【www.zhangdahai.com--工作心得体会】
【摘要】 目的 探讨CGRP对MCI的影响。方法 选用Wistar大鼠,应用微栓子栓塞阻断法建立多发性脑梗死性缺血模型,借用ABC免疫组织化学染色方法、透射电镜技术并结合显微图像分析观察大鼠海马CA4区神经元的NPY变化。结果 治疗组NPY阳性反应物平均灰度值与MCI组比较低(P 1.3.6 ABC免疫组织化学染色 ①冰冻切片吹干,PBS冲洗5 min×3次;②1:50正常羊血清中孵育30 min;③倾去血清,加入兔抗NPY抗体(1:8000),4℃过夜;④PBS冲洗5 min×3次;⑤滴加生物素化抗兔抗体(二抗)1:40稀释,室温孵育60 min;⑥PBS冲洗5 min×3次;⑦滴加HRP标记的卵白素1:40稀释,室温孵育60 min;
⑧PBS冲洗5 min×3次;⑨DAB成色5 min;⑩PBS冲洗5 min×3次;�B11�梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察;�B12�对照实验在邻近切片上进行,用抗原吸收后的一抗代替一抗,结果为阴性。
1.4 显微图像定量分析 用Luzex-F显微图像分析仪测定海马CA4区单位面积NPY阳性细胞数量并计算出阳性细胞百分率,用(x±s)和%表示;测定海马CA4区单位面积NPY阳性细胞及纤维的平均灰度值,用(x±s)表示。结果进行统计学处理。
2 结果
2.1 尼氏染色和透射电镜结果 正常对照组和缺血对照组大鼠海马的尼氏染色切片上,神经元数量较多,排列紧密,形态完整,泡浆内尼氏体丰富。MCI组大鼠海马神经元出现明显的改变:核皱缩、核膜部分溶解、消失;线粒体肿胀、嵴紊乱甚至缺失;内质网扩张、脱颗粒;高尔基体扁平囊腔扩张;突触数量减少、前后膜融合、突触小泡不清或出现聚集。根据尼氏染色和透射电镜结果证明MCI动物模型制备成功。
2.2 ABC免疫组化结果 正常对照组和缺血对照组NPY阳性反应物分布于海马各区,阳性反应物呈棕褐色,细胞形态完整,纤维丰富。治疗组取材,阳性细胞及纤维数比正常对照组和缺血对照组NPY阳性反应物减少但比MCI模型组NPY阳性反应物增多。MCI模型组,阳性细胞及纤维数较正常对照组和缺血对照组NPY阳性反应物明显减少,且细胞形态不完整。
表1
MCI大鼠海马CA4区单位面积NPY阳性细胞百分率(x±s,%)
组别正常对照组缺血对照组实验组
治疗组MCI组
阳性细胞百分率33.5±1.2%33.0±2.3%22.3±3.6%��**�14.0±2.5%�*
注:�*与正常组比较P
