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孙永强 王 强 郑国静 孙 溪 [摘要]目的探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌原位种植瘤组织中微血管密度(microvessel density，MVD)表达的影响。方法建立裸鼠人胃癌原位种植转移模型，随机分为生理盐水对照组、5-Fu化疗组、罗非昔布组及罗非昔布联合5-Fu化疗组(联合用药组)，生理盐水、罗非昔布灌胃给药，5-Fu腹腔注射给药，采用免疫组织化学Envision法检测各组原位种植瘤组织中MVD的表达。结果MVD计数结果显示，生理盐水对照组为56.8±9.8，5-Fu化疗组为39.9±7.0，罗非昔布组为42.3±11.0，联合用药组为25.1±7.6。罗非昔布组与生理盐水对照组之间、罗非昔布组与联合用药组之间比较，差异均有统计学意义(P6细胞悬液，于裸鼠腋部皮下注射，成瘤后反复传代至形成实体瘤，本组瘤源为第6代。罗非昔布为杭州默沙东制药有限公司产品，每片25mg。
主要试剂：兔抗人CD34一抗(美国Neomarkers公司，稀释度为1：50)；即用型Envision试剂(二抗，丹麦Dako生物制品有限公司，批号K4001)；10％多聚赖氨酸(Sigma生物制品有限公司)。以PBS为一抗设阴性对照，以丹麦Dako生物制品有限公司提供的阳性切片为阳性对照。
1.2 方法
1.2.1 人胃癌裸鼠原位种植模型的建立取传代后14d的荷瘤鼠，常规消毒，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的瘤组织，切成1mm×1mm×1mm小块备用。
实验动物术前禁食，以氯胺酮50mg・kg-1腹腔麻醉，皮肤消毒，左侧旁正中切口进腹，在胃窦小弯近胃角处用无菌缝合针头划破胃壁浆肌层，植入1块瘤组织于凹内，并在瘤块表面滴上l滴OB生物胶，凝固后回纳入腹腔，逐层关腹。以上操作均在超净台内进行。模型建立后12周将裸鼠拉颈处死，解剖动物，取移植瘤用10％福尔马林固定，组织切片、染色后行光镜下常规病理学检查。
1.2.2 实验动物分组及给药在种植术后1周，将存活的裸鼠随机分4组，每组8只。即生理盐水对照组(生理盐水0.2ml灌胃，每日1次)、5－Fu化疗组(5－Fu60mg・kg-1腹腔注射，每周1次)、罗非昔布组(罗非昔布5mg・kg-1灌胃，每日1次)和罗非昔布联合5-Fu化疗组(联合用药组，罗非昔布和5-Fu用法同前)，4组均连续给药8周。联合用药组裸鼠于用药后第4周和第8周各死亡1只。
1.2.3 肿瘤组织中MVD的检测采用免疫组织化学Envision法检测各组原位种植瘤组织中MVD的表达。根据Weidner等的方法，每张染色切片在100倍镜下寻找3个微血管密度最高区，即所谓“热点”，然后在200倍视野下计数染成棕色的血管数目，每例标本分别计数3个视野，取平均值。单个红染内皮细胞或内皮细胞堆集(无论有无管腔形成)均参与计数。管腔较大且有较厚肌层或管腔内有8个以上红细胞不在计数之列。
1.3 统计学处理
计数资料表示，应用SAS6.12统计软件，多样本均数间比较采用方差分析，两两之间比较采用SNK-q检验，P
