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关键词：虫草参芪口服液；质量标准；含量测定 中图分类号：R927.11 文献标识码：A 文章编号：1007-2349(2008)02-0038-02
虫草参芪口服液由冬虫夏草、黄芪、丹参、人参、麦冬等组成。具有补气养血、益。肾助阳之功效，用于气血亏虚、肾阳不足所致的气短懒言，身倦乏力，头晕眼花等症。为制定本品质量标准，本实验应用TLC法对本品中主要药物进行了定性鉴别，并用薄层扫描法测定了本品中主要有效成分黄芪甲苷的含量。结果表明该法稳定可行，回收率高，重现性好，适宜作为虫草参芪口服液的质量控制方法。
1、仪器与试药
1、1仪器CS-9301型双波长薄层扫描仪(日本岛津公司)；CQ-500J型超声波仪(上海超声波仪器厂)；PBQ-I型薄层铺板仪(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(美国Drummond公司)。
1、2试药
薄层层析用硅胶G(德国Merck)；黄芪甲苷、原儿茶醛及人参皂苷Rg1、Re对照品(中国药品生物制品检验所)；虫草参芪口服液(青海三普药业股份有限公司)；其他试剂均为分析纯。
2、定性鉴别
2、1枸杞的鉴别
取本品10ml，加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣用醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15min，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯提取2次，每次15ml，合并提取液，蒸干，残渣用醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯―氯仿―甲酸(3：2：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2、2人参的鉴别 取本品50ml，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用3倍量氨试液提取2次，弃去氨液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗2次，每次30ml，蒸干正丁醇液，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取人参对照药材粉末1g，加乙醚40ml，加热回流1h，弃去乙醚液，药渣挥干，用水0.5ml拌润，加水饱和的正丁醇10ml，超声提取30min，吸取上清液，加3倍量氨试液(40～100)摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取按处方量及制备工艺制备的虫草参芪口服液空白(缺人参药材)，同法制成阴性对照溶液；另取人参皂苷Rgl对照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液、人参皂苷Re对照品加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液6μl、阴性对照溶液10μl、对照品溶液各2μl和对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿―醋酸乙酯―甲醇―水(15：40：22：10)10℃下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点。而阴性色谱中无相应斑点出现。
2、3丹参的鉴别
取本品10ml，用稀盐酸调PH值至2，用醋酸乙酯提取3次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材1g，加水适量煮沸30min，放冷，滤过，滤液加水至10ml，用稀盐酸调PH值至2，加醋酸乙酯提取2次，每次15ml，合并醋酸乙酯液，蒸至1ml，作为对照药材溶液；另取按处方量及制备工艺制备的虫草参芪口服液空白(缺丹参药材)，同法制成阴性对照溶液；另取原儿茶醛对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液10μl、阴性对照溶液10μl、对照品溶液1μl和对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿―醋酸乙酯―苯―甲酸(5：6：3：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％FeCl3乙醇试液，吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同一蓝色的斑点。而阴性色谱中无相应斑点出现。
3、含量测定
3、1测定条件的选择
精密量取虫草参芪口服液30ml及阴性口服液(缺黄芪药材)30ml，分别用水饱和的正丁醇提取5次(30，30，25，20，10ml)，合并正丁醇液，用氨试液洗3次(30，20，20ml)，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水3～5ml使溶解，过D101大孔吸附树脂柱(d：1.5cm，L：12cm)，先后以水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇60mL洗脱，收集70％乙醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分别作为供试品溶液及阴性对照溶液。另精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层扫描法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，精密吸取供试品溶液10μl、阴性对照溶液10μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿―甲醇―水(13：6：2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的洁净玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：λs=530nm，λR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值。阴性溶液无干扰。
3、2线性化范围的考察
精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(1.02mg/ml)2μl、4μl、6μl、8μl、10μl点子同一硅胶G薄层板上，按上述色谱条件进行测定，以点样量(μg)对积分值(A)作图，得一不过原点的直线，结果见表1。
3、3稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述色谱条件，间隔不同时间进行测定，结果见表2。
结果表明：黄芪甲苷在150分钟内积分值基本稳定。
3、4精密度试验
精密吸取同一对照品溶液2μl，点于同一硅胶G薄层板上，按上述色谱条件进行测定，结果见表3。
3、5重复性试验
精密吸取同一供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述色谱条件进行测定，结果见表4。
结果表明：黄芪甲苷重复性试验良好，符合定量分析要求。
3、6加样回收率试验
取本品约12g，精密称定，加适量黄芪甲苷对照品，按照正文中(含量测定)项下方法进行处理样品及测定，计算回收率，结果见表5。
结果表明：黄芪甲苷回收率试验良好，符合分析要求。
3、7样品含量测定
取3批样品，按正文中(含量测定)项下条件进行测定，结果见表6。
4、讨论
本文中方法专属、灵敏，也可供含黄芪药材的其他中药制剂之借鉴。关于黄芪甲苷的提取方法有溶液萃取法、回流提取法及超声提取法等，因本品为口服液体制剂，可采用直接萃取法进行提取。因为皂苷类成分在含水正丁醇中溶解性好，故本文采用含水正丁醇直接萃取，提取效率最高。
