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摘要：目的：探讨HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性。方法 ：采用时间分辨荧光定量法（TR FIA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）法对360例疑似乙肝患者进行HBV-DNA和HBV-M定量检测。 结 果：HBeAg（+）组患者血清HBVDNA检�出率为95.17%，平均拷贝数为106.53±1.45 /ml， HBeAg（-）组患者血清HBV-DNA检出率为53.49%，平均拷贝数为104.52±1.60/ml，H BeAg（+）组的 HBV-DNA阳性率，拷贝数明显高于HBeAg（-）组（P＜0.05， P＜0.01）。HBsAg（ -）组患者仍有HBV-DNA阳性者。结论：单凭血清学标志物模式难以判断HBV的复制程度及传 染性强弱，定量检测HBV-DNA能真实反映HBV复制情况，对乙型肝炎的诊断及防治提供客观 依据。
关键词：乙型肝炎；时间分辨荧光法；荧光定量PCR；HBV-DNA；HBV-M
中图分类号： R512.62;R446.62 文献标识码： A 文章编号： 1008-2409(2008)05-0901-02
The study of the relationship between HBV-DNA and HBV-M concentration／OU Yang -qing, LIU Jian∥Departement of Laboratory,The Affiliated Hospital of Guilin Medical College, Guilin 541001, China
Abstract: Objective: To explore the relatimship between the quantitative detection of HBV -DNA andHBV-M.Methods: HBV-DNA was detected by fluorescent quantitative PCR(FQ-PCR)a nd HBV-Mwas detected with TRFIA in serum samples from 360 patients who suspected casesof hepatitisB. Results: The detecting rate of HBV-DNA was 95.17% and the mean copy numberwas106.53±1.45/ml in patients of HBeAg(+) group, the detecting rate of HBV - DNA was 53.49%， and the mean copy number was 10452±1.60/ml. In patientsofHBeAg(-) group, the HBV-DNA positive rate and copy quantity in HBeAg(+) groupwas obviously high than that in HBeAg(-) group(P＜0.05 P＜0.01). HBV-DN A positivity may appear inHBsAg(-) group. Conclusion:Serum marker model only applied to judge the degreeof HBV replication and its infectivity were considerable diffiecult, Quantita-tively determination of the level of HBV-DNA can genuinely reflect the resultso f HBV replication and it is also of great significance for diagnosis and observa tion on the results in treatment of HBV patients.� Key words:hepatitis B;TRFIA;FQ-PCR;HBV-DNA;HBV-M
乙型肝炎是我国最常见的传染病之一，而乙型肝炎病者感染的诊断主要依赖于血清特异性抗 原、抗体和HBV-DNA检测，为探讨HBV感染者不同血清学标志物模式与HBV-DNA 定量的关系，笔者采用时间分辨和荧光定量PCR两种方法，对360 例疑似乙肝患者的血清进行检测，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 对象
360例均为2007年1月至2007年3月到我院就诊的所有同时做过乙肝两对半及HBV -DNA检测的疑似乙肝的门诊和住院患者。
1.2 检测仪器
1.2.1 OpticonⅠ定量扩增仪（MJ．Research,美国）。
1.2.2 Anytext 2000 时间分辨仪（上海新波生物工程有限公司）。
1.3 检测方法和试剂
1.3.1 HBV-M检测采用时间分辨荧光定量法，试剂由上海新波生物工程有限公司提供，并 严格按说明书操作。
1.3.2 HBV-DNA定量分析采用荧光定量PCR法，试剂由深圳匹基生物工程有限公司提供，严 格按说明书的步骤进行操作。
1.4 阳性结果的判断标准
HBV-DNA＞103copy/ml 为便于统计，均以检测结果绝对值进行 比较，HBV-M定量测定以HBsAg＞0.5ng/ml，HBsAb＞10mIU/ml，HBeAg＞0.05NCU/ml，HBeAb ＞1.5NCU/ml，HBcAb＞0.100NCU/ml为阳性。
1.5 统计学处理
采用t检验。
2 结果
2.1 FQ-PCR检测HBV-DNA与TRFIA检测结果，见表1。
由表1可以看出10种血清标志物模式，除全阴模式、HBsAb（+）、HBeAb（+）模式、HBsAb （+）模式外，其余HBV-M的各种模式，均有不同程度的病毒复制。
2.2 HBV-DNA 含量与HBeAg浓度值的关系，见表2。
从表2可以看出，138例HBV-DNA阳性标本中随着HBV-DNA拷贝数升高，HBeAg的浓度值也呈 升高趋势。
2.3 HBV-DNA基因含量与HBeAg、HBsAg的关系，见表3。
由表3可见145例HBeAg（+）的血清中，有138例HBV-DNA阳性，检出率为95.17% ，平均拷贝数为106.53±1.45，215例HBeAg （-）的血清中有115例HBV-DNA阳性，检出率为53.49%，平均拷贝数104.52±1.60 ，HBeAg（+）组与HBeAg（-）组检出 率有显著差异（P＜0.05），而HBsAg（+）组与HBsAg（-）组检出率也有显著差异（P ＜0.01），HBeAg（+）组与HBeAg（-）组HBV-DNA含量有显著性差异（P＜0.01）， 而HBsAg（+）组的DNA水平也显著高于HBsAg（-）组（P＜0.01）。
３ 讨论
既往报道HBeAg阳性与HBV-DNA检测呈良好相关性，笔者用TRFIA法定量检测145例HBeAg（+ ） 的血清中，HBV-DNA（+）138例，检出率95.17%，同时随HDV-DNA拷贝升高，HBeAg浓度也 呈升高趋势，说明HBeAg在数量上与HBV-DNA拷贝具有良好相关性，可望作为监测HBV感染和 复 制的量化指标。在215例HBeAg（-）的血清中，HBV-DNA阳性率仍高达53.49%，说明HBeAg阴 性并不表示患者体内病毒复制停止，表明仍有活跃的病毒复制。有学者认为当表达HBeAg有 关的前C区基因发生突变时，可表现为HBeAg阴性，但HBV-DNA为阳性［1］。因此当H BeAg转阴 时，不能作为衡量病情好转，病毒停止复制的一个指标，需进一步作HBV-DNA检测。在45例 HBsAg阴性的血清中仍有3例检出HBV-DNA，阳性率为6.67%，这可能是HBV基因的S区发生有 意 义的点突变或插入，缺失突变［2］，而出现“免疫逃逸”或不同亚型的HBV重叠感染 ［3］，也 有可能是HBsAg滴度很低，用一般的血清法不能检出HBsAg，而PCR具有极高的灵敏度［4 ］。 提示HBsAg虽已转阴，但仍可能存在病毒低水平及具有一定的传染性，检测HBV-DNA是 必要的。
综上所述，TRFIA法定量检测HBV-M，虽高浓度HBeAg可间接提示病毒处于高复制状态，具有 较高的传染性，但如果仅以HBV-M的检测结果作为判断HBV-DNA感染及HBV是否在体内复制 是 有一定的局限性，应同时采用FQ-PCR法检出HBV-DNA含量，才能准确反映体内HBV的复制 情况和传染性并合理指导临床用药。
参考文献：
［1］ 王健，闵福援. 乙肝病毒血清标志物的检测方法及临床意义［Ｊ］.中华 检验医学杂志，2005,28(1):113-115.
［2］ 侯金林，骆抗先，梁炽森.HBsAg阴性乙型肝炎病毒感染与S基因插入变异 的关系［Ｊ］，中华感染性杂志，1996，14(3)：129-131.
［3］ 陈素玲，胡国龄，许德明．381例HBV感染者HBV-DNA 前C区基因实变的研 究［Ｊ］．中国现代医学杂志，2001，1（10）：102.
［4］ 李金明．临床酶免疫测定技术［Ｍ］．北京：人民军医出版社，2005 ：193.
(收稿日期： 2008-04-28)
［责任编辑 王慧瑾 邓德灵］
