【www.zhangdahai.com--护士节演讲稿】
【摘要】 目的 初步探讨青蒿琥酯对慢性湿疹患者外周血Th1、Th2细胞表达和IgE水平的影响。方法 慢性湿疹患者外周血T淋巴细胞经过与不同浓度的青蒿琥酯体外培养后，采用ELISA方法检测其上清液IgE水平；用流式细胞仪方法测定其Th1、Th2细胞的变化。结果 ①青蒿琥酯可以抑制慢性湿疹患者外周血淋巴细胞Th1细胞的表达，促进慢性湿疹患者外周血淋巴细胞Th2细胞的表达，而且呈现一定的剂量依赖性；②青蒿琥酯可以抑制慢性湿疹患者外周血淋巴细胞的IgE分泌。结论 青蒿琥酯可以通过调节慢性湿疹外周血患者淋巴细胞Th1、Th2细胞表达，减少IgE的分泌。青蒿琥酯有望成为治疗慢性湿疹的一个新的药物选择。�
【关键词】青蒿琥酯；慢性湿疹；淋巴细胞
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The influence of artesunate on T cell function from chronic eczema patients
GUO Qing，MI Xiang-bin，ZENG Fan-Qin，et al.Department of Dermatology, Second Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangdong 510120, China
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【Abstract】 Objective To investigate the influence of artesunate on T cell function from chronic eczema patients.Methods T cells from chronic eczema patients were cultured with artesunate in defferent level.The IgE level was detected by ELISAmethods and the expression of Th1/Th2 was detected by flow cytometric methods.Results ①Artesunate could decrease the prevalence of Th1 cell and increase the prevalence of Th2 cell in peripheral blood mononuclear cell from chronic eczema patients in different level; ②Artesunate could decrease the secretion ofIgE of peripheral blood mononuclear cell from chronic eczema patients in different level.Conclusion Artesunate could regulate the expression of Th1/Th2 cells and decreased the secretion of IgE of T cells from chronic eczema patients.Artesunate might play an important role in the treatment of chronic eczema in future.�
【Key words】Artesunate; Chronic eczema; Lymphocyte
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随着对青蒿素及其衍生物研究的不断深入，现代研究揭示青蒿素及其衍生物青蒿琥酯、蒿甲醚可能通过影响免疫功能而起到对肿瘤、红斑狼疮、寄生虫感染等疾病的治疗作用[1]。文中就青蒿琥酯(artesunate)在淋巴细胞免疫功能调节方面的作用探讨青蒿琥酯对慢性湿疹患者外周血淋巴细胞免疫功能的影响。�
1 材料与方法�
1．1 单个核细胞的分离 用肝素抗凝管采集1例确诊为慢性湿疹的患者外周血10 ml。用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。用CCK-8活细胞计数试剂盒(日本同仁公司)和台盼兰染色法检测T细胞的活性（所有组均＞95%）。�
1．2 单个核细胞的体外培养 所得约6×10�7～10×10�7个单个核细胞按照1×10�7个细胞/ml的密度接种于含10%胎牛血清（美国Gibco公司）、IL-2(50 U/ml)的RPMI1640培养基（美国Invitrogen公司）。同时分离的单个核细胞另外加入浓度分别为60、30、15、7．5、3．75、0 μg/ml的青蒿琥酯（广西桂林制药厂生产，每支60 mg粉末先用5 %碳酸氢钠溶液1 ml 溶解，再按需要用培养基配制成所需的终浓度）培养24 h。培养结束后用CCK-8活细胞计数试剂盒(日本同仁公司)和台盼兰染色法检测细胞的活性（所有组均＞95%）。�
1．3 流式细胞仪检测分析 培养结束后的淋巴细胞，使用抗表面抗原CD4抗体进行表面抗原染色，经4% PFA固定及皂素破膜处理后、使用抗IFN-γ及抗IL-4细胞因子抗体进行细胞内细胞因子染色，最后进行流式细胞仪检测，区分出CD4+ IFN-γ+ IL-4�- 作为Th1细胞、CD4+ IFN-γ�- IL4+ 作为Th2细胞。同时检测以相同荧光标记的同种型对照免疫球蛋白作为阴性对照。每个样品检测20 000个单个核细胞，计算出其中Th1、Th2细胞百分比用于统计。�
1．4 ELISA法检测IgE水平 人IgE ELISA定量试剂盒为美国R&D公司产品，检测的范围是2～2 500 IU/ml。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。①建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100 μl，第1孔加标准品100 μl，混匀后用加样器吸出100 μl，移至第2孔，如此反复作对倍稀释至第7空，最后，从第7孔中吸出100 μl弃去，使之体积均为100 μl。第8孔为空白对照;② 加样：待测品孔中每孔各加入待测样品100 μl；③将反应板置37℃ 120 min；④洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次，在滤纸上印干；⑤每孔中加入第一抗体工作液50 μl；⑥ 将反应板置37℃ 60 min；⑦洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次，向滤纸上印干；⑧每孔中加入酶标抗体工作液100 μl；⑨将反应板置37℃ 60 min；⑩洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次，向滤纸上印干;�B11� 每孔中加入底物工作液100 μl，置37℃暗处反应5～10 min;�B12�每孔中加入1滴终止液混匀;�B13� 在492 nm处测吸光值。�
1．5 统计学方法 采用SPSS 13．0软件进行统计分析。用比值法比较各组间差异，若比值2为差异有统计学意义。�
2 结果�
2．1 青蒿琥酯对慢性湿疹患者外周血淋巴细胞Th1/Th2表达的影响见表1。青蒿琥酯可以抑制慢性湿疹患者外周血淋巴细胞的Th1细胞表达，促进慢性湿疹患者外周血淋巴细胞的Th2细胞表达。而且从表1可以看出，青蒿琥酯对Th2细胞表达的促进作用和对Th1细胞表达的抑制作用呈现明显的剂量依赖性。�
2．2 青蒿琥酯对慢性湿疹患者外周血淋巴细胞IgE分泌的影响见图1。青蒿琥酯可以抑制慢性湿疹患者外周血淋巴细胞的IgE分泌，而且其对IgE分泌的抑制作用呈现一定的剂量依赖性。�
3 讨论�
青蒿素是从青蒿中提取的含倍半萜内酯类的新一代抗疟疾药，其自问世以来即以高效、速效、低毒的抗疟活性得到世界公认，并广泛运用于疟疾的治疗。青蒿琥酯是我国发现的一种新抗疟疾药,1987 年经卫生部批准。它是从中药青蒿中提纯的有效化合物青蒿素的衍生物之一,为二氢青蒿素的半琥珀酸酯,分子式为C19H18O8,分子量为384．43。对青蒿琥酯免疫作用的研究最初是鉴于它对脑型疟疾有效；而脑型疟疾的发病机制与自身免疫有关，因而学者们推测青蒿琥酯除直接杀灭疟原虫外，可能还具有免疫调节功能[2]。国内的学者们对青蒿琥酯的免疫作用进行了不少的研究，但结论并不一致：有些结果显示它有免疫抑制功能，另有些则提示它有免疫增强作用。实验表明，青蒿琥酯对实验性变应性接触性皮炎具有明显的抑制作用，临床应用于治疗湿疹皮炎类疾病、光变态反应性皮肤病也取得良好疗效。�
湿疹发病机制尚不明确，目前普遍认为存在Th1/Th2失衡，大多数学者均认为是Th1占优势[3]，笔者的研究也发现，本例慢性湿疹患者伴有外周血淋巴细胞Th1细胞的明显增加；而青蒿素可以抑制Th1细胞的表达，促进Th2细胞的表达；而且，随着青蒿琥酯浓度的增加，这种效果更加明显，笔者的研究结果与一项体外研究一致：体外实验显示青蒿琥酯对刀豆素A诱导的小鼠脾细胞分泌白介素-1、白介素-2具有明显的抑制作用；而且其作用有明显的剂量依赖性[4]。笔者的研究还发现，青蒿素能抑制慢性湿疹患者外周血淋巴细胞IgE分泌，其抑制作用也呈一定的剂量依赖性，这一结果亦得到另外一项实验结果的支持，青蒿琥酯可以使狼疮样小鼠血清中增高的IL-6大幅度降低，从而抑制了高表达的IL-6对B细胞活性和自身抗体（包括IgE）产生的促进作用[5]。笔者认为，尽管IgE分泌主要依赖于Th2细胞激活B细胞引起，但也同时受到多种细胞及其分泌的细胞因子等因素的影响，本实验所分离的外周血单个核细胞除淋巴细胞外，还包括有单核细胞及NK细胞等一些其他细胞，这些细胞同样可以分泌多种细胞因子影响IgE的分泌[6]，包括白介素-1、白介素-6、白介素-8、白介素-12、干扰素-γ（INF-γ）、细胞坏死因子α（TNF-α），转化生长因子β（TGF-β）等；一些细胞因子还可以通过对IgG亚类的调节来影响IgE的分泌，如INF-γ可增强IgG2a和IgG3类型的转换，IL-10可促进IgG4合成等，二者均可间接降低IgE的合成[7]。上述研究结果表明，青蒿琥酯对免疫系统的影响，主要表现为抑制作用[8,9]。青蒿琥酯可能主要通过影响细胞因子的分泌，间接阻止淋巴细胞从G1期进入S期，使淋巴细胞增殖反应降低，DNA合成受抑，这可能是青蒿琥酯免疫抑制的重要机制[10]。�
以上研究结果提示青蒿琥酯是一种很有应用前景的免疫调节药物。�
参考文献
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