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【摘要】 目的 研究注射用更昔洛韦对细菌内毒素检查实验的干扰情况，并建立其细菌内毒素检查的质量标准。方法 参照《中国药典》2000年版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法进行试验，用二个不同厂家的鲎试剂对注射用更昔洛韦进行干扰试验研究。结果 注射用更昔洛韦稀释成0．5 mg/ml时对细菌内毒素检查无干扰作用。结论 可以用细菌内毒素检查法（凝胶法）代替家兔热原检查法控制其产品质量。�
【关键词】注射用更昔洛韦；细菌内毒素检查；干扰试验
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Research of Bacterial Endotoxin Test in Ganciclovir for Injection�
【Abstract】 Objective To study the interference of Ganciclovir for Injection in bacterial endotoxin test and to establish bacterial endotoxin test method for the sample． Method According to China Pharmacopoeia 2000, inhibition or enhancement test for bacterial endotoxin test was performed with Amebocyte Lysate manufactured by two different companies． Results The interfere on the determination of bacterial endotoxins can be excluded when Ganciclovir for Injection was diluted 0．5 mg/ml.Conclusion The results suggest that Bacterial Endotoxins test (gel-clot method) can be used as an alternative method for the rabbit pyrogen test for Ganciclovir for Injection.�
【Key words】 Ganciclovir for Injection ; Bacterial endotoxin test; Interference
更昔洛韦（ganciclovir,GCL）,是继阿昔洛韦之后,开发的一种核苷类广谱抗病毒药，是第一个用于治疗人体巨细胞病毒的药物。GCL抑制病毒的机制在于竞争性抑制脱氧鸟苷的三价磷酸盐与DNA聚合酶的结合的治疗[1,2]。目前控制注射用更昔洛韦的热原的方法是家兔法。家兔法由于存在生物学差异，设备要求高，而细菌内毒素检查法则可克服以上缺点，且具有灵敏快速、简便易行、重现性好等优点，我们采用凝胶法对注射用更昔洛韦进行了细菌内毒素检查的研究，并对用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法来控制产品质量的可行性进行初步探讨。�
1 实验材料�
1．1 注射用更昔洛韦 为白色疏松块状物。规格：250 mg/瓶，批号：040215、040218、040221，由江苏康缘药业股份有限公司提供。试验前热原试验均符合规定。�
1．2 鲎试剂（TAL) 批号 :20040117，灵敏度λ为0．5EU•ml-1，批号 :20030408 λ=0．25 EU•ml-1，湛江博康海洋生物有限公司生产。批号:030507，灵敏度λ为0．5EU•ml-1，批号:030507，031015,λ=0．25 EU•ml-1，福州新北生物工业有限公司生产。四批鲎试剂灵敏度复核均符合规定。�
1．3 细菌内毒素工作标准品（冻干品） 批号2004-2，中国药品生物制品检定所制备，效价160EU•Amp-1。�
1．4 细菌内毒素检查用水（BET水） 批号W2003-3,中国药品生物制品检定所制备，10 ml•Amp-1,内毒素含量[3]，本品的临床最大用药量M为5 mg•(Kg•h)。则注射用更昔洛韦的细菌内毒素限值(L)为L=K/M=5．0EU•(Kg•h) -1/5 mg •(Kg•h) =1EU•mg。考虑到临床联合用药的安全性,将限值适当调整为0．5EU•mg。�
2．2 注射用更昔洛韦稀释液浓度的确定 由于注射用更昔洛韦细菌内毒素限值L为0．5 EU•mg，所以对应于灵敏度0．5～0．03 EU•ml的鲎试剂，按照公式MVD=CL/λ计算得到注射用更昔洛韦的对应有效稀释浓度为1．0 mg•ml,0．5 mg•ml,0．25 mg•ml,0．125 mg•ml,0．06 mg•ml。�
2．3 干扰试验预试验 为排除供试品溶液对细菌内毒素检查的干扰，求出最高非抑制浓度，正式试验前进行了干扰试验预试验。将注射用更昔洛韦用细菌内毒素检查用水分别稀释成浓度为1．0、0．5、0．25、0．125、0．06 mg• ml的溶液，将此系列浓度溶液记为NPC。 同时在上述试验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的试验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。选择两个厂家λ为0．5 EU•ml的TAL，分别与上述两个系列液反应，同时作阳性（PC）和阴性对照(NC)，试验重复两管，结果见表1。�
表1结果表明，注射用更昔洛韦在1．0 mg• ml及以下浓度时对以上两个厂家的鲎试剂无干扰作用。�
2．4 供试品的干扰试验[3] 为进一步确证供试品溶液对0． 25EU．ml-1鲎试剂是否存在干扰作用，分别用BET水和0．5 mg ． ml供试品稀释液，将细菌内毒素工作标准品配制为2、1、0．5、0．25λ浓度的系列内毒素溶液。按《中国药典》2005年版二部附录XI E中的细菌内毒素检查供试品干扰试验项进行实验，结果见表2。�
表2干扰试验结果表明：三个批号供试品的λ值均在0．5～2．0λ(0．5～0．125 EU•ml）之间无干扰作用。�
2．5 注射用更昔洛韦细菌内毒素检查 按《中国药典》2005年版二部附录XI E中细菌内毒素检查法，使用二批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查，并同时设立样品的自身阳性对照管,结果见表3。
3 讨论�
3．1 本实验评价了注射用更昔洛韦对TAL与内毒素凝聚反应是否有干扰作用，实验结果证明注射用更昔洛韦经按《中国药典》2000年版二部附录细菌内毒素检查法应用指导原则试验，其1．0 mg•ml以下浓度对细菌内毒素检查无干扰作用，我们将供试品使用灵敏度λ为0．25 EU•ml-1的TAL进行细菌内毒素检查是可行性的，确证了细菌内毒素检查法完全可以代替传统的兔法作注射用更昔洛韦的热原检查。�
3．2 注射用更昔洛韦的细菌内毒素检查标准制定参考 取本品，依法检查（中国药典2000年版二部附录XI E),每1 mg注射用更昔洛韦中含细菌内毒素的量应小于1．0EU。�
3．3 为了进一步避免其干扰作用，可选择更高灵敏度的鲎试剂，将样品作更大倍数的稀释，做细菌内毒素检查。
参考文献
［1］ 傅绍军，朱利民，洪枫.抗巨细胞病毒药物-GCL.国外医药抗生素分册.2004,25(6):282-286.�
［2］ 梁翠华,徐志洲,董莲.HPLC测定更昔洛韦中有关物质的含量.中国药科大学学报.2004,35(2):135-137.�
［3］ 中华人民共和国药典.二部，2005：附录86.�
