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【摘要】 目的 了解本地区下呼吸道临床分离出的常见致病菌菌群的分布情况及主要致病菌的耐药性,为细菌性感染诊断和治疗提供依据。方法 用血平皿培养法对本医院2009年1月到4月临床患者的痰标本进行培养,再用药敏纸片法对培养阳性的致病菌共289例进行药敏试验和用表型确证试验进行ESBLs的检测。 结果 肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌是下呼吸道常见的致病菌。结论 了解常见致病菌菌群分布及耐药性特点,有助于临床医生合理、安全使用抗菌药物。
【关键词】 下呼吸道;致病菌;药物敏感试验;耐药性
下呼吸道感染是最常见的感染性疾病之一,抗生素出现及发展,曾一度使肺炎病死率明显下降,近年来由于抗生素大量使用,细菌耐药性日益严重,特别是多重耐药、交叉耐药、全耐药菌株使得院内感染的控制更加困难。本研究对本地区下呼吸道前三位致病菌耐药性进行了分析,为临床合理用药提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本医院2009年1~4月住院及门诊患者送检的痰液标本。培养阳性者有289例,(不包括同一患者多次分离的同种菌株)。
1.2 细菌培养、鉴定
1.2.1 细菌培养 标本采集后在2 h内送检。立即接种。35℃ 孵箱需氧环境培养,观察细菌生长情况并获得单个菌落。分离接种后鉴定。
1.2.2 细菌鉴定 细菌鉴定生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司。细菌鉴定按《全国临床检验操作规程》[1]进行。
1.2.3 药敏试验的材料及方法 培养基用英国OXOID生物技术开发公司生产的半成品配制而成。WHO推荐的CLSI标准进行K-B法试验,药敏纸片由国OXOID生物技术开发公司生产。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。肺炎克雷伯菌ATCC700603 。
试验方法与判定标准按照CLSI 2008年版标准判断结果。
2 结果
从下呼吸道感染患者痰标本培养获得的289株细菌,其中革兰阴性杆菌占所有阳性标本的53.8%革兰阳性菌占44.1%,真菌占2.1%。
2.1 下呼吸道常见病原菌菌群分布见表1。
从表1可以看出,下呼吸道前三位致病菌分别是肺炎链球菌,铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌,ICU、呼吸科、脑外科、肾病科为细菌性感染高危科室。
2.2 革兰阳性菌主要病原菌对常用抗菌药物的耐药率见表2。
从表2可以看出,肺炎链球菌对万古霉素最敏感,对复方新诺明、红霉素、克林霉素已形成普遍的耐药;金黄色葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁均敏感,未发现耐药株;未发现对万古霉素、替考拉宁耐药的肠球菌。
2.3 革兰阴性菌中的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌耐药率见表3。
从表3可以看出,铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦最敏感,对庆大霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星已形成普遍耐药[2];肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南最敏感,对哌拉西林、头孢吡肟、左旋氧氟沙星已形成普遍的耐药。
3 讨论
肺炎链球菌是引起肺炎等疾病的链球菌属细菌,主要毒力因子是溶血素[1]。对抗生素耐药的主要原因是作用靶位的改变、主动排外[2,3]。比较本研究对6种抗生素的耐药率发现肺炎链球菌对万古霉素最敏感,未发现耐药菌株。针对本院肺炎链球菌耐药特性,推荐使用:①青霉素类;②糖肽类;③喹诺酮类。
铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种。外毒素A[4]是最重要的致病、致死性物质。细菌产生抗菌活性酶[5]、主动泵出系统是铜绿假单胞菌对抗生耐药的重要原因。比较本研究铜绿假单胞菌的10种抗生素的耐药率发现,对β-内酰胺酶抑制剂复合物的抗生素,如头孢哌酮/舒巴坦敏感率最高,是治疗铜绿假单胞菌引起感染的首选药物。针对本院耐药铜绿假单胞菌特性,推荐使用:①β-内酰胺酶抑制剂复合物的抗生素:霉烯类抗生素;②头孢菌素类三代。
肺炎克雷伯菌是人类呼吸道和肠道的常见致病菌,近年来肺炎克雷伯菌感染有明显增加的趋势,并且成为革兰阴性杆菌和医院内感染的最主要致病菌。肺炎克雷伯杆菌易产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),对抗生素耐药率较高,尤其是产ESBLs菌株,在携带ESBLs和AmpC酶的质粒上可同时携带对喹诺酮类等抗生素的耐药基因,导致多重耐药,已引起临床上的广泛关注[6]。比较本研究肺炎克雷伯杆菌对11种抗生素的耐药率发现,肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素敏感,其次是哌拉西林/他唑巴坦。针对本院ESBLs的耐药特性,推荐使用:①氨基糖苷类抗生素;②含β-内酰胺酶抑制剂复合物的抗生素;③第四代头孢菌素类如头孢吡肟;④联合用药方案。在治疗革兰阴性肠杆菌的医院感染时,特别是克雷伯菌属和大肠埃希菌感染时,要慎用青霉素类和头孢菌素类抗生素;在未获得实验室有关ESBLs产生的报告,经验治疗革兰阴性肠杆菌感染失败时,要考虑ESBLs的产生。
通过对本地区主要致病菌的合理分析研究,对指导临床合理正确应用抗生素,有效避免因为抗生素的滥用导致的耐药性增加提供可靠的实验室依据。
参 考 文 献
[1] 倪语星,尚红.临床微生物学与检验.人民卫生出版社.
[2] 曾雪峰,雷秉钧,吕晓菊,等.肺炎链球菌对抗菌药物的耐药性调查及对大环内酯类抗生素耐药机制研究.中华医院感染学杂志,2004(3).
[3] Li X-Z, Nikaido H. Efflux-mediated drug resistance in bacteria. Drugs,2004,64(2):159.
[4]
LIANG Xiao-bing, ZHUANG Hanlan, ZHOU Jie, et al.Superantigen of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A and its relationship with accessory cells.Institute of Microbiology and Epidemiology.
[5] 王贵年,王金玲,吴娟.临床分离产生金属酶铜绿假单胞菌的耐药性分析.中国全科医学,2009:1007-9572.
[6] Kariuki S,Corkill J E,Revath G,et al.Molecular charaterization of anovel plasmid-encoded cefotaximase(CTX-M12)found in clinical Kleb-siella pneumoniae isolates from Kenya.Antimicrob Agent Chemother,2001,45(7):2141-2143.
