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【摘要】 目的比较初发和复发生殖器疱疹患者NK、LAK细胞活性和T细胞亚群的变化,探讨免疫功能与生殖器疱疹初发及复发之间的关系。方法 对复发组、初发组的患者及正常对照组人群,检测NK和LAK细胞活性和T细胞亚群。结果 初发组和复发组的NK活性比正常组分别降低了28.2%和27.6%,经统计学处理有显著性或极显著性差异(P0.05)。与初发组与复发组之间的CD+4、CD+8及CD+4/CD+8有显著性差异(P0.05)。
1.2 方法
1.2.1 NK和LAK细胞活性的测定[2]按常规用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,用RPMI1640培养液洗涤3次,调整细胞密度为5×10-9�/L,加入IL-2(终浓度为500 ml/L)培养72 h,即可诱生出LAK细胞。以K562细胞(本室保存)作为靶细胞,采用LDH释放法测定NK和LAK细胞的杀伤活性。
1.2.2 T细胞亚群检测 由美国BD公司提供的FACSCalibur型号的流式细胞仪测定,所用鼠抗人CD-FITC、CD4-PerCP、CD-PE及对照管PE/IgG1-FITC/IgG单克隆抗体均购自美国BD公司。由化验室专人检测,每份标本均做各项测定管和阴性对照管。操作步骤如下:①EDTA抗凝血2 ml;② 准备4支试管,每管各加入相应单克隆抗体10 μl,全血100 μl混匀,避光15 min;③加溶血素2 ml避光10 min。④300 g/r离心10 min,倾去上清液,加2 ml PBS洗1次。⑤每管加l%多聚甲醛0.5 ml。上流式细胞仪检测,收集10000个以上细胞。用计算机分析测定结果。
1.2.3 统计学方法 所得数据以(x±s)表示,采用SPSS 11.0软件进行方差分析。
2 结果
2.1 3组NK和LAK细胞活性的变化 结果见表1。初发组和复发组的NK活性比正常组分别降低了28.2%和27.6%,经统计学处理差异有统计学意义(P0.05)。与初发组与复发组之间的CD+4、CD+8及CD+4/CD+8比较差异有统计学意义(P90%)。人体感染HSV-2后,病毒可长期潜伏于骶神经节中,当宿主受外伤、细菌感染、月经来潮、精神创伤、劳累及免疫受抑制等情况下,病毒可以复苏和再激活,由神经节返回经常受累部位的皮肤黏膜而出现感染复发[3],而免疫抑制或免疫缺陷可导致HSV再活动频繁[4]。由于HSV-2在人体内不产生永久性免疫,同时又可逃避宿主的防御机制,所以,由于原发感染后,当有焦虑、紧张、劳累、性生活过度、月经期、酗酒等诱因时或内分泌紊乱、应激状态等情况下,病毒被激活复制而引起该病反复发作,平均年复发5～8次。近年来,此病的发病率迅速增加,WHO估计全球每年新发生殖器疱疹病例为2000万。根据国内报道,该病已在我国存在并在性传播性疾病中占有一定的比例[5]。人体HSV-2感染后抗体的产生对消除病毒血症及限制病程起一定的作用,但不能预防感染复发,说明细胞介导的免疫似乎起着明显决定作用,而抗体反应则相对次要。
研究已经表明,本病的发生、发展与机体的免疫状态,特别是与细胞免疫功能有着密切的关系[6]。NK细胞是机体免疫系统的重要组成部分,是机体抗病毒感染的第一道防线,可直接非特异性杀伤病毒感染的靶细胞,可诱导病毒凋亡;并可分泌IL-2和IFN-γ等,发挥其免疫增强作用[7]。LAK细胞来源于NK细胞,其杀伤活性远高于NK细胞。NK细胞和LAK细胞活性降低一方面减弱了直接对病毒的杀伤作用,另一方面间接减弱了特异性T细胞介导的消除HSV的免疫应答,从而造成HSV的复制和扩散,进而导致疾病反复发作,可能是生殖器疱疹发作和不断复发的重要原因之一。T淋巴细胞是机体免疫系统最重要的一大细胞群,在正常机体内各T淋巴细胞亚群相互作用,维持着机体正常的免疫功能,当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时,可导致机体免疫紊乱,造成对病原微生物的易感性增高。
笔者发现患者的外周血NK细胞和LAK细胞所占比例显著低于正常对照组,且复发患者外周血NK、LAK细胞所占比例显著低于初发者,患者的外周血T细胞总数和正常对照组比较差异无统计学意义,而CD+4细胞、CD+8细胞所占的比例以及CD+4/CD+8和正常对照组比较差异有统计学意义,表明患者外周血NK、LAK细胞下降及T细胞亚群的变化可能是导致生殖器疱疹患者发病及复发的原因之一,因此监测NK细胞、LK细胞和T细胞亚群的变化,可为临床早期病情的判断及治疗提供依据。
参 考 文 献
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[3] 赵辨.临床皮肤病学.江苏科学技术出版社,2001:541-546.
[4] 马黎民,李亚,孙丽.复发性生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测分析.岭南皮肤病学,2005,12 (3):213-214.
[5] 赵胜光,俞丽珍,周常富,等.高危人群生殖器疱疹的血清流行病学调查分析.中国实用医药,2007,2(35):42-43.
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[7] Giron-Gonzalez JA , Moral FJ , Elvira J , et al . Consistent production of a higher Th1:Th2 cytokine ratio by stimulate T cells in men compared with women.Eur J Endocrinol,2000,143 : 31-37.
