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【摘要】 目的 观察泽泻多糖、泽泻水提物及醇提物对治疗小鼠高脂血症及抗氧化的作用。方法 采用高脂饲料建立实验小鼠高脂血症模型，实验设正常对照组、模型对照组、泽泻多糖组、泽泻水提物和泽泻醇提物组，用胶股蓝片作阳性对照。饲喂高脂饲料两周后，用泽泻提取物灌胃给药21 d，检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、小鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量等指标，并通过计算脾脏、胸腺免疫器官指数值观察小鼠的免疫能力。结果 泽泻多糖、泽泻水提物及泽泻醇提物均能显著降低高脂血症模型小鼠血清中TC、TG，升高HDL-C，改善小鼠的动脉硬化指数值(AI)，而且均能显著提高肝组织SOD活力，降低肝组织MDA含量，还能明显升高高脂血症肥胖小鼠的脾脏、胸腺指数值。结论 泽泻三种提取物不仅对肥胖小鼠的血脂紊乱具有良好的调节作用，而且能提高肥胖小鼠的抗氧化能力，并能增强肥胖小鼠的免疫能力。
【关键词】 泽泻；多糖；脂代谢；SOD；MDA
The effects of alisma orientalis’s extracts on blood lipid and antioxidation of experimental hyperlipidemia mice
LI shu-zi, JIN zai-jiu, ZHANG shan-yu.
Department of Ophthalmology, Eye and Otorhinolaryngology Hospital, Yanbian 133000, China
【Abstract】 Objective To study the effect of water and alcohol extracts of Talisman orientalis andpolysaccharide on blood lipid and antioxidation of experimental hyperlipidemia mice.Methods All the mice were fed with foods abundant in high-fat to establish model of hyperlipidemia. They were divided randomly by weight into the model, control, polysaccharide, extracts of Talisman orientalis groups, and the Jiaogulan troche group as positive control. The mice were fed with foods abundant in high-fat for 2 weeks, then administrated orally with extracts of Talisman orientalis for 21 days. The total cholesterol (TC), triglyceride(TG) and high-density lipoprotein (HDL-C)in fat mice’s blood serum and liver"s SOD and liver"s MDA were determined. The immune function was observed through calculated the mice"s spleen and thymus index.Results The water and alchohl extracts of Talisman orientalis and polysaccharide can decrease the TC, TG, increase the HDL-C and improve the arteriosclerosis Index (AI), increase the SOD vitality and decrease the MDA content of liver significantly, increase the fat mice"s spleen and thymus index observably.Conclusion The extracts of Talisman orientalis can not only accommodate disorders of metabolizing blood lipid, but also enhance anti-oxidation capacity and immune function of hyperlipidemia mice.
【Key words】 Alisman orientalis；Polysaccharide；Fat metabolize；SOD；MDA
泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎。其性寒，味甘、淡，归肾、膀胱经。具有利水渗湿、泄热之功效。用于小便不利、水肿胀满、泄泻、尿少、痰饮、眩晕、热淋涩痛等症。近年来研究表明，泽泻除具有明显的利尿作用外，还具有降血压、降血糖、抗脂肪肝、降血脂及抗动脉粥样硬化等作用［1］。对泽泻的化学成分和实验药理学的研究也多集中在利尿和降血脂方面。研究资料显示泽泻降血脂成分主要是泽泻醇A、泽泻醇B、乙酸泽泻醇醋酸酯等脂溶性成分，其降脂作用的机理可能是抑制胆固醇的吸收及影响胆固醇在小肠的酯化［2,3］。近年来研究表明植物多糖具有重要的生理活性，这些多糖参与了生物体中细胞的各种活动，具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗病毒等生物活性［4］。为此本实验将泽泻多糖、泽泻水提物及泽泻醇提物分别灌胃高脂血症小鼠，旨在比较三种提取物对小鼠脂代谢作用影响的差
别，并进行了相关指标的测定，为泽泻的开发和应用提供理论依据。
1 实验材料与仪器
1.1 药品泽泻饮片(产自广西，符合2005年药典标准)；胶股蓝片(广州白云山制药股份有限公司，批号：07021011)。
1.2试剂与仪器胆固醇、牛胆酸钠，北京奥博星生物技术责任有限公司；总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)测定试剂盒，上海荣盛生物科技有限公司； 超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；7600型全自动生化分析仪，HITACHI公司，日本；紫外-可见分光光度计，上海激光技术有限公司。
1.3 实验动物分组及饲养昆明系清洁级小鼠72只，体质量(20±2)g，雌雄各半，由延边大学医学部动物实验科提供。在实验环境下，适应性饲养3 d，按体质量随机分成6组，每组12只。正常对照组(喂普通饲料)、模型对照组(肥胖造型，喂高脂饲料)、泽泻多糖组(肥胖造型，喂高脂饲料，泽泻多糖)、泽泻水提物组(肥胖造型，喂高脂饲料，泽泻水提物)、泽泻醇提物组(肥胖造型，喂高脂饲料，泽泻醇提物)、胶股蓝片组(肥胖模型，喂高脂饲料，胶股蓝片)，除正常对照组饲喂普通饲料外，其余各组均饲喂高脂饲料，各组小鼠自由进食饮水，室温为20℃~23℃。
2 方法
2.1药物的制备参照中药制剂常规方法，将泽泻饮片用常水冲洗后再用蒸馏水冲洗， 50℃干燥，研磨成粗粉，用石油醚浸泡去除杂质，抽滤后阴干，备用。
2.1.1 泽泻水提物的制备取100 g泽泻粗粉，加入蒸馏水煎3次，每次加水600 ml，煎煮1h后过滤，收集滤液，以2000转/min，离心15 min，取上清液，低温静置过夜后过滤，入旋转蒸发仪中浓缩至50 ml，制成2 g/ml生药溶液，备用。
2.1.2 泽泻醇提物的制备取100 g泽泻粗粉加入80 %乙醇回流提取3次，每次加入乙醇600 ml，第一次回流提取2 h后过滤，第二、三次分别回流提取1 h后过滤，滤液以2000转/min，离心15 min，取上清液，入旋转蒸发仪中回收乙醇，并浓缩至50 ml，制成2 g/ml生药溶液，备用。
2.1.3泽泻多糖的制备取泽泻粗粉300 g，用80%乙醇回流提取2次，第一次加入6倍量乙醇，回流提取3h，过滤；第二次4倍量，2h，过滤，将药渣50℃干燥，加2000 ml蒸馏水于90℃温浸提3h，过滤；药渣再用蒸馏水1000 ml于90℃温浸提取2 h，过滤，再用蒸馏水500 ml重复一次，合并滤液，减压浓缩至600 ml，以3000转/min，离心10 min去除沉淀，上清液，过滤，滤液中加入5倍量的95%乙醇，低温静置过夜，沉淀多糖并过滤，滤饼依次用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，50℃干燥，得泽泻粗多糖(用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量为69.16%)，将泽泻多糖制成25 mg/ml多糖溶液，备用。
2.2肥胖小鼠给药正常对照组饲喂普通饲料，其余各组均饲喂高脂饲料（高脂饲料的制备：胆固醇2%，牛胆酸钠0.5%，猪油8%，普通饲料粉89.5%，将上述原料混合均匀，加水适量制成块状）。2周后正常对照组和模型对照组均灌胃0.3 ml 生理盐水；泽泻水提物组和泽泻醇提物分别灌服0.3 ml泽泻水提物和泽泻醇提物(均是2 g/ml生药溶液，即生药30 g/kg剂量)；泽泻多糖组灌服0.3 ml的泽泻多糖溶液(25 mg/ml，多糖375 mg/kg剂量)；胶股蓝片组灌服100 mg/kg的胶股蓝片溶液(按胶股蓝片总皂苷计)。口服灌胃给药，1次/d，连续给药21 d。实验期间正常对照组继续饲喂普通饲料，其余各组继续饲喂高脂饲料。
2.3生化指标的测定①末次给药后，经颈动脉取血，以3500转/min，离心15 min, 用生化分析仪分别测定血清TC、TG、HDL-C，并按公式计算动脉硬化指数［AI=(TC-HDL-C)/HDL-C］和HDL-C/TC的值；②摘取肝脏0.5 g，在生理盐水中冲洗，滤纸吸干，入匀浆器中用生理盐水匀浆，制成10%的肝匀浆液，离心(4000 r/min)，上清液采用化学比色法，按SOD和MDA试剂盒测定方法测定小鼠肝脏SOD、MDA含量；③摘取脾脏、胸腺称重，计算胸腺、脾脏指数［脾脏指数=脾脏质量(g)/小鼠体质量(g)×100%］，胸腺指数表示方法同脾脏指数。
2.4统计学方法数据处理和统计分析采用SPSS10.0软件，进行t检验。
3 结果
3.1 泽泻不同提取物对高脂血症小鼠血脂的影响
表1结果显示，模型对照组TC、TG含量与正常对照组比较差异显著(P0.05)。②从肥胖小鼠血清TG浓度降低程度与模型组比较，泽泻多糖组�泽泻水提物组�泽泻醇提物组均明显降低(P［1］。泽泻所含化学成分较多，其中有治疗脂肪肝作用的活性成分主要是胆碱和卵磷脂；而泽泻醇A，B及其单醋酸酯和泽泻醇C单醋酸酯等5种三萜类成分具有降低血浆和肝脏中胆固醇的作用 ［3］；Hikino等 ［5］报道泽泻中的某些三萜类成分，如泽泻醇A醋酸酯和泽泻醇B，具有利尿作用；还发现泽泻醇A，B和泽泻醇F具有抑制诱导型NO合成酶的作用［6］。随着生活水平的提高，高脂类食物摄取量增多，相应的高血脂、脂肪肝患者也日益增多，研制开发更为安全方便高效的降脂、保肝护肝药物成为当前药物开发中的一个热点。在传统的保肝药方中，泽泻的应用十分广泛，但目前对其多种提取物在脂代谢中的作用的比较鲜见报道。本实验设计了泽泻的三种提取方法，探究三种提取物分别灌胃由高脂膳食而引起的高脂血症小鼠后对脂代谢过程中的作用差异。结果显示泽泻的三种提取物均能显著降低小鼠血清中TC、TG的浓度，升高HDL-C的浓度，同时升高HDL-C/TC的比值，改善动脉硬化指数值(AI)。在表1中看出，泽泻水提物和醇提物都优于泽泻多糖，表现在降低TG和升高HDL-C方面，但三种提取物对脂代谢影响并没有明显的优劣差异(P>0.05)。
超氧化物歧化酶(SOD)是机体中一种重要的抗氧化酶，催化超氧自由基(O2-)，歧化为H2O2和O2，消除体内过剩的超氧阴离子，阻止自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，防止发生脂质过氧化，从而达到对机体组织的保护作用［7］。丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物，间接反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度和组织细胞的脂质过氧化程度。胸腺和脾脏是机体最重要的中枢和外周免疫器官之一，胸腺指数和脾脏指数能反映二者的发育和功能状况，间接反映了机体的免疫水平，免疫功能的强弱与这些免疫器官的重量变化有着密切关系，伴随着重量的增加，其免疫功能必然明显加强。本实验对肥胖小鼠肝组织的SOD和MDA的含量进行测定，并对小鼠的免疫器官重量进行观察。结果发现泽泻多糖、水提物、醇提物组小鼠的肝组织SOD的含量显著升高，MDA的含量显著降低。对免疫器官重量的影响实验中发现泽泻多糖组明显提高小鼠脾脏指数和胸腺指数(P0.05)。表明泽泻的三种提取物均具有较强的抗氧化能力和保护肝组织细胞的作用，泽泻多糖对小鼠的机体免疫功能具有一定的增强作用。
目前对泽泻影响脂代谢的研究主要集中在脂溶性成分上，但是本研究发现，泽泻中的水溶性成分和多糖也具有良好的降脂效果。随着研究手段不断改进，对水溶性有效成分的药理学研究也是非常重要的，并且具有良好的应用前景。
参 考 文 献
［1］ 徐晖. 泽泻药理作用研究进展. 湖南中医杂志,2004,20(3):77-79.
［2］ 周本杰,莫轩辉.泽泻降脂有效部位提取工艺的筛选研究.中国药房,2006,17(2):103-105.
［3］ 龚树生,张建军,曹广智,等.泽泻的历史及生物活性成分研究进展.山西中医学院学报,2000,1(1):28-30.
［4］ 陈旋,张翼,张剑波.植物多糖的研究进展.中国新药杂志,2007,16(13):1000-1005.
［5］ Hikino H, Iwakawa T, Oshima Y, et al. Diuretic principles of Alisrna plantago-aquatica var. orientale rhizomes. Shoy-akugaku Zasshi,1982,36(2):150.
［6］ Matsuda H, Kageura T, Toguchida I, et al. Effects of sesquiterpenes and triterpenes from the rhizome of Alisma orientale on nitric oxide production in lipopolysaccharide-activated macrophages：absolute stereostructures of Alismaketones-B23-acetate and -C23-acetate. Bioorg Med Chem Lett,1999,9(21):3081.
［7］ 袁勒生. 超氧化物歧化酶的研究现状与应用前景. 中国药学杂志,1991,26(8): 456-459.
