【www.zhangdahai.com--感恩演讲稿】
摘要：目的：建立高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草酸的含量。方法：采用Dikma钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm，5gm)；流动相为甲醇―0.2mol/L醋酸铵溶液―冰醋酸(63：37：1)；检测波长为250nm，流速为1.0mL/rain，柱温为30℃。结果：甘草酸进样量在0.221～6.630tμg(r＝0.99998)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.15％，RSD＝0.71％(n＝9)。结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为新止咳合剂的质量控制方法。
关键词：甘草酸；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
文章编号：1007―2349(2008)05―0045―02
新止咳合剂由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。为本院的医疗机构制剂。质量标准中没有规定含量测定方法。本文参考《中国药典32005年版，采用HPLC法测定甘草的主要成分――甘草酸的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果。
1、仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Agilent 1100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTI.ERAE240型电子分析天平。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。甘草酸铵对照品(批号为110731―200408，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂由本院制剂室配制(批号20070206、20070403、20070428)。
2、方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma钻石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇―0.2mol/L醋酸铵溶液―冰醋酸(63：37：1)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：250nm；进样量：10μl。理论板数按甘草酸峰计算为3000。
2.2溶液的制备 精密称取甘草酸铵对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)44.2mg，置20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL中含甘草酸2.21mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1mL、②0.2mL、③0.5mL、④1mL、⑤2mL、⑥2.5、⑦3mL；分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每1mL含①0.0221mg，②0.048mg，③0.1105mg，④0.22tmg，⑤0.442mg，⑥0.5525mg，⑦0.663mg的对照品溶液。
取新止咳合剂15mL，用正丁醇提取5次(15、15、10、10、10mL)，合并正丁醇层，用水洗3次，每次20mL，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3方法学考察
2.3.1标准曲线和线性范围 精密吸取甘草酸铵对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦各10μ1，分别注入高效液相色谱仪测定。以甘草酸铵对照品含量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为Y＝545.71X＋6.174，r＝0.99998，线性范围为0.221～6.63μg。
2.3.2精密度试验 取同一甘草酸铵对照品溶液④10μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为：1209.7186，1200.4753，1200.41641。1203.3199，1207.5747.1205.7230；积分值平均为：1204.54，RSD＝0.32％。结果表明仪器精密度较好。
2.3.3稳定性试验 取同一供试品溶液(批号为20070428)各10μl，分别于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色谱仪测定，结果供试品溶液峰面积积分值的RSD＝1.2％，表明在24h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配制好后，放置24h内测定均可。
2.3.4重现性试验 取同一批号的新止咳合剂(批号：20070428)，按供试品溶液的制备方法重复操作测定6次，结果平均含量为0.16mg/mL，RSD=1.55％。
2.3.5回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的同一批号(20070428)新止咳合剂(含量为：0.16mg/mL)适量，分别精密加入甘草酸铵对照品适量，按供试品溶液的制备及测定法操作。结果见表1。
2.3.6干扰试验 照上述条件测定新止咳合剂空白(不含甘草药材制成的阴性合剂)制剂，结果在甘草酸色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说明处方中其它药味对甘草中的甘草酸测定无干扰。见图1。
2.4样品含量测定 按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。结果见表2。
3、讨论
甘草酸是甘草中主要的活性成分之一，也是新止咳合剂治疗疾病的重要成分，故选择该物质作为考察指标。因没有甘草酸的对照品，所以采用甘草酸铵对照品测定甘草酸的含量，按0.2mg的甘草酸单铵盐对照品折合甘草酸为0.1959mg的系数计算。本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为新止咳合剂的质量控制方法。
