方法
采用SPSS 22.0软件和GraphPadPrism 7.0软件进行统计分析。非正态分布的计量数据以中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，组间配对比较采用非参数Wilcoxon符号秩检验。采用Spearman相关分析评价MAR与MA值的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 各组血小板聚集功能比较
GT组ADP、Col、AA诱导的MAR和MA值均低于对照组和BSS组（P<0.01），Risto诱导的MAR低于对照组（P<0.01）。BSS组Risto诱导的MAR低于对照组和GT组（P<0.01），AA诱导的MAR与对照组差异无统计学意义（P=0.05）。见表1、图1。
图1 各组血小板聚集功能结果比较
表1 各组血小板聚集功能比较
2.2 各组不同致聚剂诱导的MAR与MA值相关性分析
各组不同致聚剂诱导的MAR与MA值均无相关性（P>0.05）。见表2。
表2 各组4种致聚剂诱导的MAR与MA值的相关性分析
GT和BSS均为儿童常染色体隐性遗传的先天性出血性疾病，临床上BSS较GT更为罕见，发病率不足1/100万[6]。血小板聚集试验是诊断GT和BSS重要的实验室检测项目。不同种类、浓度致聚剂体外诱导原理在不同疾病中存在差异，本研究选用4种致聚剂进行血小板聚集试验：Risto介导血小板膜糖蛋白（glycoprotein，GP）Ⅰb受体与血管性血友病因子相互作用；
AA经环氧化酶作用转变为血栓烷A2；
Col需预先诱导血小板释放ADP，ADP通过作用人体细胞膜表面特异性受体来激活磷脂酶C，促进体内钙离子的释放，引发第一时相血小板聚集。采用TEG参数MA值评价纤维蛋白原和血小板通过GPⅡb/Ⅲa受体结合后血凝块最大强度和稳定性，可间接反映血小板聚集功能。
GT和BSS均为血小板的膜糖蛋白缺陷，但机制不尽相同。GT为GPⅡb/Ⅲa基因突变导致的蛋白复合物合成、转运、表达和功能障碍，可使除Risto外的生理性致聚剂诱导的血小板聚集水平大大减低。本研究中，GT组Risto诱导的MAR处于参考区间（55%～90%）内，其他3种致聚剂诱导的MAR均显著降低，与相关研究结果[7]一致。李健等[8]提出，MA值联合血小板聚集试验和流式血小板功能分析可鉴别诊断GT，与本研究GT组MA值低于对照组和BSS组的结果基本相符。BSS是由GPⅠb/Ⅴ/Ⅸ复合物基因缺陷导致的，患者血小板不能黏附于受损血管壁。有研究发现，BSS患儿血小板体积巨大、数量少，反应体系浊度变化不能完全反映血小板聚集水平[9]，与本研究结果不一致。对于血小板数量不足的样本，本研究采取增加采血量、降低离心力和仅收集富血小板血浆上层血浆等方法来保证反应体系血小板数量满足需求，减少因血小板数量不足所致的结果偏差。
本研究中，BSS组MA值基本处于参考区间（52～70 mm）内，提示MA值评价血小板黏附功能欠佳，与ADLER等[10]MA值无法监测血小板和内皮细胞导致的凝血功能障碍的研究结果一致。本研究结果显示，BSS组与对照组AA诱导的MAR差异无统计学意义（P=0.05），后续将增大样本量持续观察，以确认这一差异。有研究结果显示，GT患者Risto诱导的MAR为正常或临界正常[11-12]，GT患者与对照者Risto诱导的MAR差异无统计学意义。本研究中，2个组虽有差异，但结果均在厂家提供的参考区间内。考虑到儿童与成人MAR参考区间不同，建议各临床实验室建立本实验室相关项目的参考区间，以有效体现其临床价值。
有研究结果显示，MAR与MA评价血小板聚集功能存在较好的相关性[13]，但本研究发现，4种致聚剂诱导的MAR与MA值在各组中均不存在线性关系。MAR和MA值均受血小板和纤维蛋白原共同作用，原因可能是2种方法的检测原理和干扰因素不同，MAR反应体系为富血小板血浆，加入致聚剂激活血小板后，GPⅡb/Ⅲa复合物暴露出纤维蛋白原受体，并与其结合，使血小板聚集，利用透光度差异计算血小板聚集率，反应过程中白细胞和红细胞已被基本去除，无法监测到生理状态下血小板与各细胞间的相互作用，如血管壁受损时血小板的黏附状态[14]。LTA检测光路仅能识别5个及以上血小板聚集后的较大聚集物，对于体积较小的聚集物浊度变化不易记录。红细胞混杂、标本量和血小板数量减少等分析前因素均可导致悬液透光度发生变化，对MAR检测结果产生影响。另外，MA值检测体系为全血，借助高敏感悬垂丝动态描绘整个凝血过程中血凝块的黏弹力变化，有效分析全血凝溶过程，与MAR比较，对小颗粒更为敏感[2，15]。LTA检测过程中同样存在诸多干扰因素，全血样本直接上机无法观察溶血、乳糜等外观状态，如果样本溶血、磷脂暴露、红细胞和血小板数量异常增多，均可影响MA值检测结果的准确性[16-17]。
综上所述，MAR和MA值在检测血小板功能障碍方面各有优势和局限性。MAR在诊断和鉴别GT和BSS方面更有优势，MA诊断BSS则准确性欠佳。多个致聚剂联合检测MAR可更好地反映先天性出血性疾病患儿的血小板功能。作为一项回顾性研究，本研究样本量较小，尚需更多数据来验证MAR和MA值评价血小板功能障碍的有效性和临床价值。
猜你喜欢 血浆血小板诱导 糖尿病早期认知功能障碍与血浆P-tau217相关性研究进展现代临床医学(2022年4期)2022-09-29献血间隔期，您了解清楚了吗？人人健康(2022年13期)2022-07-25姜黄素抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭并诱导凋亡的作用研究九江学院学报(自然科学版)(2022年2期)2022-07-02同角三角函数关系及诱导公式新世纪智能(数学备考)(2021年10期)2021-12-21Ang Ⅱ诱导大鼠成肌细胞萎缩模型的构建昆明医科大学学报(2021年10期)2021-12-02血浆置换加双重血浆分子吸附对自身免疫性肝炎合并肝衰竭的细胞因子的影响昆明医科大学学报(2021年4期)2021-07-23机采血小板和冰冻血小板临床输注效果的差异分析安徽医专学报(2020年6期)2021-01-15同角三角函数关系及诱导公式新世纪智能(数学备考)(2020年10期)2021-01-04你真的了解献血浆是怎么回事吗？康颐(2020年15期)2020-11-10外周血网织血小板百分比检测对血小板减少及输注无效的意义世界最新医学信息文摘(2020年68期)2020-08-28本文来源：http://www.zhangdahai.com/shiyongfanwen/qitafanwen/2023/0611/609887.html
