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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定三黄乳膏中黄芩苷含量的方法。方法 采用Dikma C��18� (5μm，250 mm×4．6 mm)色谱柱;流动相为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0．2);检测波长为277 nm。结果 黄芩苷在0．40~2．40 μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0．999 8 n=6)，精密度高，RSD＝0．66%,平均回收率98．34%。 结论 该方法简便，结果准确，重现性好，可作为三黄乳膏的质量控制方法。
【关键词】 高效液相色谱法；三黄乳膏;黄芩苷；含量测定
Determination of baicalin in Sanhuang Cream with high performance liquid chromatograpy LI Dai-cheng Sichuan Province Dazhuxianpeopie,s Hospital, Dazhu, Sichuan Province 635100 China
【Abstract】 Objective To establish a method on high performance liquid chromatography the amount of baicalin inSanhuang cream．Methods The Dikma C��18� (5μm，250 mm×4．6 mm) was used．The mobile phase consisted of methanol-water-phosphoric acid solution(47∶53∶0．2) ．The UV detection wavelength was 277 nm．Results The linear response range of baicalin was 0．40~2．40μg/ml (r=0．999 8 n=6),the precision was high with RSD=0．66%．The average recovery was 98．34%．Conclusion The method is simple,accurate,reliable and can be applied to the quality control of the preparation．
【Key words】 HPLC;Baicalin; Sanhuang Cream;Determination of content
三黄乳膏是我院自制制剂，由生大黄、黄柏、黄芩、五倍子四味中药分别提取、浓缩、精制，再加樟脑和乳膏基质制成的乳膏。具有清热解毒，凉血消肿，�湿敛疮[1]之功效，主要用于治疗带状疱疹[2-4]。黄芩苷的含量能反映该产品的内在质量。本文采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量的方法，为三黄乳膏质量标准的建立提供了较好的含量测定方法，现报告如下。
1 仪器、材料与试药
1．1 仪器 美国惠普(Hewlett-packard)公司HP1100高效液相色谱仪(四元泵、紫外检测器、手动进样器)；浙江大学 N－2000色谱数据工作站；微量移液器等。
1．2 试药 黄芩苷对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110715－200502)；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。三黄乳膏(本院制剂，批号：20061014、20061112、20061203)
2 方法和结果
2．1 色谱条件 色谱柱Dikma C��18�(5μm，250 mm×4．6 mm);流动相为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0．2);检测波长为277 nm；柱温：350C；进样量：10 μl;理论塔板数：＞4000；所得色谱图见图1。
2．2 试验用溶液的制备
2．2．1 对照品溶液的制备 精密称取在600C减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成含0．1 mg/ml的溶液，即得。
2．2．2 样品溶液的制备 称取三黄乳膏约1．0 g，精密称定，加70%乙醇80 ml，加热回流提取3 h，置冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用少量70%乙醇洗涤容器，并入量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2．2．3 阴性对照液的制备
用除黄芩外其它各原料按相同方法配制成乳膏，照“样品溶液的制备”的方法制备即得。
2．3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液4．0 μl、8．0 μl、12．0 μl、16．0 μl、20．0 μl、24．0 μl，连续进样2次测定，以黄芩苷峰面积(A)对浓度(C)回归，得回归方程：A＝2．78×106C-7．34×104r=0．999 8，n=6。结果表明在：0．40~2．40 μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。
2．4 精密度试验 取对照品溶液重复进样5次，分别测定两组份的平均峰面积和平均保留时间值，结果黄芩苷的峰面积基本不变，RSD＝0．66%。
2．5 重复性试验 取同一批号样品5份，分别按样品溶液制备方法制备、进样，按上述色谱条件平行测定两组份的含量，结果供试品黄芩苷的平均含量为9．83%，RSD＝0．81%(n＝5)，表明重现性较好。
2．6 稳定性试验 取同一批号样品，按样品溶液的制备方法，在室温放置，每间隔2 h分别测定一次，连续测定7次，结果黄芩苷含量的RSD＝0．93%，说明样品溶液在24 h内稳定性良好。
2．7 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品6份，在线性浓度范围内，分别加入一定量的黄芩苷对照品，混匀，按“样品溶液及阴性对照液制备”项下操作，制成高、中、低3种不同浓度的溶液，测定黄芩苷的含量，并计算其回收率，结果见表1。
2．8 样品含量测定 按以上制备方法和色谱条件，对三批样品进行含量测定，计算黄芩苷的含量。结果见表2。
3 讨论
黄芩苷在甲醇中溶解度大，稳定性好，因此，选择甲醇作为溶剂。据文献报道，均是测定片剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂等剂型中黄芩苷的含量[5-8]，未见测定乳膏剂中黄芩苷的含量报道。经过多次实验，建立测定乳膏剂中黄芩苷含量的方法，简便、准确、灵敏度高、重复性好，可以为三黄乳膏的质量控制提供依据。
参考文献
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