【www.zhangdahai.com--班子述职报告】
[摘要]目的 研究δ阿片受体激动剂DADLE（D-Ala2-D-Leu5-enkephalin）对脓毒症大鼠血浆高迁移率族蛋白1（HMGB1）水平的影响。方法 将96只Sprague-Dawley （SD）大鼠分为假手术组（SO）、脓毒症组（SEP）、DADLE组[制模后立即给药DADLE（5mg/kg，腹腔内注）]， 每组32只。采用改良盲肠结扎穿孔方法（CLP）建立大鼠脓毒症模型，于制模后6h，12h，18h，24h每组各取8只处死取材。ELISA法检测血浆HMGB1水平。结果 12h 时SEP组和DADLE组HMGB1水平与SO组相比均明显升高（P＜0.05），且DADLE组明显低于SEP组（P＜0.05）；18h时，SEP组和DADLE组HMGB1水平达到最高。同样DADLE组明显低于SEP组（P＜0.05）；24h时SEP组和DADLE组HMGB1水平较18h有所降低，但DADLE组仍明显低于SEP组（P＜0.05）。结论 DADLE能明显降低脓毒症大鼠血浆HMGB1水平。
[关键词] DADLE；脓毒症；高迁移率族蛋白1
[中图分类号] R631 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）24-17-02
Effect of Delta-opioid Receptor Agonist on Serum HMGB1 Level in Rat with Sepsis
WANG Ping TANG Chengwu FENG Wenming BAO Ying ZHU Ming
Department of Hepatobiliary Surgery and Molecular Surgery，the First People’s Hospital Affiliated to Huzhou University Medical College，Huzhou 313000，China
[Abstract] Objective To study the effect of delta-opioid receptor agonist（DADLE） on serum HMGB1 level in rat with sepsis. Methods All 96 SD rats were randomly divided into sham operated group （SO），septic group（SEP）and DADLE group（DADLE）.Septic model was produced by cecal ligation and puncture（CLP）. In SO group，the abdomen was opened without any other treatment.In DADLE group，DADLE was administered at a dose of 5mL/kg by intraperitoneal injection after CLP. Rats were sacrificed at 6h，12h， 18h and 24h after CLP. HMGB1 level was determined by ELISA. Results The serum HMGB1 levels of SEP and DADLE groups began to increase at 12h，and reached the peak around 18h after CLP. Notably， serum HMGB1 levels of DADLE group at 12h，18h and 24h were significantly lower than those of SEP group（P＜0.05）. Conclusion DADLE could significantly decrease serum HMGB1 level of septic rat.
[Key words] DADLE；Sepsis；CLP；High-mobility Group box 1 Protein
脓毒症是严重感染、创伤及大手术等应激状况时常见的并发症，已经成为当今重症监护室的首要死亡原因[1]。脓毒症时多种炎症因子参与了脓毒症的病理过程，高迁移率族蛋白B1（high mobility group box1 protein，HMGB1）作为潜在晚期炎性因子，是脓毒症致死效应的重要炎性介质，干预HMGB1可有效防止脓毒症和MODS的发生与发展[2，3]。δ阿片受体激动剂DADLE（D-Ala2-D-Leu5-enkephalin）是一种人工合成的非选择性δ阿片受体激动剂， 我们以往的研究发现DADLE能明显降低脓毒症死亡率[4]，但是其机制尚不明确，本研究旨在探讨其对脓毒症大鼠血浆HMGB1水平的影响，从而对DADLE在脓毒症中的保护作用进行初步阐述。
1 材料与方法
1.1 实验材料
DADLE（D-Ala2-D-Leu5-enkephalin）分子式C29H39N507，购自美国Sigma公司。大鼠HMGB1 ELISA定量检测试剂盒购自日本Shino-Test公司。
1.2 动物分组及脓毒症模型建立
清洁级健康SD雄性大鼠96只，体重270～320g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，随机分为假手术组（SO组）、脓毒症组（SEP组）和DADLE组，每组32只，采用盲肠结扎穿孔方法建立大鼠脓毒症模型，参照Wichterman 等[5]的改良的盲肠结扎穿孔（CLP） 方法， 将盲肠穿孔数由2个增至4个，假手术组除不施行CLP， 其余操作同SEP组，DADLE组在模型建立后立即按5mL/kg体重腹腔注射浓度为0.5mg/mL的DADLE。CLP后6h、12h、18h、24h每组断颈处死8只大鼠，取血ELISA法检测血浆HMGB1浓度。
1.3 统计学处理
采用SPSS10.0软件处理。计量资料用（χ±s）表示，多组间比较用方差分析，组间两两比较采用q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
DADLE对脓毒症大鼠血浆HMGB1水平的影响见表1。CLP后6h SEP组和DADLE组血浆HMGB1水平开始升高，但三组间无明显差异（P＞0.05）；12h 时SEP组和DADLE组HMGB1水平与SO组相比均明显升高（P＜0.05），且DADLE组明显低于SEP组（P＜0.05）；18h时SEP组和DADLE组HMGB1水平达到最高。同样DADLE组明显低于SEP组（P＜0.05）；24h 时SEP组和DADLE组HMGB1水平较18h有所降低，但DADLE组仍明显低于SEP组（P＜0.05）。
3 讨论
大鼠CLP 模型是目前公认的与临床相关性较强的脓毒症模型，血中内毒素水平、细胞因子升高幅度，内毒素检出率及细菌培养（包括革兰阳性菌和革兰阴性菌）阳性率高、单纯的抗炎治疗在此模型失败都与临床相似[6]。
脓毒症时细菌产生内毒素导致大量炎症因子释放，包括早期炎症因子（如TNF-α和IL-1β）和晚期炎症因子（如HMGB1），正是这些炎症因子导致器官组织损伤[7，8]。然而一些针对早期炎症因子的治疗在临床上并未收到良好的疗效，因为早期炎症因子在炎症发展的早期阶段就已经开始释放，并未给拮抗治疗留下足够的时间窗。况且在全身炎症反应启动之后再使用 TNF-α和IL-1β的抑制剂也无法取得明显的疗效 [9-11]。有学者发现，使用抗HMGB1抗体能明显减少脓毒症小鼠的死亡率，即使是在脓毒症发生24h后仍有明显的保护作用[12]，这意味着针对HMGB1的治疗策略具有良好的时间窗，因此HMGB1可能是治疗脓毒症的新靶点。本研究中DADLE组血浆HMGB1水平在12h，18h和24h均明显低于SEP组，表明DADLE能明显抑制血浆HMGB1的表达，减轻全身炎症反应，从而对脓毒症大鼠起到一定的保护作用。
目前对脓毒症发生机制尚不完全清晰，且难于提出有效的治疗措施，我们运用δ阿片受体激动剂DADLE处理脓毒症大鼠后，发现血浆HMGB1水平明显降低，因此我们推测DADLE能延缓甚至减少全身炎症反应综合征的发生，从而改善脓毒症预后，这是对脓毒症治疗的新的尝试，为脓毒症的治疗提供了新的思路。
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（收稿日期：2011-06-17）
