【www.zhangdahai.com--庆典致辞】
【摘要】 目的 探讨儿童支气管哮喘 (简称哮喘) 发作期淋巴细胞免疫功能和白细胞介素-2(IL-2)、可溶性白介素2受体(sIL-2R)检测的临床意义。方法 应用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对25例支气管哮喘患儿和21例支气管哮喘缓解期患儿以及 20例正常儿童外周血T细胞亚群及血清IL-2和sIL-2R水平进行测定。结果 支气管哮喘患儿发作期血清sIL-2R水平明显高于缓解期和对照组，缓解期sIL-2R水平仍高于对照组。IL-2水平明显低于缓解期和对照组。外周血总CD3+、CD4+、CD4+/CD8+细胞比值均降低，CD8+细胞增高。结论 动态监测IL-2和sIL-2R水平含量，观察T细胞亚群变化可以判断哮喘发作的程度、指导治疗和评估预后。
【关键词】 支气管哮喘；T细胞亚群；IL-2
The change and clinical significant of cellular immunity and interleukin in children with bronchial asthma
TANG Shu-sheng,HUANG Xiao-yan.The hospital of Guangzhou Red Cross,Guangzhou 510220,China
【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of relationship between cellular immunity and interleukin (IL-2、sIL-2R) in children with bronchial asthma . Methods T cell subset was assayed by flow cytometry in 25 children with NS in attack phase，21 children with NS in remission phase and 20 normal children. IL-2and sIL-2Rwere measured by ELISA in blood serumin all children. Results The level ofIL-2in blood serum is lower in children with attack phase bronchial asthma than those in remission phase and in control. The level ofsIL-2Rin blood serum is higher in children with attack phase bronchial asthma than those in remission phase and in control.The total CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ decrease, CD8+ increase.Conclusion Monitoring IL-2 and sIL-2R , T cell subset ratio change in children with bronchial asthma in attack phase. Cellular immunity,IL-2 and sIL-2R imbalance may play a role in bronchial asthma pathogensis.
【Key words】 Bronchial asthma;T cell subset ;IL-2
支气管哮喘(简称哮喘)是小儿常见疾病之一，经常反复发作，给患儿造成很大痛苦。近年来，在哮喘的研究中，细胞因子和炎性反应介质在其发病中的作用越来越受到重视。随着免疫学和分子生物学的研究进展，逐渐重视细胞因子网络失衡在发病中的重要作用。因此，我们对儿童哮喘发作期和缓解期分别对T细胞亚群及细胞因子进行动态观察，旨在探讨支气管哮喘患儿T细胞亚群及IL-2和sIL-2R参与发病的作用及检测的临床意义，以指导临床哮喘的防治和规范化管理，评价药物治疗效果及其预后。现报告如下。
1 对象和方法
1．1 对象 2004年3月至2006年10月间在我院诊断为支气管哮喘并住院患儿25例，全部符合小儿支气管哮喘诊断标准[1]。男16例，女9例，年龄2~13岁，平均7．5岁。临床表现为支气管哮喘发作期组(25例)与缓解期组(21例)；对照组：选择20例同龄健康儿童，其中男8例，女12例；年龄2~14岁，平均8岁。
1．2 方法
1．2．1 标本收集和检测 哮喘发作期患儿均于入院次日采集清晨空腹静脉血3~5 ml，采用乙二胺四乙酸二钾抗凝；缓解期患儿来自上述发作期患儿，再重复抽血3~5 ml进行检测。
1．2．2 T细胞亚群的检测测T细胞亚群的样本在8 h内染色后用流式细胞仪检测完。应用FACSVantage流式细胞仪(美国B-D公司产品)，采用CD45/CD14、IgG1/IgG、IgG1/IgG2a、CD3/CD4、CD3/CD8双色直标抗体(由美国B-D公司提供)，溶血素和PBS自备。染色标本用流式细胞仪检测，在Cellquest软件下获取数据并分析结果。
1．2．3 血清IL-2和sIL-2R含量检测 血清样本立即分离后，-20℃保存,1周内检测。血清液采用酶联免疫吸附双抗夹心法(ELISA)。用酶标自动测定仪测吸光度，绘制标准曲线，计算样品中IL-2和sIL-2R的含量。试剂盒由白求恩医科大学免疫实验室提供，均按说明书进行操作。
1．2．4 统计学处理 检验结果用（x±s）表示，各组间采用方差分析和两两比较q检验。
2 结果
2．1 T细胞亚群的变化 支气管哮喘发作期CD+3、CD+4、CD+4/CD+8比值百分率较缓解期和对照组明显降低，差异有统计学意义(P+8细胞百分率较缓解期和对照组明显升高，差异有统计学意义(P+4外，其余与对照组比较均差异无统计学意义(P> 0．05)。见表1。
2．2 血清IL-2和sIL-2R的水平 支气管哮喘发作期血清sIL-2R的水平明显高于缓解期和对照组，缓解期sIL-2R仍高于对照组。IL-2明显低于缓解期和对照组，缓解期IL-2仍低于对照组。说明哮喘患儿IL-2水平无论是急性发作期还是缓解期均低于健康儿童。sIL-2R的水平无论是急性发作期还是缓解期均高于健康儿童。见表2。
3 讨论
哮喘的病因错综复杂，多种炎症细胞及炎性反应介质参与其发病过程，而T淋巴细胞被抗原激活是哮喘免疫反应中一个关键步骤，也是启动和扩大气道过敏性炎症的直接因素。炎症的早期产生IL-1、IL-2和IL-6等细胞因子，这些细胞因子中起重要作用，是炎性反应介质连续反应中最早启动的因子，并导致体内产生“瀑布”样连锁反应[2]。
研究指出，IL-2 是由参与细胞免疫的Th1 细胞分泌，IL-2、干扰素(IFN－γ) 为细胞增殖活化所必需主要辅助因素，在淋巴因子调节免疫反应的分支网络中，IL-2 处于中心部位，具有多种免疫调节功能。它能促进已被激活的T细胞上IL-2 受体表达，促进T细胞增殖，维持激活的T 细胞活性，诱导T 细胞分泌IFN-γ，促进细胞毒性T前体(CTL-ｐ)分化为细胞毒性细胞(CTL)，并增加其杀伤效应。IL-2 可增强NK细胞的活性，是NK细胞的生长因子，NK细胞之所以能够维持正常的自然活性，依赖于体内持续存在的小剂量IL-2，如果清除IL-2，NK细胞的活性也随之消失。哮喘患儿Th1/Th2极化异常，Th1分泌被抑制，使得IL-2、IFN-γ等细胞因子水平下降[3]。
哮喘发病中细胞免疫功能紊乱一直受到关注，无论急性哮喘或无症状期气道炎性反应均存在各种炎症细胞处于激活状态，分泌释放大量细胞因子或炎性反应介质。T淋巴细胞在发病过程中发挥重要的免疫调节作用。T淋巴细胞按细胞表面抗原分为CD+4细胞和CD+8细胞等，按免疫功能分为辅助性T细胞(Th)、抑制性Ｔ细胞(Ts)和细胞毒T细胞(Tc)亚群。CD3+是成熟T细胞的表面标志，CD4分子表达在Th细胞表面，CD+8分子多表达在Ts和Tc细胞。T淋巴细胞通过分泌的多种细胞因子间的相互作用在哮喘发病机制中起免疫调节作用[4]。CD+4细胞按产生的淋巴因子不同分为Th1和Th2两大功能亚群，Th1细胞主要产生IL-2、IFN γ等，Th2细胞主要产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-8和IL-10等[5]。哮喘患儿存在Th1/Th2亚群功能失衡，表现为Th1亚群功能低下，Th2亚群功能亢进[6]。许多重要的炎症性因子，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10和IFNγ的主要来源是 Th细胞，Th1和Th2细胞通过分泌细胞因子，彼此进行交叉调节，相互抑制，Th1/Th2日趋不平衡是某些疾病发生或加重的根源[6]。T淋巴细胞及各种免疫细胞及其分泌的细胞因子之间的变化，相互协调与相互拮抗共同形成复杂的细胞因子网络。
研究显示，哮喘患儿发作期IL-2水平明显低于缓解期，并且无论是发作期还是缓解期哮喘患儿IL-2 水平均低于健康组，说明哮喘患儿体内IL-2 始终处于较低水平，病情越重，水平越低，提示哮喘患儿体内由Th1参与的细胞免疫被抑制，使得IL-2含量显著减少，低于能发挥作用的域值，无法发挥正常功能。当机体受到感染时无法正常应答，Th2分泌占优，释放大量细胞因子，引起哮喘发作，说明哮喘患儿急性发作期细胞免疫功能低下及紊乱，IL-2在免疫应答中起重要作用。哮喘患儿发作期sIL2R明显升高，与细胞膜IL-2R(mIL-2R)竞争结合IL-2，起到“封闭因子”作用[7]，中和T淋巴细胞周围IL-2，使血中游离的IL-2减少。
我们的资料表明支气管哮喘发作期CD+3、CD+4、CD+4/CD+8比值细胞明显降低，尤其CD+4细胞明显下降，CD+8细胞明显升高。表明支气管哮喘发作期T细胞免疫应答能力减低，并且可能存在细胞间相互作用调节紊乱，使细胞免疫功能减低，提示支气管哮喘患儿免疫功能紊乱存在一定的规律性和相关性，其影响途径有待于进一步研究。
综上所述，哮喘患儿无论是发作期还是缓解期sIL-2R水平始终高于健康儿童，IL-2始终处于较低水平；sIL-2R升高在哮喘发作中起关键作用；IL-2 降低提示细胞免疫被抑制。经过药物治疗后，IL-2 有明显提高，sIL-2R有所下降， 提示抑制sIL-2R分泌、促进IL-2增加作用的药物能显著减少哮喘反复发作次数，减轻患儿的痛苦。治疗前检测细胞因子来推测T细胞亚群的分布，动态监测IL-2和sIL-2R水平，观察T细胞亚群变化可以判断疾病的程度并指导治疗。
参考文献
［1］ 中华医学会儿科学分会呼吸学组，中华医学会，中华儿科杂志编辑委员会．儿童支气管哮喘防治常规(试行)(2003年修订).中华儿科杂志，2004，42(2):100-107.
［2］ 余声华，钟韩荣，余晓娟，等. 儿童重度哮喘气道炎性细胞因子测定及意义. 中国医师杂志，2004，增刊:290-291.
［3］ 王铁良，杨 丽，杨欣燕，等. 支气管哮喘患儿血清中IL-2、IL-8 含量变化的研究. 中国初级卫生保健，2007，21(5)：92-93.
［4］ 杨运刚，陈茂荣. Ｔ淋巴细胞在儿童支气管哮喘发生中的作用.实用儿科临床杂志，2003,18(8):615-616.
［5］ 赵顺英. 哮喘发病机制研究进展.实用儿科临床杂志，2003,18(10):768-771.
［6］ 安肃英，孙宗芝，李根山.哮喘儿童血免疫球蛋白IgE、Ｔ细胞亚群与细胞因子动态观察及临床意义.实用儿科临床杂志，2004，19(2)：117-119.
［7］ 刘文彬，涂冬梅，袁丽. 肺炎支原体肺炎IL-2, sIL2R,IL-6,IL-8动态变化及临床意义. 西南国防医药，2006，16(1)：32-33.
