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【摘要】 目的 分别检测游离丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)、抗体(HCV-Ab)及HCV RNA,研究游离丙肝病毒核心抗原检测早期筛选HCV感染的价值。方法 采用ELISA法测定丙肝病毒核心抗原和抗体，FQ-RT-PCR方法测定HCV RNA，对比300例HCV RNA阴性正常查体人群结果，筛选有危险因素人群HCV阳性者35例，研究丙肝病毒核心抗原测定的特异性和敏感性及缩短检测窗口期的价值。结果 体检人群300例HCV-Ab、HCV RNA均为阴性, HCV-cAg阴性299例(99.67%); 35例随访确诊HCV感染者初次HCV RNA阳性标本， HCV-cAg阳性33例(94.29%), HCV-cAg检测可有效缩短窗口期。结论 游离HCV核心抗原ELISA测定法具高度敏感性及特异性,可以明显缩短HCV窗口期,可作为HCV抗体检测的补充试验。
【关键词】 游离丙肝病毒核心抗原;丙肝病毒抗体; 反转录多聚酶链反应
Value study of Early Screening of Hepatitis C on Free HCV Core Antigen Detection
ZHANG LI,ZHANG WEN-Juan.
Medical college of Qingdao University,Shandong 266000,China
【Abstract】 Objective Hepatitis C virus core antigen (HCV-cAg) and antibody (HCV-Ab) and HCV RNA were detected to study the value of free hepatitis C virus core antigen when screening HCV early.Methods Hepatitis C virus core antigen and antibody measured by ELISA method. HCV RNA measured by FQ-RT-PCR method.Compared 300 patients with HCV RNA-negative results among normal physical examination, and we screened 35 HCV-positivecasesin the group with risk factors for hepatitis C virus. Through the above data we studied the specificity and sensitivity and the value of shorten the window period with determination of HCV core antigen. Results Results of HCV-Ab and HCV RNA in 300 physical examination�s people were negative, and results of HCV-cAg in 299 patients (99.67%) were negative； To use diagnosis of follow-up methods we confirmed 35 cases of HCV infection. When first results of HCV RNA were positive, results of free HCV-cAg detection in 33 cases (94.29%) were positive.Detection of free HCV-cAg can effectively shorten the window period. Conclusion Free HCV core antigen ELISA assay with high sensitivity and specificity, it can significantly shorten the HCV window period, and it can be used as a supplementary test for HCV antibody test.
【Key words】 Free Hepatitis C virus core antigen; Anti-HCV; RT-RNA
丙型肝炎是严重威胁人类的传染病之一， 2008年数据表明，全世界丙型肝炎病毒感染的流行率约2.2~3.0％(1.30~1.70亿),其中还有许多地区还未相应的统计数据 ［1］。现国内外HCV筛选主要应用抗HCV/EIA检测抗体，虽然第三代试验比第一代第二代试验提供更高的灵敏度和特异性，但它是基于抗体检测，存在一个“窗口期”［2］，处在窗口期HCV 患者是丙型肝炎传播的重要来源［3］。HCV 核心抗原是由HCV 基因组保守序列C 区部分编码而来，近年来发展迅速，已出现商业化试剂，但在国内临床上应用比较少，本研究主要是研究游离HCV核心抗原测定用于HCV 早期筛选的临床价值。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 2007年9月至2010月9时间段内与传染科、消化内科医师合作，通过门诊患者既往暴露史，及初次HCV RNA、HCV核心抗原、Anti-HCV检测均为阴性的危险因素人群，包括针刺、刀伤或者破损黏膜处接触丙肝阳性血液医护人员或社会人员，家庭成员中有丙肝患者，与丙肝感染者共用剃须刀、牙刷等密切接触者；有大量输血史，使用过非一次性注射器和未经严格消毒的牙科器械、胃镜检查、针灸穿孔器具，曾在美容院进行过抽脂、割双眼皮等创伤性美容项目，或者曾经用过未经严格消毒的器具进行文身、文眉、穿耳环孔等皮肤黏膜创伤性操作的人群；多于1个性伴而不用避孕套,且性伴侣中有丙型肝炎病毒感染者，与丙肝感染者有性交或有不洁性行为者；药物滥用和注射毒品，且共同人群中有丙肝阳性感染者。共筛选HCV阳性患者35例。
1.1.2 随机抽取正常体检人群300例,同时检测HCV-Ab、游离HCV核心抗原和HCV RNA。
1.2 方法与试剂
1.2.1 以自愿原则每隔7日抽取被检测人员空腹标本分离血清检测HCV RNA、HCV核心抗原、HCV ELISA结果，如发现HCV RNA阳性或HCV核心抗原阳性继续检测至HCV ELISA阳性结果，分离血清并置-70℃冰箱保存。
1.2.2 血清学检测方法 HCV核心抗原测定采用的是美国Ortho Diagnostics 公司的HCV 核心蛋白ELISA 试剂盒，其反应原理双抗体夹心法；具体操作方法见Ortho Diagnostics 试剂盒说明。HCV 抗体(IgG)测定采用珠海丽珠试剂公司HCV 抗体ELISA试剂盒，具体操作方法见试剂盒说明。
1.2.3 HCV RNA 采用FQ-RT-PCR方法， 深圳匹基生物工程有限公司的丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒和Rotor-Gene3000荧光定量扩增仪，通过荧光信号的变化检测丙肝病毒RNA(一步法)。具体操作见试剂盒说明。
1.2.4 采用康彻斯坦生物公司HCV质控血清做室内质控，卫生部临检中心的HCV质控血清做室间质控。
1.3 实验设计及结果分析
1.3.1 特异性评估 抽取正常体检人群300例，检测HCV-Ab、HCV RNA均为阴性，再检测游离HCV核心抗原。
1.3.2 敏感性评估 比较HCV RNA阳性结果和HCV核心抗原阳性结果。
1.4 统计学方法 采用SPSS分析软件计算，并参考特异性和敏感性公式计算特异性和敏感性。
2 结果
2.1 特异性 表1、表2显示300份正常体检人群标本中有2份在初次HCV 核心抗原测定时出现弱阳性 (0.67%)，对2例初次弱阳性标本进行HCV 核心抗原复查,结果仍明有1 例阳性(0.33%)，而HCV RT-PCR结果全为阴性。
2.2 敏感性 对有危险因素人群进行检测和随访，确认感染HCV共有35例。初次检测HCV RNA阳性35例,而丙肝核心抗原初次检测33例为阳性(94.29%，表3)，一例结果在可疑范围内，复查后判断为阴性，1例为阴性。
2.3 HCV-核心抗原、HCV-RNA、ANTI-HCV 检测在缩短HCV 窗口期的时间对比表
我们以HCVRNA结果第一次阳性为起始点，统计游离HCV-核心抗原和HCV ELISA法检测首次阳性例数。
3 讨论
卫生部发布《丙型病毒性肝炎(丙肝)防治知识要点 》［4］提示丙肝起病隐匿，症状不明显，早检测、早诊断、早治疗是丙肝防治的关键。现用于HCV感染诊断的主要指标为Anti-HCV和HCV-RNA，HCV-RNA操作复杂，费用昂贵，需要专业仪器，在现阶段许多地区和国家经济水平不允许的情况下，无法作为基层医疗机构大规模筛查试验，而处在窗口期的HCV 患者是目前输血性肝炎传播的一个重要来源［5 ］。HCV核心抗原研究始于上世纪90年代中期，HCV核心抗原在外周血中有游离抗原与总抗原两种状态，前者存在于抗-HCV阳转前，在抗-HCV出现后，所测定的HCV抗原为总抗原，国外的研究资料表明它与HCV RNA存在着很好的相关性 ［6］。
在特异性研究中，对300例非HCV感染的血样的测定表明,有299例HCV 核心抗原结果阴性(99. 67%)，有1份的血样出现阳性(0.33%)，特异性为99.67%，对1 份血HCV 核心抗原阳性的血样进行HCV 核心抗原复查及HCV 荧光定量PCR测定，结果复查仍为阳性，而HCV 荧光定量PCR 结果为阴性，分析原因可能是HCV 核心抗原测定假阳性或PCR 的假阴性所致(血样中HCV RNA 低于检测低限)。
在敏感性研究中，我们对35份HCV 感染的血样(HCV 定量PCR 阳性、抗HCV 抗体阴性)比较HCV 核心抗原测定,结果表明有33份HCV 核心抗原测定阳性，敏感性为94.29%，1 份结果可疑(2.9%)，显示HCV-核心抗原ELISA 方法的敏感性可达到PCR 方法水平。
与抗HCV 抗体方法相比, HCV 核心抗原几乎与HCV RNA同时出现，能显著地将HCV 窗口期缩短。
综上所述, 只凭Anti-HCV检测来协助临床诊断窗口期内容易容易漏诊［7］，游离HCV核心抗原ELISA测定法具高度敏感性及特异性,可以明显缩短HCV 窗口期, 有效避免术中感染责任和用血安全等问题，是一个能够早期指示HCV感染状态的并能够为临床提供正确的HCV感染治疗或随访的指标，可作为HCV抗体检测的补充试验。
参 考 文 献
［1］ Daniel Lavanchy.The global burden of hepatitis C. Liver International, 2009,29(Suppl S1)：74-81.
［2］ Filippo Ansaldi,Giancarlo Icardi. Simultaneous Detection of Anti-HCV Antibody and HCV Core Antigen. Methods in Molecular Biology, 2009, 510(1):15-23.
［3］ Van der Poel C L. Hepatitis C virus and blood transfusion:past and present risk. J Hepatol,1999,31 (Suppl 1):101-106.
［4］ 中华人民共和国卫生部. 丙型病毒性肝炎防治知识要点［R/OL］.［2009-11-10］. http://www.moh.省略/publicfiles/business/htmlfiles/mohjbyfkzj/s10752/201007/48266.htm.
［5］ George B. Schreiber, D.Sc., Michael P. Busch, et al.The risk of trasfusion trasmitted viral infections. N Engl J Med,1996,334:1685-1690.
［6］ Nubling CM,Unger G,Chudy M, et al. Sensitivity ofHCV core antigen and HCV RNA detection in the earlyinfection phase. Transfusion,2002,42(8):1037-1045.
［7］ 王宇明.重视我国丙型肝炎的研究.中华肝脏病杂志，2004, 12(2)：106-107.
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
