【www.zhangdahai.com--班主任工作总结】
【摘要】 目的 探讨如何制作优质的LCT液基细胞学片子。方法 对LCT液基细胞学片制作过程中容易出现的问题加以改进。结果 LCT液基片涂片均匀一致，颜色清晰、背景干净、无非特异性染色，节省了病理医生阅片的时间，降低了误诊率，提高工作效率。结论 制作的优质LCT液基细胞片大大提高了宫颈病变的阳性诊断率，值得推广。
【关键词】 LCT液基细胞取材;振荡;粘附剂;染色
【Abstract】 Objective To discuss the method of manufactures the high quality LCT fluid basal cell study flat and thin piece. Methods The question which easy to appear to the LCT fluid basal cell study piece manufacture process was impraved.ResultsLCT fluid substrate smear even consistent, the color is clear, the background clean, nothing but the specificity dyed, saves pathology doctor to read the piece the time, reduced the error diagnostic rate, raised the working efficiency.Conclusion Make high quality LCT fiuid basal cell can the positive increase diagnosis rate of cervical lesions,it is worthy of clinic application.
【Key words】 LCT fluid basal cell selection; Vibration;Adhesion agent; Dyeing
液基细胞学检查是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类筛选及诊断，它是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏染色检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率，宫颈防癌细胞学检查对宫颈癌细胞的检出率为100%，同时还能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。液基技术是应用于妇女宫颈癌筛查的一项先进的技术。那么怎样才能制作出一张优质的液基细胞学片呢？制作优质LCT液基细胞片跟临床医生取材、固定、技术员的制片及染色密切相关，每一步都要求严格操作。
1 材料与仪器
取材毛刷、液基细胞保存瓶、载玻片、细胞粘附剂、离心管、离心机、转移器、真空泵、微型旋涡混合仪、染色架、染色槽、100%酒精、PBS缓冲液、苏木素染液、EA/OG染液、二甲苯、盖玻片、中性树胶。
2 方法
作者将制作优质LCT液基细胞片阐述如下。①临床医生取材，要求使用一次性宫颈取样刷，取材时把毛刷中间较长的部分插入宫颈管，外侧毛刷抵住宫颈外口，力度适中的推向宫颈，并按顺时针方向3～5圈，取出刷头全部放入细胞保存液;②收集标本、振荡标本瓶30 s;③于干净的玻璃片上涂上细胞粘附剂、自然干燥或37度恒温箱干燥;④于离心管上加入4 ml的细胞分离提取液;⑤用注射转移器吸取标本瓶内标本置加有分离提取液的离心管上；⑥离心1107转、离心力200 g、2 min;⑦用真空泵、把离心管上的上清液慢慢吸走;⑧离心2214转、离心力800 g、10 min;⑨弃上清液，把离心管放在微型旋涡混合仪转动不同方向振荡，静止10 min;⑩于此离心管上加入400～600 ml的PBS缓冲液;［11］染色架上放上涂有细胞粘附剂的玻片，放上染色槽，吸取400 ml的标本液于染色槽内;［12］静上5 min，倒掉染色槽内的标本;［13］加入100%酒精于染色槽内固定1 min、倾倒，加入PBS缓冲液于染色槽内2次各1 min、倾倒；［14］加入苏木素染色剂2 min倾倒；［15］加入100%酒精2次各1 min、倾倒；［16］加入PBS缓冲液于染色槽内2次各1 min、倾倒；［17］加入EA/OG染色剂6 min倾倒；［18］加入100%酒精3次各1 min倾倒；［19］御下染色槽把玻片放入装在玻片架上于100%酒精脱水、二甲苯透明；［20］中性树胶封片。
2 结果
液基细胞片涂片薄、均匀一致，颜色清晰，背景干净，有效诊断细胞充足，从而提高了涂片阳性检出率，且制片后保存时间长。
3 讨论
临床医生取材部位要准确、力度要适中，保证将关键部位［1］（如宫颈鳞柱交界处）的细胞收集到。如果临床在做了阴道镜，在宫颈涂过醋酸或者碘等之后再取材，细胞就容易融掉，所以阴道镜和LCT液基细胞学取材应分开，取样前48 h避免性生活、阴道用药和冲洗。取材后的宫颈刷刷头应立即浸入细胞保存液中，避免了常规巴氏涂片过程中遗留在取材器上的细胞随取材器一起被抛弃和细胞过度干燥［2］。振荡保存瓶，至少30 s，使刷头上的细胞能全部洗到保存液里。涂粘附剂的载玻片必须要干净，粘附剂分布才均匀，且涂上粘附剂的载玻片最好不要隔夜使用，载玻片应完全干燥，如遇潮湿天气，玻片应放置37℃恒温箱内干燥，打开后的细胞粘附剂使用时间一般不超过3个月，否则都会导致细胞与玻片粘附力下降，细胞量减少。用注射转移器吸取标本瓶内标本至离心管，吸取时应来回混匀标本，使细胞能够最大量地被吸取。第一次离心后用真空泵吸取上清液，吸取时应慢慢放入吸取，以免标本污染真空泵上的白色接头，导致标本交叉污染。第二次离心后把上清液倒掉，于微型旋涡混合仪上转动不同方向尽可能把标本振荡1～2 min，避免细胞重叠。于此离心管上加入200～400 ml的PBS缓冲液（可视标本多少加入）。把预处理的载玻片放在染色架上，安上染色槽，吸取200～400 ml标本液于染色槽内，标本应静止至少5 min，使细胞与玻片尽可能地粘附，防止染色过程中脱片。弃去染色槽内的标本,染色前固定应用100%酒精，PBS缓冲液pH值应为7.2～7.4，染色时间充足，这样才能保证苏木素和EA/OG颜色清晰，且不易褪色。巴氏染色的涂片［2］，保存时间短，胞浆褪色较快，如果染色效果差，保存时间就更短。所以染色时则应注意：①染色过程中，EA/OG上色应足够，其实胞浆染色时间适当久一点，在镜下不会有太多影响，但对防止片子过早褪色是有帮助的。②染色过程中，pH值应控制好，一般来说褪色是由于偏碱所致，EA/OG在碱性环境中不容易上色，即使上色了其结合性也不好，时间久了就容易褪色。③染色完成后，片子不应在酒精中浸泡过久，EA/OG的上色很大程度上是一种物理作用，酒精浸泡会使其褪色并影响长时间的保存。④封片时中性树胶二甲苯稀释过多，这样封出来的片子，密封性不好，时间久也会褪色，尤其会加速苏木素的褪色。⑤实验室湿度高于75%时，也会影响EA/OG染色，故遇下雨或潮湿天气，应关闭门窗，最好安装一台抽湿机，保持干燥的室内环镜，稳定染色效果。⑥天气寒冷时不易上色，苏木精、EA/OG染色时间也应相应延长。⑦苏木素应经常过滤，避免染料沉渣污染细胞片。透明用酒精、二甲苯应该每星期更换一次，以保证细胞脱水彻底，片子清晰，透亮。液基细胞学采用专用的刷状取样器，能取到几乎所有的宫颈细胞，包括宫颈管内膜细胞。通过对样本的离心沉淀，分离样本中的杂质如：血液、粘液、细胞碎片等，从而得到较为“干净”的宫颈上皮细胞，再将细胞薄层平铺制片，至使细胞结构清晰，背景干净［4］。与传统的宫颈涂片相比，其优点显而易见，并大大提高了宫颈病变的阳性诊断率，漏诊率下降。
参 考 文 献
［1］ 张红丽,张瑜,张海雁,等.传统宫颈细胞学检查与液基细胞学检测的比较与评价，实用医技杂志社，2008，15（28）：3804.
［2］ 滕淑文,何晓丽.液基薄层细胞学检测法在宫颈癌筛查中的应用.中国煤炭工业医学杂志，2006，9（8）：788-7902.
［3］ 马博文，贾支红，苗新芳.子宫颈细胞病理学诊断图谱，人民军医出版社,2000:31-35.
［4］ 谢逢春.液基细胞学检查在子宫颈病变诊断中的应用研究杂志.中外健康摘，2011，13（8）：14-15.
