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[摘要] 本文介绍了色谱法在中药指纹图谱研究中的应用，并对高效液相色谱法和气相色谱法在构建中药指纹图谱中优势作以介绍，综述了近年此3种方法的应用进展，并介绍了中药指纹图谱在2010版《中国药典》中的应用情况。
[关键词] 指纹图谱；色谱；中药；中国药典
[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）01（a）-016-02
Application of chromatography in the study on traditional Chinese medicine fingerprint
CAO Ling, WANG Zhigang, WANG Lianzhi
College of Pharmacy of Heilongjiang Chinese Medicine University in Heilongjiang Province, Harbin 150040, China
[Abstract] Application of chromatography in the study on TCM fingerprint was reviewed. The advantage and latest usage of HPLC and GC on construction of TCM fingerprint together with its application in Chinese Pharmacopeia (2010) were also introduced.
[Key words] Fingerprint; Chromatography; Traditional Chinese medicine; Chinese pharmacopeia
中药材指纹图谱系指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱[1]。美国食品与药品管理局（FDA）关于植物药物质和植物药产品的质量控制部分鉴别项下就包括指纹图谱[2]，世界卫生组织（WHO）在其草药评价指南中，对植物药制品和最终产品要求若有效成分不能鉴别，可提供特征成分或混合成分即色谱指纹图谱鉴别来保证产品质量的一致性[3]。我国于2000年国家药品监督管理局颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》[1]，自此，指纹图谱的研究进入了蓬勃时期，特别是在新版药典2010《中国药典》一部中，根据中医学理论和中药成分复杂的特点，建立了能反映中药整体特性的色谱指纹图谱方法，以保证质量的稳定、均一[4]。色谱指纹图谱分析将是鉴别中药真实性及评价质量一致性和产品稳定性的实际可行的模式[5]。
中药指纹图谱的测定方法很多，主要包括色谱法、光谱法和生物学法。在这些测定方法中，色谱法的应用最广泛，特别是气相色谱法和高效液相色谱法，是当前研究中药指纹图谱时优先考虑的方法。
1 气相色谱法
气相色谱法具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、检测器类型可选性大等特点，气相色谱法可以分析气体样品，也可分析易挥发或可衍生化为易挥发的液体和固体。只要沸点在500℃以下，热稳定性好，相对分子质量在400以下的成分，原则上都可用气相色谱法进行分析，尤其适用于含挥发性成分的中药指纹图谱研究。气相色谱法与高效液相色谱相较而言，具有分离效能高特别是毛细管气相色谱，色谱柱长度可达100 m，使其理论塔板数能达100多万，能够分离一些分配系数很接近的以及极为复杂、难以分离的物质，特别符合中药及制剂指纹图谱研究的要求。由于气相色谱法使用了灵敏度很高的检测器，可以检测10-13～10-11 g物质，适合于痕量分析，如中药中的农药残留量的指纹图谱检测。
近年来，随着科学技术的发展，出现了很多实用性更强的技术，如裂解气相色谱法、顶空气相色谱法、毛细管气相色谱法以及气相色谱-质谱联用（GC-MS）、气相色谱-傅里叶变换红外光谱（GC-IR）联用技术等。如陈卫东等[6]建立了离线裂解-气相色谱-质谱联用法（P-GC/MS）研究中药指纹图谱的测定方法。陈丽娟等[7]采用GC-MS法建立了麝冰菖喷雾剂GC-MS指纹图谱。陈成等[8]采用顶空-固相微萃取（SPME）技术直接提取辛夷中的挥发性成分，并进行了气相色谱分析，建立了辛夷气相色谱指纹图谱。
在2010版《中国药典》一部中，建立了能反映中药整体特性的色谱指纹图谱方法，其中满山红油采用毛细管气相色谱法进行检测，标准中规定了其特征图谱，并且给出了特征对照图谱。薄荷素油也是采用毛细管气相色谱法进行检测，在标准中规定了其指纹图谱，并规定按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不低于0.90[4]。
2 高效液相色谱法
高效液相色谱法具有灵敏度高、选择性高、高速度、高效能、检测器种类多和应用广泛等特点。与气相色谱法相较而言，高效液相色谱法最大的优势在于其供试品不受样品蒸汽压和热稳定性的限制，适用范围非常广，而且高效液相色谱仪比气相色谱仪更普及，目前已成为建立中药指纹图谱的最常用方法。高效液相色谱法的检测器在构建中药指纹图谱中具很大优势，如光电二极管阵列检测器（DAD）可将色谱峰的保留时间和光谱信息整合在1张图谱中，能够得到三维谱图，适合分析成分复杂且有紫外吸收的样品，而中药中的活性成分如黄酮、蒽醌等大多数成分均有紫外吸收，因此DAD非常适合中药成分的检测。此外，LC-MS和LC-MS-MS等联用技术的应用，使得高效液相色谱法的分辨率和实用性显著提高，更有利于中药这一复杂样品的分析。再有近几年出现了一种新的液相色谱技术―超高效液相色谱法（UPLC），该法能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度，适合中药复杂样品的分析及构建中药的指纹图谱。
如卢红梅等[9]采用均匀实验设计和信息理论评价的方法，建立鱼腥草中黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱的分析方法。李蓓佳等[10]利用液相-二极管阵列-质谱联用（LC-DAD-MS）技术，在通脉颗粒中鉴定了22个化合物，且归属了各化合物的单味药来源。张铁军等[11]采用HPLC-DAD技术建立了清咽滴丸极性部分的HPLC指纹图谱。王洪兰等[12]采用高效液相色谱-二极管阵列-蒸发光散射检测方法，建立瓜子金药材的指纹图谱。刘卉等[13]采用超高效液相色谱（UPLC）法，建立香丹注射液UPLC-UV指纹图谱。
在2010《中国药典》一部中，应用高效液相色谱法进行指纹图谱测定的植物油脂和提取物非常多，如莪术油、积雪草总苷、丹参酮提取物、丹参总酚酸提取物、三七总皂苷和三七三醇皂苷都需测定指纹图谱。而茵陈提取物、肿节风浸膏、连翘提取物、山楂提取物、人参总皂苷和人参茎叶总皂苷均需测定特征图谱。有一些中药制剂如注射用双黄连、复方丹参滴丸等也需测定指纹图谱。供试品指纹图谱按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，与对照指纹图谱的相似度不低于0.90或0.95[4]。
3 小结
用于中药指纹图谱分析的色谱法还包括薄层色谱法、高效毛细管电泳（HPCE）、高速逆流色谱（HSCCC）及超临界流体色谱（SFC）等方法，这些方法也越来越多的被研究学者所采用。随着现代分析手段与科学技术的迅速发展，中药指纹图谱技术将会进一步规范和成熟，特别是2010版《中国药典》中将指纹图谱和特征图谱引入到中药的质量标准中，使指纹图谱更加得到药学工作者的重视，中药指纹图谱在中药质量控制中的广泛应用，定将加速中药与国际天然药物研究先进水平接轨，从而推动中药产业现代化的进程。
[参考文献]
[1] 国家药品监督管理局.关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的通知[J].中成药,2000,22(10):671.
[2] FDA. Guidance for Industry-Botanical Drug Products(Draft Guidance)[S].2000:Ⅷ,B,2e,3e.
[3] WHO.Guidelines for the Assessment of Herbal Medicines[S].1996.
[4] 国家药典委员会.中国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社,2010.
[5] 谢培山.色谱指纹图谱分析是中草药质量控制的可行策略[J].中药新药与临床药理,2001,12(3):141-151.
[6] 陈卫东,詹庆丰,吴萍,等.裂解-气相色谱-质谱法对中药材指纹图谱的研究[J].质谱学报,2007,28(2):65-72.
[7] 陈丽娟,唐洪梅.麝冰菖喷雾剂气相色谱-质谱的指纹图谱研究[J].海峡药学,2009,21(11):37-38.
[8] 陈成,杨敏,吴宁华,等.辛夷指纹图谱的顶空固相微萃取气相色谱联用初探[J].湖北中医药大学学报,2011,13(3):37-38.
[9] 卢红梅,彭丽华,郭方遒,等.鱼腥草中黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱分析[J].色谱,2010,28(10):965-970.
[10] 李蓓佳,向诚,杨秀伟,等.应用高效液相色谱-质谱联用技术研究通脉颗粒的指纹图谱[J].药学学报,2010,45(11):1410-1414.
[11] 张铁军,韩世柳,田成旺,等.清咽滴丸极性成分的高效液相指纹图谱及其模式识别的研究[J].中草药,2010,41(8):1282-1285.
[12] 王洪兰,姚卫峰,朱丹妮,等.不同来源瓜子金药材的HPLC-DAD-ELSD指纹图谱和主成分分析[J].中国天然药物,2010,8(5):343-348.
[13] 刘卉,姚卫峰,张丽,等.基于超高效液相色谱指纹图谱轮廓的香丹注射液相似度快速评价[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(12):48-50.
（收稿日期：2011-11-09）
