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摘 要：目的：建立当归片的质量标准。方法：采用薄层色谱法对当归片中的当归进行鉴别；用高效液相色谱法对制荆中的阿魏酸进行定量分析。结果：薄层色谱条件为硅胶G薄层板，展开剂石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(4：1)，样品、对照品和对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；测定阿魏酸的色谱条件是Agilent ZORBA SB C18色谱柱(4.6×150mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液(12：88)；检测波长为322nm，流速1.0ml／min，柱温为30℃。阿魏酸在0.12～2.0pg范围呈良好的线性关系，r=0.9995(n=7)，平均回收率为98.96％，RSD为1.09％。结论：所建立的方法可准确地进行定性和定量检测，该法准确、可靠、重复性好，可有效控制当归片的质量。
关键词：当归片；薄层色谱法；高效液相色谱法；阿魏酸；质量标准
中图分类号：R927．11 文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2008)01-0033-02
当归片为当归的浸膏制剂，具有补血活血，调经止痛的功能。用于血虚引起的面色萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，肠燥便秘。该制剂质量标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂中，但标准中无鉴别和含量测定项，检验工作中发现不同厂家的生产的产品片心质地不同，质地疏松的片心肉眼及显微镜下均能看到较多的植物组织，说明这类药品非完全是浸膏片，有掺药材原粉的现象，应增加定量分析来进行控制。本实验采用薄层色谱法进行鉴别，用高效液相色谱法来控制当归片中阿魏酸的含量，以达到定量的目的。结果表明，本法操作简便，准确度高、省时、快速，可用于该药品的质量控制。
1 仪器与试药
1．1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，包括G1315A／BDAD检测器，G1313A ALS自动进样器，Agilent 1100色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；梅特勒电子天平AE240(瑞士)；SZ-97自动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；超声波清洗器(上海科导超声仪器公司)。
1．2 试药 甲醇、乙腈(色谱纯)、水(重蒸馏纯净水)、阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0856-200532)、当归对照药材(市售，由大理学院药学院生药学教研室鉴定)、当归片(四川乐山大干药业有限公司，批号：060486；江西青风制药厂，批号：20060428)。
2 方法与结果
2．1 薄层色谱鉴别 取供试品10片，去除糖衣，研细，加石油醚30ml，超声处理20min，过滤，滤液置蒸发皿中在水浴上挥干，残渣用甲醇2ml溶解作为供试品溶液，另取阿魏酸对照品，加甲醇配成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；再取当归对照药材2g，研细，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，分别吸取上述3种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上(10cm×20cm)，以石油醚(30～60℃)～醋酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，凉干。置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中在与对照品和对照药材色谱相同的位置上显相同颜色的斑点，见图1。
2．2 含量测定
2．2．1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBA C18(4.6×150mm，5ptm)，流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(体积比为12：88)，流速：1.0ml／rain，柱温：30℃，检测波长：320nm，进样量：10μl，理论塔板数大于5000。阿魏酸对照品、当归对照药材和当归片的HPLC色谱图见图2。
2．2．2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的阿魏酸对照品5.0mg，置50ml的量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为储备液。再将该母液用流动相稀释配制成不同浓度的对照品溶液，备用。
2．2．3 供试品溶液的制备取供试品当归片10片，去除糖衣，精密称定，求出平均片重，研细。精密称取约1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，精密称定，超声处理30min，放冷，再称定重量，并用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液10μl进样。
2．2．4 标准曲线和线性范围 取2．2．2节中制备好的阿魏酸对照品标准溶液，分别用甲醇稀释成浓度为0.2．0.16，0.12，0.08，0.04，0.02，0.012mg／ml的标准溶液，按2．2．1节选定的色谱条件，每次进样10μ1，测定阿魏酸的峰面积，以进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=3212.1X+16.561，r=0.9995，结果表明进样量在0.12～2.0gg范围内线性关系良好。
2．2．5 精密度试验和稳定性试验 精密吸取阿魏酸对照品溶液(0.02mg／m1)。按选择的色谱条件连续进样6次，其峰面积的RSD为0.31％，表明仪器精密度较好。取同一样品液，每隔1h进样1次，每次10μl，测定峰面积，结果表明样品液在6h内稳定(n=6)，阿魏酸峰面积的RSD为1.63％。
2．2．6 重现性试验 精密称取供试品粉末5份，每份1g。按“供试品溶液的制备”进行平行提取，在选定色谱条件下测定阿魏酸的含量，RSD为1.80％，分析结果表明重现性较好。
2．2．7 回收率试验 精密称取已知含量的供试品5份，分别精密加入一定量的阿魏酸对照品液，照2.5项下方法操作，进行回收率测定，结果见表1。
2．2．8 样品的测定 取6份样品溶液(四川乐山大干药业有限公司．批号：060486)按上述色谱条件进行分析，按标准曲线回归方程计算阿魏酸的含量，当归片中阿魏酸含量为4.1612mg／g(n=6)。
3 讨论
从本研究建立的薄层色谱测定方法来看，薄层色谱展开系统分离效果好，斑点清晰，不拖尾，供试品与对照品药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，但实验中发现，有个别厂家生产的当归片由于当归浸膏含量不足，斑点不够清晰。
实验参照有关文献，流动相中水相采用0.1％的磷酸水溶液，可以减少拖尾，改善峰形，且分离效果好。经试验，以乙腈一水(0.1％磷酸)12：88为流动相时分离效果最佳。
实验结果表明，该方法具有操作简便、重现性好、灵敏、准确等特点，可用于当归片质量的控制。
