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【摘要】 目的 建立调脂护肝胶囊的定性定量方法。方法 采用TLC法对处方中的虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝进行鉴别；用高效液相色谱法测定虎杖苷的含量。结果 在TLC色谱中检出虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝；虎杖苷在41．2～247．2 μg范围呈良好的线性关系，r=0．9995，平均回收率为98．8%，RSD为0．9%。结论 所建立的方法能够用于本品的质量控制。�
【关键词】调脂护肝胶囊；定性定量分析；高效液相色谱法；虎杖苷��
Study on qualitative and quantitative methods for Tiaozhihugan capsule
LIU Xiao-qiu． TCM Hospital of Shaoyang County，Hunan 422100，China
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【Abstract】 ObjectiveTo establish qualitative and quantitative methods for Tiaozhihugan capsule． Methods Huzhang,Danshen,Nüzhenzi,Jiaogulan were identified by TLC． Polydatin was determined by HPLC． ResultsHuzhang,Danshen,Nüzhenzi and Jiaogulan were detected by TLC． A good linear relationship was noted at the range of 41．2～247．2 μg of polydatin，(r=0．9995)．The average recovery was 98．8%，and RSD was 0．9%．Conclusion The established methods can be used for the quality control of Tiaozhihugan capsule．�
【Key words】 Tiaozhihugan capsule；Qualitative and quantitative analysis； HPLC；Polydatin
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调脂护肝胶囊系由虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝等药研制而成的中药新药。功能健脾疏肝，活血解毒，降脂护肝。主治脂肪肝，症属脾虚肝郁，瘀毒内结者。为了有效地控制其内在质量，对方中的虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝分别进行了薄层鉴别，对虎杖中的虎杖苷采用高效液相色谱法进行了含量测定[1-2]。�
1 仪器与试液�
LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津）；岛津SPD-10A检测器；N2000色谱工作站；虎杖苷对照品（批号：111575-200502）、丹参酮ⅡA对照品（批号：0766-200010）、齐墩果酸对照品（批号：110709-200304）、人参二醇对照品[3]（批号：701-9405）均由中国药品生物制品检定所提供；化学试剂均为分析纯；调脂护肝胶囊由本院制剂室提供，批号：080325、080329、080402。�
2 薄层鉴别[4]�
2．1 虎杖 取本品内容物2 g，加甲醇25 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2．5 mol/L硫酸溶液25 ml，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖苷对照品加乙酸乙酯制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除虎杖外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺虎杖的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺虎杖的阴性溶液。吸取供试品、阴性样品、对照品溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15�∶�5�∶�1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，阴性无干扰。�
2．2 丹参 取本品内容物2 g，加乙醚25 ml，振摇，放置1 h，滤过，滤液挥干（滤渣备用），残渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除丹参外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺丹参的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺丹参的阴性溶液。吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（19�∶�1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的暗红色斑点，阴性无干扰。�
2．3 女贞子 取上述丹参鉴别项下的滤渣，加甲醇25 ml，加热回流0．5 h，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷（3�∶�2）混合溶液2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除女贞子外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺女贞子的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺女贞子的阴性溶液。吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯（5�∶�2�∶�1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。�
2．4 绞股蓝 取人参二醇对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取虎杖鉴别项下的供试品溶液，作为绞股蓝的供试品溶液。按处方量称取除绞股蓝外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺绞股蓝的空白样品，按虎杖供试品溶液制备方法制成缺绞股蓝的阴性溶液。吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8�∶�3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。�
3 含量测定�
3．1 色谱条件 色谱柱：依利特C18柱，4．6 mm×200 mm，5 μm；检测波长：306 nm；流动相：乙腈-水（15�∶�85）；流速：1．0 ml/min；柱温：25℃；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000。�
3．2 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的虎杖苷对照品适量，加稀乙醇制成每1 ml含20 μg的溶液，即得（实际所配浓度为20．6 μg/μl）。�
3．3 供试品溶液的制备 取本品内容物1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，称定重量，加热回流30 min，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，取上清液，即得。�
3．4 阴性对照实验 取除虎杖外的其余处方量药材，按制备工艺制备缺虎杖的阴性样品，再按上述供试品溶液制备方法制成缺虎杖的阴性溶液，测定，液相色谱图与供试液色谱图比较，结果表明，阴性对照液对虎杖苷的测定无干扰。�
3．5 线性关系考察 精密吸取浓度为20．6 μg/ml的虎杖苷对照品溶液2、4、6、8、10、12 μl进样，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=59178x-32897，r=0．9995。结果表明虎杖苷在41．2～247．2 μg范围内具有良好的线性关系。�
3．6 精密度试验 取同一供试品溶液，精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，计算RSD（%）为1．4%，说明精密度良好。�
3．7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、4、8、12、24 h精密吸取10 μl，进样测定，计算结果RSD（%）为1．7%，说明24 h内稳定性良好。�
3．8 重复性试验 取同一批号样品6份，分别制备供试品溶液，测定、计算。结果RSD（%）为1．3%，说明重复性良好。�
3．9 回收率试验 精密称取已知含量为1．7157 mg/g的同批样品1 g，共6份，分别精密加入虎杖苷对照品溶液（C=0．1531 mg/ml）10．0 ml，即1．531 mg，照供试品溶液的制备方法,以上述条件进行测定,计算回收率，平均值为98．8%， RSD为0．9%。结果见表1。�
3．10 三批样品测定数据 取三批样品， 按上述方法测定，结果见表2。�
4 讨论�
4．1 虎杖主要含大黄素、大黄素甲醚等苷类化合物；绞股蓝主要含人参二醇、2α-羟基人参二醇为母核构成的皂苷类化合物[5]，因此,鉴别实验中采用稀硫酸水解，三氯甲烷提取水解物，以大黄素对照品，人参二醇对照品作对照，用不同的展开剂展开，分别鉴别制剂中的虎杖和绞股蓝，结果斑点清晰，分离度好。菲醌类化合物为方中丹参抗炎的主要成分，此类成分见光易氧化分解，所以在供试品溶液及丹参酮ⅡA化学对照品溶液的制备过程中应尽可能避光，减少放置时间。�
4．2 虎杖为方中的君药，所含的虎杖苷为降脂、抗氧化的有效成分之一，因此，笔者以虎杖苷作为本品的定量评价指标，由于方中成分复杂，干扰大，后经反复摸索，建立了本文的方法，经方法学考察，结果准确,方法稳定，重现性好，能够有效的控制调脂护肝胶囊的质量。�
参考文献
［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部.北京：化学工业出版社，2005：145.�
［2］ 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：202.�
［3］ 陈德昌，鲁静，王宝琴.中药化学对照品工作手册.北京：中国医药科技出版社，2000：117.�
［4］ 吕武清.中成药药材薄层色谱鉴别.人民卫生出版社，1997：98，151，356.�
［5］ 李若存，等.绞股蓝中三萜皂苷元的分离和结构鉴定.南京大学学报，1993：71-74.�
