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【摘要】 目的 白介素-17(IL-17)作为前炎症因子可以导致趋化性细胞因子的增高,从而促进中性粒细胞和单核细胞的募集。本实验通过建立急性肺损伤(ALI)小鼠模型观察IL-17在体内环境下对中性粒细胞凋亡的影响,探讨体内环境下IL-17的变化与血液中性粒细胞的凋亡的关系。方法 雄性C57小鼠30只,体质量22~27 g,随机分为正常对照组(对照组),15只;ALI模型组(模型组),15只,脂多糖(LPS)腹腔注射6 mg/kg、10 ml/kg致急性肺损伤。分别观察小鼠呼吸频率、活动情况及直接光镜观察肺组织血管及肺泡变化情况,中性粒细胞凋亡,淋巴细胞CD3+/4+/8+分类检测,血清IL-17含量的检测。结果 急性肺损伤时小鼠的IL-17的含量(0.10±0.002)pg/L,正常对照组(0.08±0.003)pg/L(P 1.3 取材方法 造模成功后24 h取材,小鼠经眼球摘除法取血,一部分经EDTA抗凝处理后待上流式细胞仪检测,一部分不予抗凝处理,常温下,予离心机内3000转/min,10 min,分离血清,待测。
1.4 测试指标及方法
1.4.1 肺组织直接光镜观察
1.4.2 中性粒细胞凋亡 取抗凝全血100 μl 应用Annexin Ⅴ-FITC凋亡试剂盒(使用方法按试剂说明书进行),经流式细胞分析仪检测,应用CELL Quest多功能主软件获取并分析细胞,在中性粒细胞门内获取一万个细胞,分别记录AnnexinⅤ及PI百分比 。
1.4.3 淋巴细胞CD3+/4+/8+分类检测 取抗凝血100μl,应用Rat anti-Mouse CD4/CD8 mAb, FITC/PE试剂盒(使用方法按试剂说明书进行),经流式细胞分析仪检测,应用CELL Quest多功能主软件获取并分析细胞,在淋巴细胞门内获取1万个细胞,记录CD4+百分比。
1.4.4 IL-17应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-17含量,方法按产品说明书进行。
1.5 统计学方法 应用SPSS 13.0软件进行分析,采用t检验法进行分析,P
