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【摘要】 目的 测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱的含量。方法 采用HPLC法,Inertsil C�18�(5 μm,150×4.6 mm); Dimonsil C�18�(5 μm,150×4.6 mm)。流动相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)(25:75);检测波长348 nm。结果 四个批号的样品测定结果(mg/100 ml)分别为:19.11、18.81、18.83、18.92。结论 该方法操作简便,结果稳定可靠,可用于骨质宁搽剂中盐酸小檗碱的含量测定。
【关键词】 骨质宁搽剂;高效液相色谱法;盐酸小檗碱
1 仪器和试药
高效液相色谱仪,日本岛津LC10AT,紫外检测器SPD-10AVP; N2000色谱工作站(浙江大学)。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所:供含量测定用,批号110713-200708)。乙腈为色谱级,重蒸水,其他试剂均为分析纯。骨质宁搽剂为浙江鼎泰药业有限公司生产,规格为每瓶装50 ml,批号为081102,081219,081222,081225。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 HPLC柱:Inertsil C�18�(5 μm,150×4.6 mm); Dimonsil C�18�(5 μm,150×4.6 mm)。流动相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)(25:75); 流速:1 ml/min;检测波长:取用上述流动相溶解的盐酸小檗碱对照品溶液作紫外扫描,显示于348 nm波长处有最大吸收(图2),遂选择该处作检测波长;柱温:室温;对照品溶液进样10 μ,样品溶液视含量高低不同,进样5 μ或10 μ;外标法定量。
2.2 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 ml含20 μg的溶液,即得。
2.3 样品溶液的制备 精密量取本品2 ml,置10 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。
2.4 系统精密度试验 在选定的条件下,注入对照品溶液共6次,面积平均值为6.332×10-5,RSD为 0.3%。
2.5 专属性试验 取供试品及缺黄连空白样品,按拟定的方法处理样品并测定,采用Inertsil C�18�柱,理论板数以盐酸小檗碱峰计为2800,与前相邻峰分离度为1.85,缺味样品无峰。
2.6 线性关系考察 依据标准规定盐酸小檗碱在本品中含量不得少于6.9 mg/100 ml及本方法,准确进样5~25?l对照品溶液(浓度为21.2 μg/ml,n=5),按上述色谱条件测定峰面积,具体数据见表1。
表1
线性关系试验数据
进样量(μg)0.1060.2120.3180.4240.530
峰面积(×105)3.146.309.4212.5615.68
以进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程如下: Y=2.1×103+2.955×106X r=0.99999
在此范围内(相当于本品中盐酸小檗碱含量为5 mg/100 ml~25 mg/100 ml)线性关系良好。
2.7 重复性试验 取同一批样品(批号081102),分别依2.3项下处理、进样5 μl测定。HPLC结果见表2。
表2
重复性试验结果
样品编号123456平均RSD(%)
峰面积(×105)5.645.625.615.625.675.705.640.7
2.8 加样回收率试验 采用加样回收法。精密量取已测含量的供试品(081102)1 ml于10 ml量瓶中,加对照品溶液(0.424 mg/ml)300 μl,用流动相稀释至刻度,摇匀。共制取6份,依法测定,结果见表3。
表3
加样回收率测定结果(n=6)
序号
样品中盐酸小檗�碱含量(μg/ml)
添加盐酸小檗�碱含量(μg/ml)
测得盐酸小檗�碱总含量(μg/ml)
回收量�(μg/ml)
回收率�(%)
平均回收�率(%)
RSD(%)
131.7212.6099.1
232.0012.88101.3
331.8312.7199.9
419.1212.7231.8112.6999.899.81.4
531.5512.4397.7
632.0112.89101.3
2.9 样品测定
分别按所定的方法测定了四个批号的样品,平行取样2份,按法测定,结果(mg/100 ml)分别为:19.11、18.81、18.83、18.92。
3 讨论
3.1 理论板数的确定 采用Inertsil C�18�(5 μm,150×46 mm)HPLC柱时,其理论板数按盐酸小檗碱峰计为2800时,与相邻
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作者单位:314500浙江鼎泰药业有限公司
峰分离度为1.85,故本文中规定“理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2500”。后采用Dimonsil C�18�(5 μm,150×46 mm)HPLC柱分析另三批样品,理论板数为7200,与相邻峰分离度为2.8。观察到两种柱子HPLC图谱显示峰的数量及形状相似,提示理论板数于2500以上应可达到满意的分离。
3.2 供试品溶液进样量 本法对照品溶液浓度为20 μg/ml,进样10 μl;按含量限度(6.9 mg/100 ml)计算供试品溶液浓度为14 μg/ml,本研究中试制品含量比限度高2.8倍,进样5 μl与对照品进样量更为接近。故本 文“测定法”中将供试品溶液进样量规定为5~10 μl。
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国药典.化学工业出版社,2005年版一部附录,33.
[2] 尹清.HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量,上海中医药杂志,2003,37(7):53.
