【www.zhangdahai.com--常用文书】
摘 要：目的：探讨不同检测方法对女性生殖道支原体感染检测上的优缺点。方法：对我院2006年1月～2008年1月就诊的320例女性患者的泌尿生殖道分泌物标本采取支原体培养法和荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)的检测方法，比较两种方法的检测结果。结果：支原体培养法的阳性检出率为38.1%，FQ-PCR的阳性检出率为27.5%，两种方法的检测结果差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：FQ-PCR解决了目前病原体检出率低、周期长、特异性差等缺点，且克服了常规PCR技术假阳性率高的缺陷。
关键词：生殖道支原体感染；荧光定量-聚合酶链反应；支原体培养
中图分类号：R518.9文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）09-0097-02
支原体引起生殖道感染的发病率近年呈上升趋势，解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)是引起泌尿生殖道感染的主要病原体，尤其是Uu。正确检测是否为支原体感染是诊断性传播疾病及治疗的重要方法之一。本文主要采用两种方法对我院320例女性患者的泌尿生殖道支原体感染进行了检测，进一步比较报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2006年1月～2008年1月在我院就诊的320例女性患者的泌尿生殖道分泌物标本；年龄16～72岁，平均34.5岁；病程3个月～1年；患者本人或其配偶有非婚性交史，有不同程度的尿道炎或宫颈炎症状；患者一周内均未使用过任何抗菌药物。
1.2 检测及方法
1.2.1 支原体培养法
试剂由珠海益民生物工程有限公司提供的支原体培养试剂盒。阴道窥器扩张后，用无菌棉拭子插入女性宫颈1～1.5cm，转动5～10s后，将分泌物或棉拭子浸入支原体培养液中，充分振洗，洗脱样品，转种于Uu和Mh药敏检测板，滴加矿物油。置37℃恒温箱培养24～72h，观察结果。培养液由淡黄色变为红色，保持澄清透明为支原体生长，为阳性，未变色为阴性，混浊为检验失败。必要时以显微镜高倍镜下镜检确定。
1.2.2 FQ-PCR法
仪器采用德国罗氏公司LightCycler荧光PCR仪。试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供。所有试剂均在有效期期内使用。将标本15000r/min转速下离心10min，弃上清液，加40μL裂解液，旋涡震荡30s，混匀沉淀物，煮沸5min，离心10000r/min，时间为2min，取4μL上清液，于0.2mL反应管中，分别加入各种FQ-PCR试剂，设置不同浓度的阳性对照和阴性对照，离心数秒后置入脱氧核糖核酸(DNA)扩增仪中反应。经变性、退火、延伸共32个循环结束反应。工作结束仪器自动计算出样品中DNA的拷贝数，病原体菌量≥10�3copy/mL定为阳性，结果＜10�3copy/mL或未能检出定为阴性。
1.3 统计学方法
使用SPSS13.0统计软件进行统计分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
两种方法的检测结果差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。支原体培养法阳性例数及分型情况见表2。
3 讨论
泌尿生殖道感染是一种较常见的感染性疾病，其主要通过不洁性行为及性乱等方式传播。支原体是一类介于细菌与病毒之间，能在无活细胞培养基上生长的最小原核细胞型微生物，属于柔膜体纲，它分布广泛，种类繁多，显微镜下很难看到，目前已被认为是人类生殖道常见且有致病作用的病原体。目前从人类分离的16种支原体中，有5种对人体有致病性，其中Uu、Mh为临床最常见的人体致病支原体，可引起一系列男女泌尿生殖系统疾病，甚至影响胎儿生长发育［1］。尤其是Uu感染除了引起非淋菌性尿道(宫颈)炎外，还与慢性前列腺炎、附睾炎、阴道炎、输卵管炎、盆腔炎、不育不孕、习惯性流产、子宫颈炎等有关［2］。女性生殖道被支原体感染后症状轻微或无症状，常被忽视，快速准确地培养Uu和Mh是临床诊断泌尿生殖道支原体感染的重要方法。
近年来，随着免疫学、微生物学、分子生物学诊断技术的发展，检测生殖系统支原体感染已由培养法、快速免疫法、PCR法发展到FQ-PCR法。支原体液体培养基根据Uu及Mh的生长特性，把培养及生物化学反应相结合，Uu分解脲素产氨，Mh分解精氨酸也产氨均可使培养基变碱而变红色，由于支原体大小仅200nm，且培养基中加入抗生素能有效抑制大多数细菌生长，阳性结果应在48h内变红色且不浑浊。支原体液体培养法虽然特异性高，但不灵敏，而且培养基来源困难，配制繁琐，不易长时间保存，培养鉴定步骤较多，培养周期较长。FQ-PCR是一种对病原体DNA进行检测的新技术，具有较高的灵敏度和特异性，临床上已广泛应用。其原理是以常规PCR方法进行体外扩增为基础，利用Taq酶具有5’-3’外切酶活性，在上下游引物之间添加一条与靶序列特异结合的探针，这条探针的5’-3’端分别标记了荧光报告基团(R)和荧光淬灭基团(Q)，当探针保持完整时，R基团的荧光信号被Q基团所淬灭，一旦探针被切断，R基团的荧光信号就可以被荧光监测系统检测出［3］。近年来，有研究者将常规培养法与FQ-PCR进行了方法学比较［4］，认为FQ-PCR克服了培养法敏感性低、阳性率低以及费时费力的缺点，是泌尿生殖道支原体感染的病原学诊断较理想的方法。从本次研究结果中可以看出，支原体培养法比FQ-PCR法检出率更高。培养法不需要特殊设备，技术操作简单。FQ-PCR法有其优点，是在闭管状态下进行扩增和产物分析，无需电泳和染色及紫外观察，极大地减少了扩增产物的污染，很少因扩增产物污染带来假阳性，同时也避免了有害化学物质对人体的危害［5］，且报告结果快、敏感性和特异性较高，是一种较好的分子生物学检测方法。但FQ-PCR的开展需要有特定的条件，不规范的实验室操作会导致错误的结果(假阳性或假阴性)，而且不能区别死菌和活菌，不能作为判断痊愈的指标。所以FQ-PCR法对于临床仅有鉴定意义，没有判断疗效的意义。
综上所述，FQ-PCR解决了目前病原体检出率低、周期长、特异性差等缺点，且克服了常规PCR技术假阳性率高的缺陷，但其对临床仅有鉴定意义，没有判断疗效的意义，所以我们建议在临床中对支原体检测以培养法为主，FQ-PCR和其它方法为辅。
参考文献：
［1］ 陈红，吴明.沙眼衣原体和解脲支原体感染的女性生殖道炎症临床分析［J］.中国微生态学，2003，15(3)：169-170.
［2］ 万琼.FQ-PCR检测解脲支原体及其药物敏感试验的临床应用［J］.江西医药，2003，38(3)：216-217.
［3］ 林寿榕，陈建森，陈静.荧光PCR法检测泌尿生殖道沙眼衣原体、解脲支原体感染［J］.宁夏医学，2003，25（8）：483-484.
［4］ 李燎，钟桂书，颜丹.解脲支原体3种检测方法比较研究室［J］.泸州医学院学报，2006，29(2)：121-123.
［5］ 邹先进，罗凯，蔡兰.实时荧光定量聚合酶链反应检测解脲支原体感染［J］.中国皮肤性病学，2001，15(3)：183-184.
（责任编辑：姜付平）
