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摘要：目的：建立前列通窍胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法对处方中的黄芪、水蛭、肉桂进行定性鉴别；采用高效液相色谱法(HPLC－ELSD)对样品中的黄芪甲苷进行含量测定。结果：薄层色谱法能对黄芪、水蛭、肉桂进行专属性鉴别；HPLC－ELSD法测定黄芪甲苷含量时，进样量在1.49～7.44μg范围内呈线性关系，r=0.9991(n=5)，平均回收率为100.55％，RSD为1.59％(n=6)。结论：定性、定量方法简单可行，结果准确可靠，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。
关键词：前列通窍胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1
文献标识码：A
文章编号：1007－2349(2010)06－0054－02
前列通窍胶囊是本院男科治疗前列腺增生所致膀胱逼尿肌功能受损的中药复方制剂。由黄芪、水蛭、肉桂、蛇床子、乌药等中药组成。具有益气补肾、祛瘀通窍的功效。临床用于尿频、尿急、排尿无力、小便不通或点滴不爽、尿细如线、尿线分叉，尿不尽，舌淡胖或舌淡紫，苔白润或紫暗，脉沉迟或细弱或细涩等属于肾阳虚弱及瘀阻水道证的前列腺增生症。为了有效控制该制剂的质量，保证临床用药的安全有效，笔者根据处方中药材的理化性质，采用薄层色谱法对该制剂中黄芪、水蛭、肉桂进行了定性鉴别，同时采用高效液相色谱法对方中黄芪主要成分黄芪甲苷进行含量测定，报道如下。
1 仪器与试药
ZF－II四用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；Agilent1100series高效液相色谱仪；Alheeh2000型蒸发光散射检测器；cQ250超声波清洗器(中船七院七二六所)；黄芪甲苷对照品，批号：110781－200710，水蛭对照药材，批号：121061－200503，桂皮醛对照品，批号：110710－200812，均购自中国药品生物制品鉴定所；硅胶G板(青岛海洋化工厂)；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水；前列通窍胶囊(云南省中医医院制剂室)；阴性对照样品按处方药材比例制。
2 方法与结果
2，1 定性分析
2，1，1 黄芪的薄层色谱鉴别 取本品10粒，内容物加水饱和的正丁醇20mL，超声处理20min，滤过，残渣再加水饱和的正丁醇20mL振摇提取，滤过，合并正丁醇液，以1％氢氧化钠溶液洗涤2次。每次15mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取缺黄芪的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照溶液各5μL，对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷一甲醇一水(13：7：2)10℃以下放置的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点(图1)。
2，1，2 水蛭的薄层色谱鉴别 取本品10粒，内容物加无水乙醇10mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取缺水蛭的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；取水蛭对照药材1g，加无水乙醇5mL，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照溶液各5μL，对照药材溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点(图2)。
2，1，3 肉桂的薄层色谱鉴别 取本品5粒，内容物加乙酸乙酯20mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸至约2mL，作为供试品溶液；取缺肉桂的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；取桂皮醛对照品，加乙醇制成1mL含1μL的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照溶液各5μL，对照品溶液1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～900C)～乙酸乙酯(17：3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基肼乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点(图3)。
2，2 黄芪甲苷含量测定
2，2，1 色谱条件 Agilent-ODS-3色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；流动相：乙腈－水(33：67)；ELSD参数：漂移管温度为100℃，氮气流速为2.0mL・min，进样量为20μL；柱温：25C，流速为1.0mL・min。
2，2，2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品18.6mg，置入50mL容量瓶中，以甲醇溶解定容，制成每1mL含黄芪甲苷0.372mg的溶液，即得。
2，2，3 供试品溶液的制备 取本品20粒，精密称定4g，置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流提取4h，提取液回收甲醇至干。残渣加水25mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液充分洗涤2次，每次40mL，正丁醇液回收溶剂至干，残渣加水5mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水50mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2，2，4 标准曲线的制备与线性关系的考察 精密吸取对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置入5mL量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀。分别精密吸取20μL注入液相色谱仪中，按上述色谱条件分别测定其峰面积，以黄芪甲苷的进样量的自然对数X(gg)为横坐标，峰面积的自然对数Y为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为：Y=1.067X+7.910，r=0.9991，结果表明，黄芪甲苷在1.49μg～7.44μg范围内线性关系良好。
2，2，5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进样5次，每次进样20μL，测定黄芪甲苷的峰面积，其峰面积的RSD=1.68％(n=5)，精密度良好。
2，2，6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液20μL，分别在0、2、4、6、8、10、12h进样，按上述色潜条件测定，峰面积的RSD=1.97％(n=7)，结果表明供试品溶液在12h内基本稳定。
2，2，7 重现性试验 精密称取同一批样品5份，依法测定。结果黄芪甲苷的平均含量为0.28mg・g，RSD=1.35％(n=5)，表明该方法重现性良好。
2，2，8 加样回收率试验 采用加样回收法，分别精密称定已知含量(0.28mg・g)的样品2.5mg，共6份，分成3组(2份／组)，每组分别精密加入3、4、5mL的黄芪甲�对照品溶液(浓度为0.346μg・mL)，依法测定含量，并计算回收率。结果见表1。
2，2，9 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定。结果批号为20080631，20080632，20080633的3批样品中，黄芪甲苷含量分别为0.28mg・g0.26mg・g，0.30mg・g。
3 讨论
在黄芪的鉴别中，分别用1％氢氧化钠溶液、氨试液洗涤正丁醇提取液，比较结果：用1％氢氧化钠溶液可更有效的去除杂质。
中国药典中使用流动相为乙腈－水(32：68)，由于该胶囊为中药复方制剂，使用药典中流动相时，黄芪甲苷峰受到其他成分干扰。因此采用流动相为乙腈－水(33：67)，此条件下黄芪甲苷与杂质能更好的分离。
本试验表明，采用薄层色谱法和高效液相色谱法对前列通窍胶囊中成分进行鉴别及含量测定，方法简单、图谱清晰、分离度好、专属性强、重现性好、结果准确可靠，因此可作为该制剂的质量控制方法。
