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[摘要] 目的 观察脑出血患者TNF-α蛋白的表达情况,探讨TNF-α蛋白在脑出血患者中表达特点与脑出血时间的关系和意义。方法 应用免疫组化方法检测65例脑出血患者出血灶周围脑组织TNF-α蛋白的表达。结果 65例脑出血灶周边脑组织标本中,TNF-α蛋白阳性表达率为84.6%(55/65),10例正常脑组织中TNF-α蛋白阳性表达率为0(0/10),两者比较有显著性差异(P24h 88.9%(16/18),出血组之间比较无差异(P>0.05)。结论 脑出血急性期血肿周围组织存在TNF-α高表达,且有大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞、淋巴细胞为主。TNF-α参与了脑出血脑水肿的病理生理过程,从而加重血肿周围脑组织的损害。
[关键词] TNF-α蛋白;脑出血;免疫组化
[中图分类号] R743.34 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)06-36-02
TNF-αExpression in Intracerebral Hemorrhage and Its Clinical Significance
YANG Yanli1WEI Maofu2LIU Jingwen2
1. Third Department of Medicine, Dongguan Municipal Humen Hospital,Dongguan 523900,China;2. Department of Pathology,Dongguan Municipal Humen Hospital,Dongguan 523900,China
[Abstract] Objective To investigate the expression of TNF-α in intracerebral hemorrhage(IHC) and find out its significance and its correlation with the time of intracerebral hemorrhage.Methods The TNF-αexpression was assessed by immunohistochemistry staining.Results In 65 cases of intracerebral hemorrhage,the positive expression rate of TNF-α was 84.6%(55/65) and in 10 cases of normal brain tissue, it was 0(0/10), significantly higher in intracerebral hemorrhage than that in normal brain tissue(P0.05).Conclusion The high TNF-αexpression appears in the surrounding tissue of cerebral hematoma after acute cerebral hemorrhage with a large number of inflammatory cell infiltration in it,mainly leukocyte and lymphocyte infiltration.TNF-α may be involved in the pathophysiologic process of brain edema after intracerebral hemorrhage,therefore,aggravating brain damage around hematoma.
[Key words] TNF-α;Intracerebral hemorrhage;Immunohistochemistry
脑出血(ICH)是神经内科很常见的疾病,死亡率和致残率较高。目前,脑出血导致脑水肿的发病机制尚未完全明了。很多学者认为导致脑水肿的原因与炎性因子密切相关,其中包括肿瘤坏死因子(TNF-α)。有研究表明TNF-α在脑损伤后表达升高,其升高程度与脑损伤严重程度关系密切[1]。我们采用免疫组织化学技术对65例脑出血患者和10例正常脑组织中TNF-α表达的情况进行研究,探讨TNF-α在脑出血灶周的表达特点及意义。
1材料与方法
1.1标本来源
收集陕西省延安市人民医院和延安大学附属医院2003年1月～2006年12月期间进行手术清除血肿的脑出血患者65例,男28例,女37例,年龄25～83岁,平均48.6岁。手术时机:发病24h内手术者47例,24h后手术者18例,正常脑组织10例取自同期住院进行颅内减压的患者。所有的病人入院时均行头颅影像学检查进行证实。
1.2试剂及免疫组化染色方法
鼠抗人TNF-α单克隆抗体、抗体稀释液及试剂盒均购自基因公司。其稀释度为1∶50。所有标本均用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,4μm连续切片,按二步法进行免疫组化染色,染色前标本切片进行抗原修复处理,一抗在室温孵育1h,二抗在室温下孵育0.5h,DAB显色,苏木素复染。用已知阳性的对照片作TNF-α抗体的阳性对照,用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 判断标准
所有免疫组化片子用奥林帕斯BX50显微镜进行定性和半定量评估。请三个高职称病理医生在不知道临床信息的情况下独立的对所有免疫组化片子进行评估。阳性判断标准为细胞核或胞质出现黄色或棕黄色颗粒状,并用阳性片作为对照。每张切片随机选择10个视野,40×10高倍显微镜下观察计数。参照文献[2]:根据染色强度、阳性细胞百分比分别记分:A:染色强度:不着色为0分,淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。B:阳性细胞所占百分率:75%为4分。根据染色强度与阳性细胞百分比得分之积分为4级,即(-)为0分,弱阳性(+)为1～2分,阳性(++)为3～4分,强阳性(+++)为5～6分。将A×B作为其染色的计数,只有A×B >3分才算免疫反应阳性,并按乘积分数将染色结果分为4个等级:-(0～2分)、+(3～5分)、+ +(6～8 分)和+ + +(9～12分)。
1.4 统计学方法
统计学处理应用SPSS10.0软件进行χ2检验和Fisher确切概率法,P 2结果
TNF-α主要表达于胞质中。出血灶边缘及坏死区表达明显增多。65例脑出血灶周脑组织TNF-α表达的阳性率为84.6%(55/65);10例正常脑组织TNF-α蛋白表达全部呈阴性(0/10),二者比较有显著性差异(P0.05)。见表1。
3讨论
很多细胞都能产生和分泌肿瘤坏死因子,按照其来源的不同,Shalaby在1985年将其分为TNF-α和TNF-β两个类型,TNF-α主要由巨噬细胞激活后分泌。肿瘤坏死因子的产生经过启动以及分泌两个阶段[3]。脑出血后继发的炎症反应在脑缺血损伤中有重要的地位,炎症反应在脑出血损伤中的作用受到广泛关注。肿瘤坏死因子(TNF-α)在介导此类炎症反应中有很重要的作用,Xue等[4]研究表明,脑出血发病后病灶中出现较多中性粒细胞浸润,渗出的中性粒细胞可以释放多种细胞因子,例如IL-6、TNF-α等,这些细胞因子加重血肿周围神经元细胞损伤。Mayne等[5]实验表明,抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达和中性粒细胞的浸润,可以减少血肿内和周围的神经细胞凋亡。肿瘤坏死因子-α是一种多效性的促炎症因子,在触发炎性反应和神经元细胞损伤中处于重要地位。本研究表明,出血急性期血肿周围组织存在TNF-α高表达,而且有大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞和淋巴细胞为主。由此我们认为TNF-α参与了脑出血脑水肿的病理生理过程,加重了血肿周围的脑组织损害,浸润脑组织的炎细胞产生的炎症介质通过复杂的反应引起神经元细胞的损伤,其机制可能是肿瘤坏死因子直接促进中性粒细胞向出血灶聚集,释放更多的炎症介质,从而加重脑出血后的脑损伤。
[参考文献]
[1] Castillo J,Moro MA,Blanco M,et al. The release of tumor necrosis factor-alpha is associated with ischemic tolerance in human stroke[J]. Ann Neurol,2003,54(6):811-819.
[2] Liu WH,Kaur M,Wang G,et al. Inverse PCR-based RFLP scanning identifies low-level mutation signatures in colon cell and tumors[J]. Cancer Res,2004,64:2544-2551.
[3] Gong C,Hoff JT,Keep RF. Acute inflam matory reaction fo11owing experimeantal intracerebral hemorhage in rat[J]. Brain Res,2000,87(1):57.
[4] Xue M,Del Bigio MR. Intracerebral injection of autologous whole blood in rats: time course of inflammation and cell death[J]. Neurosci Lett,2000,283(3):230-232.
[5] Mayne M,Fotheringham J,Yan HJ,et a1. Adenosine A2A receptor activation reduces proinflammatory events and decreases cell death following intracerebral hemorhage[J]. Ann Neurol,2001,49(6):727- 735.
(收稿日期:2009-12-09)
