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[摘要] 目的:建立田大夫妇科胶囊的质量标准。方法:采用TLC法对处方中延胡索进行定性鉴别,并用HPLC法对处方中三七进行含量测定。结果:薄层色谱斑点清晰,专属性强;在11.54～577.00 μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.999 8);平均回收率99.71%,RSD=1.70%(n=9)。结论:该方法准确灵敏、简便、重复性好,能有效控制该制剂的质量。
[关键词] 田大夫妇科胶囊质量标准;TLC;HPLC;人参皂苷Rg1;
[中图分类号] R927.1
[文献标识码] A
[文章编号] 1674-4721(2009)08(a)-050-02
田大夫妇科胶囊是由三七,延胡索,川芎,五灵脂等10味中药组成的中药复方制剂,适用于气滞血瘀,症瘕积聚,经期腹痛,月经失调。为了更好控制该制剂的质量,本文分别对处方的延胡索进行鉴别及三七进行含量测定,所实验的质量标准方法操作简便、结果准确,适合作为法定质量标准。
1 材料、仪器和试药
1.1 材料
田大夫妇科胶囊及其阴性对照均由惠州市九惠制药有限公司提供;延胡索对照药材(批号:120928-200604),延胡索乙素对照品(批号:0726-200208),人参皂苷Rg1对照品(批号:110203-200726)均购于中国药品生物制品检定所。
1.2 仪器及试剂试药
KQ-250超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司;YB-Z真空恒温干燥箱:天津药典标准仪器厂;瑞士Mettler AE-240及AE-200电子分析天平;Agilent 1100 Series高效液相色谱仪;CAMAG PEPROSTAR3 薄层色谱成像系统。
硅胶预制板:烟台市化学工业研究所;水为双蒸水,乙腈为色谱纯,其他试剂、试药均为分析纯。
2 测定方法与结果
2.1 延胡索薄层色谱鉴别
取本品内容物1 g,加甲醇50 ml,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10 ml使溶解,用浓氨溶液调至碱性(pH:9～10),用乙醚振摇提取3次,每次10 ml,合并乙醚液,挥干,残渣加甲醇1 ml溶解,作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1 g,同法制成对照药材液。再取延胡索乙素对照品,加甲醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述三种溶液各4 μl,分别点于同1个1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂,展开,展至约10 cm,取出,晾干,置碘缸中约3 min后取出,挥尽板上吸附的碘后,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色荧光斑点,阴性对照无干扰。见图1。
2.2 三七含量测定
2.2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)为流动相;检测波长为203 nm;进样量为10 μl;流速为1.0 ml/min。在此条件下人参皂苷Rg1与其他组分分离度大于1.5,理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于3 000。
2.2.2 供试品溶液制备 取装量差异项下内容物,混匀,取约2 g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷适量,加热回流3 h,弃去三氯甲烷液,药渣挥尽溶剂,连同滤纸筒移入100 ml离心管中,精密加水饱和的正丁醇50 ml,称定重量,密塞,放置过夜,超声处理1 h,放冷,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液20 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,即得[1]。
2.2.3 对照品溶液及阴性对照溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1毫升含人参皂苷Rg 10.2 mg的溶液,即得。取缺三七样品,称取相当于供试品的量,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.2.4 准确度试验 精密称取对照品0.050 60 g,置50 ml量瓶,加甲醇使溶解,稀释至刻度,摇匀,作为加样回收用人参皂苷Rg1对照品贮备液(每1毫升含人参皂苷Rg 11.012 mg)。加样回收供试品溶液的制备:精密称取田大夫妇科胶囊(批号20080402,平均装量0.415 1 g,含量0.48 mg/粒)供试品约1.0 g,分别置索氏提取器中,加三氯甲烷适量,加热回流3 h,弃去三氯甲烷液,药渣挥尽溶剂,连同滤纸筒移入100 ml离心管中,精密加入上述加样回收用对照品贮备液2 ml,精密加水饱和的正丁醇50 ml,称定重量,密塞,放置过夜,超声处理1 h,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量[2],滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液20 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。结果平均回收率为99.71%,RSD=1.70%(n=9)。
2.2.5 精密度 分别由3名检验员在不同时间,用同一台设备,按含量测定方法测定同一批号田大夫妇科胶囊,结果平均值为0.48 mg/粒,RSD为0.9%。
2.2.6 专属性 精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl,分别注入高效液相色谱仪[3],按含量测定方法测定。结果未见阴性对照溶液对试验有干扰。
2.2.7 线性 精密称取人参皂苷Rg1对照品0.011 54 g至20 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液(577 μg/ml)。浓度1～3:精密吸取1 ml贮备液置50、20、10 ml量瓶中,加甲醇至刻度;浓度4～7:精密吸取1、2、3、4 ml贮备液置5 ml量瓶中,加甲醇至刻度;浓度8:贮备液[4]。以上8个浓度溶液注入液相色谱仪,以峰面积为纵坐标、人参皂苷Rg1浓度(μg/ml)为横坐标,在11.54～577.00 μg/ml范围内,得回归方程为:Y=3.458,X=-3.733 4,r=0.999 8。
2.2.8 耐用性 取同一供试品溶液,使用不同色谱柱(Kromasil 100-5C18 250 mm×4.6 mm、phenomenex Gemini C18 250 mm×4.60 mm 5 μm、Venusil XBP-C18 4.60 mm×150 mm,5 μm),按拟定方法进行含量测定,结果不同色谱柱测得结果RSD为1.4%,表明人参皂苷Rg1含量测定结果不受色谱柱影响[5]。
2.2.9 供试品含量测定 取不同批号的田大夫妇科胶囊3批,按拟定含量测定方法测定人参皂苷Rg1的含量,结果批号20080402含量为0.482 mg/粒,批号20080505含量为0.615 mg/粒,批号20080507含量为0.750 mg/粒。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
采用《中国药典》2005年版(一部)三七药材[含量测定]项下测定波长203 nm为本品测定波长。
3.2 提取方法与时间的选择
曾尝试11种提取方法,但以本文采用方法较为理想。分别考察超声处理10、30、60 min提取效果,试验结果表明超声30 min以上样品的含量较超声10 min的要高,为使提取完全,选择了提取方式为超声60 min。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2005:94.
[2]刘灿仿,汶耀琴.RP-HPLC梯度洗脱法测定心脑贯通滴丸中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量[J].中成药,2007,29(8):1167-1169.
[3]龙全江,郁洋.RP-HPLC法测定血塞通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量[J].现代中药研究与实践,2007,1:43-45.
[4]周新蓓,欧阳荣.散血明目片中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1的含量测定[J].中成药,2008,30(5):692-695.
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