【www.zhangdahai.com--其他范文】
柳鸿敏，侯程程，杨显达，吴东林，李 静
(吉林省疾病预防控制中心，吉林 长春130062)
人腺病毒(Human Adenovirus,HAdV)属于腺病毒科哺乳动物腺病毒属双链DNA病毒[1]。最早发现于1953年。人腺病毒(HAdVs)可以引起多种疾病，常见的如上呼吸道或下呼吸道感染[2]。急性呼吸道感染是儿童高发病和常见病，其中90%是由病毒感染引起的[3]，目前HAdV在5岁以下儿童中急性下呼吸道感染率约为5%～10%[4]，近年来儿童腺病毒感染有逐年提高的趋势[5-6]。本研究对2018年6月至2021年6月因呼吸道感染就诊的儿童进行呼吸道相关病毒检测，对腺病毒阳性的标本进行病毒分离，基因序列测定并分析其流行特征，以了解长春市儿童感染腺病毒的情况，为临床诊断和治疗提供依据。
1.1 研究对象采集吉林大学第一附属医院儿童呼吸科，2018年6月至2021年6月具有发热、咳嗽等呼吸道感染症状的172例儿童患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalvcoar lavage fluid,BALF)标本。
1.2 标本采集采用电子支气管镜到达病变局部位进行灌洗，灌洗部位选择病变重的肺段。0.9%氯化钠溶液(体重≤20 kg每次灌洗1 ml/kg,体重>20 kg每次灌洗量1 ml/kg)进行支气管肺泡灌洗，以负压10～15 mmHg进行抽取以获取BALF，将采集到的BALF放置于4℃冰箱。
1.3 实验室检测
1.3.1核酸提取与检测 应用MagNA Pure 96自动核酸提取仪，使用MagNA Pure DNA and ViralNA Small Volume Kit试剂盒，按照仪器及试剂盒说明进行操作提取核酸。采用Real-time PCR方法检测流感病毒A、B型(Influenza virus,IFVA、IFVB)、副流感病毒(Parainfluenza virus,PIV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial,RSV)、腺病毒(Human Adenovirus,HAdV)、博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)、人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)、支原体(Mycoplasmal pneumonia,MP)、衣原体(Chlamydial pneumonia,CP)。
1.3.2病毒分离 ADV阳性标本使用青链霉素(终浓度青霉素G 100 U/mL，硫酸链霉素 100 μg/mL)进行处理后接种于人喉癌上细胞系(Human epidermoid larynx carcinoma cell line，Hep-2)细胞中，加入血清含量为2%的细胞维持液，置于35℃ 5% CO2培养箱内，每日观察细胞病变，待细胞75%以上细胞出现细胞病变时收获。若无病变，培养至7日将细胞培养液置于-70℃冰箱内反复冻融后传代，盲传3代。
1.3.3腺病毒分型检测 采用巢式PCR方法扩增HAdV六邻体(Hexon)基因片段，具体序列如表1。
表1 引物序列
第1轮引物为AdhexF1和AdhexR1，第2轮引物为AdhexF2和AdhexR2，两轮反应条件相同均为94℃预变性2 min，94℃变性1 min，45℃退火1 min，72℃延伸2 min，35个循环，72℃延伸5 min。理论扩增片段第一轮长度在764～896 bp，第2轮长度在688～821 bp。将所得的目的扩增片段送到上海生工生物工程有限公司进行基因序列测定。
1.3.4序列分析 将所有Hexon基因PCR阳性扩增产物送到上海生工生物技术有限公司进行序列测定。测序结果使用sequencer5.0软件拼接后在GenBank上进行BLAST比较分析。
1.3.5进化分析 测序完成后，用 DNAStar 4.0 软件对测得的序列进行编辑,并进行同源性分析，计算 Sequence Distances，再用 MEGA 7.0 软件采用邻位相临法(NJ)绘制基因种系发生树。
2.1 基本情况
2018年6月至2021年6月在吉林大学第一附属医院儿童呼吸科采集支气管肺泡灌洗液172份，其中男性91人，女性81人，男女性别比为1.12∶1；
年龄上分布0～1岁组16人(9.3%)，1～5岁组89人(51.74%)，5～15岁组67人(38.95%)。年龄最大为15岁，最小为0.33岁(4个月)。
2.2 病原检测结果
172份标本中共检出腺病毒阳性标本32份，阳性率为18.6%(32/172)。其中男性15人，女性17人，男女性别比为0.88∶1；
年龄上分布0～1岁组5人(15.63%)，1～5岁组18人(56.25%)，5～15岁组9人(28.12%)。年龄最大为15岁，最小为1岁。
32份腺病毒阳性标本混合感染检出情况：腺病毒单独感染6例，占18.75%(6/32)；
二重感染14例，占43.75%(14/32)；
三重感染8例，占25%(8/32)；
四重感染4例，占12.5%(4/32)。与支原体、流感病毒混合感染情况居多，见表2。
表2 下呼吸道标本病原检测结果
2.3 腺病毒分型结果
32份腺病毒阳性标本进行处理后接种于Hep-2细胞，获得腺病毒毒株13株。经巢式PCR扩增Hexon基因产物后进行测序，序列进行BLAST比对，7型11株，2型1株，3型1株。
对11株7型腺病毒的Hexon基因部分序列进行同源性和进化分析，发现所分离得到的11株7型腺病毒与国内上海、陕西、河北、深圳等地分离得到的毒株，同源性高达99.9%～100.0%(见图1)。
图1 腺病毒7型Hexon基因序列进化图
对1株2型腺病毒的Hexon基因部分序列进行同源性和进化分析，发现所分离得到的1株2型腺病毒与国内云南、西藏、陕西、河北、长春等地分离得到的毒株，同源性高达99.8%～100.0%(见图2)。
图2 腺病毒2型Hexon基因序列进化图
对1株3型腺病毒的Hexon基因部分序列进行同源性和进化分析，发现所分离得到的1株3型腺病毒与国内北京、长春、浙江、上海等地分离得到的毒株，同源性高达99.5%～100.0%(见图3)。
图3 腺病毒3型Hexon基因序列进化图
HAdV 在全球普遍流行，可引起呼吸道疾病、结膜炎、膀胱炎、胃肠炎和神经性疾病等临床疾病[7-11]，大多数感染是自限性的，临床症状不明显或仅引起轻度症状。但是少数型别可引起严重的、甚至是致命的感染，尤其在婴幼儿、老年人和免疫系统缺陷人群。目前，国内尚未有相关疫苗和特异性的治疗药物，因此，腺病毒常见型别的分型检测显得尤为重要。目前已经鉴定至少103个型别，可分为7组，即A-G 型，其中，B 型(HAdV-3、7、11、14)、C型(HAdV - 1、2、5、6)和E 型(HAdV4)是引起呼吸道感染的主要病原体[12-13]。
本研究对2018-2021年长春市儿童下呼吸道标本进行腺病毒检测，检出率为18.6%，本省的HAdV优势流行株为7型。这一结果与上海徐汇区2012-2016年的检出率18.68%相近[14]；
1～5岁儿童腺病毒感染率为10.46%，较其他年龄组感染率高，与武汉市2012～2015年监测结果2～5岁儿童腺病毒感染所占比例相似[15]。呼吸道腺病毒有较高的混合感染率[16]，本研究混合感染率为81.25%，与支原体、流感病毒混合感染情况居多。我国近十年不同地区主要呼吸道HAdV 型别的构成比研究数据显示，我国北部、西北部和南部省份的检出占比较高[17]。相较于其他型别，HAdV-7感染患儿更易罹患重症肺炎[18]。本研究对13株腺病毒毒株进行Hexon基因序列BLAST比对，其中7型11株，占84.61%，是长春市儿童下呼吸道腺病毒感染的主要型别。近几年，我国频繁出现HAdV-7引起的聚集性爆发疫情，经常发生在学校和部队。2015 年某院校集中出现聚集性发热伴呼吸道症状患者，经采集鼻咽拭子进行PCR 检测为腺病毒B 组7 型阳性[19]。2019 年某部士官学校学员岗前培训期间，出现聚集性发热伴呼吸道症状病例，发病率高达35.14%，经实验室检测确诊为腺病毒B 组7 型阳性[20]。2018年安徽省安庆市某部队发生了1起急性呼吸道疾病的聚集性疫情，共13人发病，经证实这是一起腺病毒7型引起的聚集性疫情[21]。
近些年我国各地呼吸道HAdV 传染病暴发疫情不断出现，对本省HAdV 监测结果进行实时分析，可以提升HAdV 暴发疫情的早期应急处置能力，及时有效控制并阻断疫情播散，提出更有针对性的有效措施。
猜你喜欢 腺病毒灌洗毒株 人腺病毒感染的病原学研究现状传染病信息(2022年3期)2022-07-15支气管镜灌洗联合体位引流治疗肺不张的临床效果观察中国典型病例大全(2022年12期)2022-05-13血清4型Ⅰ群禽腺病毒 Hexon、FierⅠ、FiberⅡ基因的原核表达中国动物保健(2022年2期)2022-05-05纤支镜肺泡灌洗在脑死亡边缘性供肺维护中的作用昆明医科大学学报(2022年1期)2022-02-28法国发现新冠新变异毒株IHU科学大观园(2022年2期)2022-01-23经支气管肺泡灌洗术确诊新型冠状病毒肺炎1例现代临床医学(2021年4期)2021-07-31某部腺病毒感染疫情调查分析灾害医学与救援(电子版)(2018年1期)2018-06-05猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株流行现状中国猪业(2017年11期)2017-12-11猪乙型脑炎PrM-E重组腺病毒的构建及免疫原性上海农业学报(2017年4期)2017-04-10超声引导下穿刺留置导管无水乙醇灌洗治疗肾囊肿的疗效分析中国继续医学教育(2015年6期)2016-01-07本文来源：http://www.zhangdahai.com/shiyongfanwen/qitafanwen/2023/0809/637231.html
