【www.zhangdahai.com--叙职履职报告】
【摘要】目的 制备具有治疗非胰岛素依赖性糖尿病的降糖消渴胶囊并进行质量控制。方法 采用化学鉴别、 TLC法对方中黄连、葛根、黄芪进行定性鉴别。用HPLC法测定方中川芎的成分阿魏酸的含量。结果 该胶囊配制工艺简单，检验方法准确， 在薄层色谱中均能检出黄连、葛根、黄芪。阿魏酸的的回收率为99.04%，RSD为0.89%。结论 该胶囊配制工艺简单，疗效确切，检验方法准确，重现性好，结果稳定，质量可控。
【关键词】降糖消渴胶囊；制备；薄层鉴别；阿魏酸；高效液相色谱法
【中图分类号】R977.1+5
【文献标识码】A
【文章编号】1814-8824(2009)-05-0031-03
本制剂具有滋阴清热，生津止渴，益气降糖之功效。主用于非胰岛素依赖性糖尿病患者，适用于烦渴多饮，尿频量多，口干唇燥，体形消瘦等症。在临床使用多年疗效确切，未见明显不良反应。为有效控制药品质量，笔者参照有关文献［1-4］，从化学鉴别，薄层鉴别试验，阿魏酸的含量测定进行控制，并对本品中川芎中阿魏酸的含量测定进行了方法学研究，现报道如下。
1 仪器与试药
LC-10ATVP 高效液相色谱仪，SPD-10AVP检测器（日本岛津），Echrom98工作站；SK3300H超声波清洗器（上海科导超声仪有限公司）。阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为9910），黄连对照药材、葛根素、黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为120913-200407、110752-200511、110781-200512）；降糖消渴胶囊（辰溪县人民医院制剂室，批号：081107090213 090421）。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。硅胶G（青岛海洋化工厂）。
2 处方及制备
2.1 处方 黄连18g，生黄芪60g，黄柏30g，葛根45g ，生山药55g ，知母36g ，生石膏18g，天花粉90g，党参60g，山茱萸 36g，五味子，30g麦冬36g，生地60g，川芎32g，红花30g
2.2 制备 ①取黄连、天花粉、石膏、黄柏、山药干燥，粉碎制成细粉，过６号筛备用。②另取生黄芪、葛根、知母、党参、麦冬、生石膏、生地、红花、五味子、川芎与上述①粗粉分别加６、４、２倍水煮沸三次，每次1.5小时，合并滤液过滤，滤液浓缩至相对密度为1.35～1.38(50℃)，干燥粉碎，与上述①中的细粉混匀，用０号空胶囊填充、抛光、分装即可。
3 质量控制
3.1 性状 本品为硬胶囊剂，内容物为浅黄色粉末；味苦。
3.2 鉴别
3.2.1 取本品，显微镜下观察 淀粉粒单粒扁卵形、三角形卵形、类圆形或矩圆形，直径8～35um，脐点点状、人字状、十字状或短缝状，可见层纹。草酸钙针晶束存在于黏液细胞中，长约至240um，针晶粗2～5um。石细胞鲜黄色，呈类圆形、类长方形、类多角形，壁厚，壁孔明显。韧皮纤维黄色，多成束；纺锤形或梭形，壁厚。纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚。石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚，层纹明显。具缘纹孔导管大，多破碎。有的具缘纹孔呈六角形或方形，排列紧密。
3.2.2 黄连 取本品内容物2 g，加甲醇20mL，回流提取15min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.5g，缺黄连的阴性样品，同法制成对照药材溶液与阴性样品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各2μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水（12∶6∶3∶3∶1）为展开剂，置用氨蒸气预饱和15min的展开缸内，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色荧光斑点,缺黄连的阴性样品无干扰，结果见图1A。
3.2.3 葛根 取本品内容物8g，加乙酸乙酯30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液取缺葛根的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10μL 分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（28∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点,缺葛根的阴性样品无干扰，结果见图1B。
3.2.4 黄芪 取本品内容物16g，加甲醇40mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次20mL,弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL,弃去水液，合并正丁醇提取液，用氨试液振摇提取2次，每次20mL，分取正丁醇液，用水振摇洗涤2次，每次20mL，弃去水液，合并正丁醇液蒸干。残渣加甲醇1mL使溶解。作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取缺黄芪的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种各10μL 分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（10∶20∶11∶5）10℃以下放置的下层液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同棕褐色斑点；紫外光灯（365nm）下显相同的橙黄色荧光斑点缺黄芪的阴性样品无干扰，结果见图1C。
3.3 检查 应符合胶囊剂项下有关的各项规定（中国药典2005年版一部附录ⅠL）。
3．4 含量测定
3.4.1 色谱条件 色谱柱DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇-1.0%的冰醋酸溶液（30∶70）；检测波长：316nm；流速：1.0mL/min。按阿魏酸峰计算，理论塔板数不少于3000。
3.4.2 溶液制备
3.4.2.1 供试品溶液制备方法 取本品10粒，精密称定，研细，取细粉1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1%冰醋酸的60%甲醇溶液25mL，称定质量，超声处理（120W，40kHZ）30min，放冷，称定质量，加1%冰醋酸的60%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。
3.4.2.2 阴性样品溶液的制备 取除川芎外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺川芎的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
3.4.2．3 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品10mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL含阿魏酸10μg）。
3.4.2．4 干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。结果表明，供试品溶液色谱中，在与阿魏酸对照品色谱峰相应位置上有相应峰，而阴性溶液色谱中无此峰，说明阴性无干扰，对照品、供试品、阴性样品色谱图分别见图2A、B、C。
3.4.2.5 线性关系考察 精密吸取浓度为89.1μg•mL-1的阿魏酸对照品溶液（精密称取阿魏酸对照品8.91mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀,即得）1、2、3、4、6mL，分别置25mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μL进样，测定其峰面积积分值，以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A＝2131016.62×C+7546.22，r＝0.9998。结果表明阿魏酸进样量在0.03564μg～0.21384μg范围内具有良好的线性关系。
3.4.2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10μL，连续进样6次，测定其峰面积积分值，结果RSD为0.38%，表明本方法精密度良好。
3.4.2.7 稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液10μL，于0、1、2、4、8h进样，测定其峰面积积分值，结果供试品溶液峰面积的RSD为0.95%，说明供试品溶液在8小时内稳定。
3.4.2.8 重现性试验 取同一批号样品（批号: 090421）六份，按上述供试品溶液制备方法，平行处理并测定（n=2），结果6次测得的平均含量为49.3986μg•粒-1，RSD为1.26%，表明本方法重复性好。
3．4．2．9 回收率试验 精密称取已知含量为164.6788μg•g-1（批号: 090421）样品细粉约0.75g，共六份，分别精密加入阿魏酸对照品溶液（精密称取阿魏酸对照品12.56mg，置25mL棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置100mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得25.12μg•mL-1）5mL，即125.60μg，再分别精密加入1%冰醋酸的60%甲醇溶液20mL，按上述含量测定项下的方法测定含量，结果见表1。
3.4.2.10 样品含量测定 按上述含量测定方法测定三批样品中阿魏酸的含量，结果见表2。
参照中国药典和相关文献资料中的有关阿魏酸的含量测定方法，对本品中阿魏酸的含量进行测定，试验结果表明，缺川芎的阴性溶液无干扰，且样品分离效果好。经方法学考察，本含量测定方法结果较好，方法可行。
4 讨论
本制剂配制工艺简单，质量稳定，在临床使用多年对胰岛素依赖性糖尿病患者疗效确切。本品从化学鉴别，薄层鉴别试验，含量测定进行控制，对阿魏酸的含量测定方法进行了方法学研究，结果具有分离效果好、专属、灵敏、准确等优点。
参考文献
［1］ 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京:中国医药科技出版社，1994：519-520.
［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京:化学工业出版社，2005：212、213、233.
［3］ 张责君.常用中药薄层色谱鉴定［M］.北京:化学工业出版社,1993:127,130,154.
