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摘 要：目的：对垫状卷柏(Selaginella pulvinata(hook et Grev)Maxim.)进行系统的化学成分研究。方法：利用多种色谱方法进行化学成分分离，根据理化性质和波谱数据对化合物进行结构鉴定。结果：共分离得到7个化合物，分别鉴定为β-谷甾醇(1)，腺苷(2)，卷柏苷A(3)，丁香脂素-4，4’-氧-双-β-D-葡萄糖苷(4)，咖啡酸(5)，穗花杉双黄酮(6)，芹菜素(7)。结论：化合物2、3、4、5为首次从垫状卷柏中分离得到。
关键词：垫状卷柏；卷柏属；化学成分
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)06-036-02
垫状卷柏(Selaginella pulvinata Maxim.)为卷柏科卷柏属植物，广泛分布于四川、云南、西藏、广西、广东、江西、湖北、河南和河北等地。垫状卷柏生用具有活血通经之功效，用于经闭痛经，�瘕痞块，跌仆损伤；炒炭后则可化瘀止血，用于吐血、崩漏、便血、脱肛[1]。现代药理研究表明，卷柏属植物主要具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫功能、降血糖、镇痛等多种药理作用[1]。国内学者对其进行了化学成分研究，从中分离得到黄酮，甾体等成分[2]。为进一步明确其活性物质基础，我们对垫状卷柏的化学成分进行了进一步的系统研究。采用多种色谱方法共分离得到7个化合物，分别鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol 1)，腺苷(adenosine 2)，卷柏苷A(tamariscinoside A 3)，丁香脂素-4，4’-氧-双-β-D-葡萄糖苷(syringaresinol-4，4’-O-bis-β-D-glucoside 4)，咖啡酸(caffeic acid 5)，穗花杉双黄酮(amentoflavone 6)，芹菜素(apigenin 7)，其中化合物2、3、4、5为首次从垫状卷柏中分离得到。
1 实验部分
X-4数字显示显微熔点测定仪(温度未校正)；Bruker DPX-400 核磁共振仪(TMS 内标)；质谱用Waters ZQ 4000 型质谱仪和 Waters 2695 液相色谱连用仪； 柱色谱层析硅胶和薄层层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH-20(瑞士Pharmacia公司)，Waters DeltaPrep制备型高效液相色谱仪，YMC-Pack ODS-A制备型液相色谱柱，化学试剂均为分析纯，高效液相所用试剂为色谱纯。
垫状卷柏购于华东医药股份有限公司药材参茸分公司，产地为浙江，批号050822，经浙江大学生物仪器学院教授田景奎鉴定为垫状卷柏 Selaginella pulvinata Maxim的干燥全草。
2 提取和分离
垫状卷柏(S. pulvinata Maxim.)干燥全草12.5kg，70%乙醇加热回流三次，减压回收溶剂，浓缩至1∶1(1g 药材・ mL-1)，得土黄色混悬液，4000 r・min-1离心，得沉淀和上清液。其中，沉淀部分(500g) 经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱(10∶0~5∶5)，共得85个流份；第 40-53 流份合并(8.5g) 再经硅胶柱层析，氯仿-甲醇(10∶0~5∶5) 梯度洗脱，得到化合物1(3.0g)。溶液部分过D-101型大孔树脂，分别用水，30%乙醇，70%乙醇，95%乙醇梯度洗脱，每个梯度洗脱3~5个柱体积，分别浓缩成干膏，30%乙醇洗脱部分(130g) 经硅胶柱层析，氯仿-甲醇(10∶0~5∶5) 梯度洗脱，共得165个流份；第 48~54 流份合并，再经Sephadex LH-20 凝胶柱层析，甲醇洗脱，得到化合物2(30mg)；第 55~66 流份合并经反相硅胶柱层析，甲醇-水(3∶7~6∶4) 梯度洗脱，再经制备液相，甲醇-水(28∶72~60∶40)洗脱，得到化合物3(30mg)；第 67~76 流份经硅胶柱层析，氯仿-甲醇(10∶0~5∶5) 梯度洗脱，得到白色鳞片状结晶化合物4(300mg)；第 77~97 流份经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱，得到化合物5(80mg)。70%乙醇洗脱部分(80g) 经聚酰胺柱层析，氯仿-甲醇(10∶0~5∶5) 梯度洗脱，共得186个流份；第 115~142 流份经硅胶柱层析，氯仿-甲醇(10∶0~5∶5) 梯度洗脱，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱，得化合物6(3.6g)；第 70~89 流份经反复Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱，得化合物7(40mg)。
3 结构鉴定
化合物1：白色针晶(CHCl3)，mp138~140℃，该化合物与β-谷甾醇对照品混合后熔点不下降，薄层层析与β-谷甾醇对照品 Rf 值一致，鉴定化合物1为 β-谷甾醇(β-sitosterol)。
化合物2：白色粉末(甲醇)，1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz) δ∶ 8.36(1H，s，H-8)，8.15(1H，s，H-2)，5.96(1H，d，J= 6.1 Hz，H-1′)，4.63(1H，dd，J= 11.2 Hz，5.7 Hz，H-2′)，4.19(1H，d，J= 3.0 Hz，H-3′)，4.02(1H，d，J= 2.8 Hz，H-4′)，3.72(1H，d，J= 2.1 Hz，H-5′a)，3.58(1H，m，H-5′b)。13 C-NMR(DMSO-d6，100 MHz) δ∶ 156.1(C-6)，152.2(C-2)，149.0(C-4)，140.0(C-8)，119.4(C-5)，88.1(C-1′)，86.0(C-4′)，73.5(C-2′)，70.7(C-3′)，61.7(C-5′)。以上数据与文献[3]报道一致，故鉴定为腺苷(adenosine)。
化合物3：白色无定形粉末(甲醇)，mp 241~242℃。1H-NMR(CD3OD-d4，400 MHz) δ∶ 6.90(1H，s，H-B-6)，6.89(1H，s，H-B-4)，6.30(2H，s，H-A-2，6)，4.60(1H，m，H-1′)，3.79(3H，m，H-1，2)，3.67(9H，s，3OMe)，3.42(1H，m，Glc-H-6)，2.63-3.42(5H，m，Glc-H)，3.01(1H，m，H-9a)，2.72(1H，m，H-9b)，1.41(3H，d，J= 6.4Hz，H-2′)。13 C-NMR(CD3OD-d4，100 MHz) δ∶ 153.5(C-B-3)，149.0(C-A-3，5)，144.9(C-B-2)，144.8(C-B-5)，139.0(C-B-1)，134.7(C-A-4)，132.8(C-A-1)，117.5(C-B-6)，109.1(C-B-4)，107.6(C-A-2，6)，105.9(C-Glc-1)，78.4(C- Glc-5)，78.2(C- Glc-3)，76.3(C- Glc-2)，71.6 (C-1′)，71.2(C- Glc-4)，67.4(C-1)，62.8(C- Glc-6)，57.0(C-3OMe)，43.0(C-2)，39.9(C-3)，26.1(C-2′)。以上数据与文献[4]报道一致，故鉴定为卷柏苷A(tamariscinoside A)。
化合物4：白色鳞片状结晶，mp 270~272℃，1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz) δ∶ 6.64(4H，s，H-2，6，2′，6′)，4.89(2H，m，H-1″，1)，4.65(2H，d，J= 2.6 Hz，H-7，7′)，4.19(2H，dd，J= 8.8 Hz，7.0 Hz，H-9e，9′e)，3.82(2H，dd，J= 9.0 Hz，7.2 Hz，H-9α，9′α)，3.74(12H，s，4-OMe)，3.09(2H，m，H-8，8′)。13 C-NMR(DMSO-d6，100 MHz) δ∶ 152.6(C-3，5，3′，5′)，137.1(C-4，4′)，133.8(C-1，1′)，104.3(C-2，6，2′，6′)，102.7(C-1″，1)，85.0(C-7，7′)，77.2(C-5″，5)，76.5(C-3″，3�)，74.1(C-2″，2�)，71.3(C-9，9′)，69.9(C-4″，4�)，60.9(C-6″，6)，56.4(OMe)，53.6(C-8，8′)。以上数据与文献[5]报道一致，故鉴定为丁香脂素-4，4’-O-双-β-D-葡萄糖苷(syringaresinol-4，4’-O-bis-β-D-glucoside)。
化合物5：淡黄色结晶(甲醇)，mp 223~225℃。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz) δ∶ 7.40(1H，d，J= 15.5 Hz，H-7)，7.05(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2)，6.90(1H，dd，J= 8.2 Hz，1.5 Hz，H-6)，6.75(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.17(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8)。13 C-NMR(DMSO-d6，100 MHz) δ∶ 167.8(C-9)，148.1(C-4)，145.5(C-3)，144.5(C-7)，125.7(C-1)，121.1(C-6)，115.7(C-8)，115.1(C-5)，114.6(C-2)。以上数据与文献[6]报道一致，故鉴定为咖啡酸(caffeic acid)。
化合物6：橙黄色无定形粉末(甲醇)，mp 284~286℃，HCl-Mg 反应为阳性。1H-NMR(CD3OD-d4，400 MHz) δ∶ 7.92(1H，d，J= 2.3Hz，H-2′)，7.86(1H，m，H-6′)，7.50(2H，d，J= 8.8 Hz，H-2�，6)，7.10(1H，d，J= 8.6Hz，H-5′)，6.72(2H，d，J= 8.8 Hz，H-3�，5)，6.58(2H，s，H-3，3″)，6.38(1H，d，J= 2.0Hz，H-8)，6.36(1H，s，H-6″)，6.17(1H，d，J= 2.0 Hz，H-6)。13 C-NMR(CD3OD-d4，100 MHz) δ∶184.6(C-4″)，184.1(C-4)，166.5(C-2，7)，166.4(C-2″)，166.2(C-7″)，163.5(C-5)，162.8(C-4�)，161.3(C-4′)，159.7(C-9)，156.8(C-9″)，133.1(C-6′)，129.6(C-2�，6)，129.2(C-2′)，123.5(C-1′，1)，121.9(C-5′)，117.7(C-3′)，117.2(C-3�，5)，105.7(C-10″)，105.6(C-10)，104.3(C-8″)，103.7(C-3，3″)，100.5(C-6)，100.4(C-6″)，95.5(C-8)。以上数据与文献[2]报道一致，故鉴定为穗花杉双黄酮(amentoflavone)。
化合物7：黄色针状结晶(MeOH)，mp 345~347℃。1H-NMR(CD3OD-d4，400 MHz) δ∶ 7.93(2H，d，J= 8.7 Hz，H-2′，6′)，6.94(2H，d，J= 8.6 Hz，H-3′，5′)，6.77(1H，s，H-3)，6.47(1H，s，H-8)，6.19(1H，s，H-6)。13 C-NMR(CD30D-d4，100 MHz) δ∶181.7(C-4)，164.2(C-7)，163.7(C-2)，161.4(C-9)，161.1(C-4′)，157.3(C-5)，128.4(C-2′，6′)，121.1(C-1′)，115.9(C-3′，5′)，103.6(C-10)，102.8(C-3)，98.8 (C-6)，94.0(C-8)。以上数据与文献[7]报道一致，故鉴定为芹菜素(apigenin)。
致谢：中国科学院上海有机所核磁组史丽萍老师代测核磁共振谱。
参考文献：
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(责任编辑：姜付平)
