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【摘要】目的：研究三七胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1的含量测定方法，为制定质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法：用岛津Shim-packC18分析柱，乙腈-水梯度洗脱，0~6 min(24:76)，6~15 min（27:73→40:60），流速：1.0 ml・min-1，检测波长：203 nm，柱温：35 ℃，进样量：20 μl。结果：三七皂苷R1在0.38~3.80 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9997），平均回收率为100.3%，RSD为1.08%；人参皂苷Rb1在1.50~15.00 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9993），平均回收率为99.9%，RSD为1.03%；人参皂苷Rg1在1.46~14.60 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9992），平均回收率为99.8%，RSD为1.03%。结论：该方法能将多种皂苷很好的分离检测，而且方法简便、快速、重现性好、准确可靠，可用于三七胶囊的质量控制。
【关键词】三七胶囊；RP-HPLC；梯度洗脱法；三七皂苷R1；人参皂苷Rb1；人参皂苷Rg1
文章编号：1009-5519（2008）12-1767-03 中图分类号：R28 文献标识码：A
三七胶囊为三七细粉制成。具有散瘀止血、消肿定痛的作用，用于咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛。主要活性成分为三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1，《中国药典》2005版一部采取高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1三种成分含量进行质量控制[1]，保留时间过长，本文采用RP-HPLC梯度洗脱法测定简便、快速、重现性好，可满足药物质量控制的要求。
1 仪器与材料
岛津LC-10ATVP系列高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器，SCL-10AVP控制器，LC-10ATVP泵。SHANGPING 21004电子分析天平。三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为110745-200415、110704-200420、110703-200424，均为供含量测定用。乙腈为色谱纯（天津市大茂化学制剂厂）。水为纯化水，其他试剂均为分析纯。三七胶囊为本院制剂室提供（0.4 g/粒），批号分别为：070612，070714，070829。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：岛津Shim-packC18（4.66 mm×150 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水，0~6 min(24∶76)，6~15 min（27∶73→40:60）；流速：1.0 ml・min-1，检测波长：203 nm；柱温：35 ℃；进样：20 μl。三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1对照品及三七胶囊样品的HPLC-UV的色谱图见图1。
2.2 供试液的制备
2.2.1 三七胶囊供试品溶液的制备：取三七胶囊10粒，倒出内容物，混合均匀，精密称取0.8 g，置于100 ml容量瓶中，加入甲醇100 ml浸泡避光过夜，次日超声30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。放入冰箱中避光保存，备用。
2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取80 ℃干燥至恒重的三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品和人参皂苷Rg1对照品适量至量瓶中，加入甲醇制成浓度分别为0.38 mg・ml-1、1.5 mg・ml-1、1.46 mg・ml-1的对照品混合溶液，避光保存，备用。
2.3 标准曲线和线性范围：精密吸取对照品溶液分别稀释为1/20，1/10，1/8，1/5， 1/3，1/2，摇匀，进样量20 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品溶液进样量为横坐标，其标准曲线回归方程和线性范围见表1。
2.4 精密度试验：取稀释为1/5对照品溶液，连续重复进5次样，每次20 μl，测定峰面积，测定结果见表2。结果表明，精密度符合要求，RSD＜2.0%。
2.5 方法重现性考察：取同一批号样品(样品批号为070714)5份， 按“供试液的制备”项下制备并测定，结果见表3。测定结果表明，该方法重复性符合要求。
2.6 供试品稳定性考察：取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h测定各组分峰面积，计算含量，结果见表4。
2.7 加样回收率试验：取已知含量的样品（批号为070714），精密称定重量，共取5份，分别添加三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1混合对照品溶液2 ml，按“三七胶囊供试品溶液的制备”项下处理并测定，结果见表5。
2.8 三批样品含量测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl，按上述色谱条件测定，利用回归方程计算含量，结果见表6。
3 讨论
3.1 高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1，使用紫外检测器检测较之使用蒸发光散射检测器[1]虽因末端（203 nm）有干扰，但选好分析条件仍可获得理想的效果。
3.2 本方法在梯度洗脱中，基线会出现逐渐抬高的现象，通过减去空白对照可以予以消除，且不影响检测结果。
3.3 原质量标准中只规定了总皂苷含量不低于5%，从对样品含量测定的结果看，不同批号制剂所含三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的量差别较大，有必要对制剂含量做出规定，保证制剂质量的稳定。
参考文献：
[1] 朱 洁，温 敏，张洪彬.HPLC-ELSD测定三七胶囊中人参皂苷
Rg1和Rb1[J].中成药，2004，26(1)：33.
收稿日期：2008-03-07
