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【摘要】目的:评价化学发光法(ECLIA)测定甲胎蛋白(AFP)的临床应用价值。方法:在罗氏cobas e411分析仪上用化学发光分析法对AFP进行测定,同时用酶联免疫吸附法(ELISA)进行AFP的测定。结果:两法呈正相关,都有较好的重复性,但ECLIA法CV值明显小于酶联免疫吸附法,ECLIA比(ELISA)具有更宽的检测范围。结论:应用ECLIA检测AFP,具有灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,是目前测定AFP较好的方法,适用于临床对AFP进行检测,有着良好的发展前景。
【关键词】甲胎蛋白;化学发光法;酶联免疫吸附
【中图分类号】R453【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-118-1
甲胎蛋白(AFP)是胚胎发育早期的一种主要血清蛋白,分子量约70000,含糖40g/L,由96%蛋白质和4%的碳水化合物组成,正常人血清中AFP含量在2-8g/L之间,AFP正常值一般低于25g/L,AFP是诊断肝癌最特异的标志物,是目前最好的可实际用于早期诊断原发性肝癌的指标,可在症状出现前6-12 mo作出诊断。临床上检测AFP的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(ECLIA)等,本文采用化学发光法分析法(ECLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)对42份血清进行AFP测定,现报告如下。
1材料与方法
1.1一般资料本院2009年1月-12月收治的42例肝癌患者,经影像学、组织病理学检查确诊为原发性肝癌,抽取肝癌住院患者晨血5ml,分离血清。将其中15份血清混合后分装(用于精密度试验),置于-2O℃冰箱保存,集中测试。
1.2仪器与试剂ECLIA法采用罗氏公司生产的cobas e411型化学发光分析仪,测定试剂及配套试剂,ELISA法定量试剂盒为郑州博赛生物工程有限责任公司生产。
1.3方法
1.3.1化学发光免疫分析法按仪器操作规程和试剂说明书进行测定。
1.3.2ELISA按操作规程进行测定。
1.4统计学分析用SPSSI3.0进行数据整理和统计分析,P0.05),直线回归方程为:YECLIA=0.9463XELISA+0.9174,r=0.9528,两法呈正相关。
2.2精密度试验[1]按NCCLS评价方案,用ECLIA分析法和ELISA法分别对取低、中、高三个不同浓度的血清AFP连续测定20次,再每天测1次,共测20d,结果显示ECLIA分析法的CV值明显小于ELISA法,结果见表1
表1 两种方法测定AFP精密度对比
样本 标本 次数 ECLIA法 次数 ELISA法
批内CV% 批间CV% 批内CV% 批间CV%
1
2
3 低值 20 3.1 2.4 20 6.5 5.8
中值 20 2.4 1.3 20 5.6 5.3
高值 20 1.9 0.9 20 5.3 4.9
2.3线性范围评价取高值混合血清作6点倍比稀释,各复测3次,以原倍血清测定值为标准按稀释倍数算得其理论值,与两种方法实际测定值比较进行线性分析,ECLIA分析法回归方程为:Y=0.9675X+1.0526,r=0.9846;ELISA法回归方程为:Y=0.7347X+28.5903,r=0.9243。ECLIA分析法在950ng/ml范围内线性良好;ELISA在560ng/L范围内线性良好。ECLIA分析法比ELISA法具有更宽的检测范围。
2.4灵敏度测试重复测定无标准品样本,n=20,平均数加2个标准差所对应的浓度为最低检测值。ECLIA测得AFP灵敏度为1.28ng/mL。
3讨论
上世纪70年代中期Arakawe首先报道ECLIA,发展至今已经成为一种成熟的、先进的超微量活性物质检测技术,应用范围广泛,是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法,也是目前最先进的标记免疫测定技术,主要具有灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、方法快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点。高灵敏度的化学发光法已被广大研究人员所认可,正逐渐替代传统的生物检测技术。另外,ELISA法定量AFP试剂盒的线性及标准问题是测定结果准确性的关键,ELISA法的“钩状效应”,即测定显色随着待测标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后,测定吸光度随抗原浓度的增加而开始下降至不显色,容易造成假阴性结果。电化学发光免疫法检测甲胎蛋白的原理为双抗体夹心法,由于电化学发光采用磁性微珠包被技术,磁珠体积小,可以吸附更多的抗原或抗体,同时磁珠的核心是铁,在磁场中很快下沉,因此容易进行洗涤和固相载体分离。发光信号检测的宽线性加上独特的标记物本身循环发光,使电化学发光检测的线性范围更宽[2]。由于非同位素金属三联吡啶钌在自然环境下非常稳定,因此用它标记的试剂也非常稳定。总之,应用ECLIA分析法检测AFP,具有灵敏度高、重复性好、稳定性好等优点,有着良好的发展前景。
参考文献
[1] 杨昌国等.精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用[J].临床检验杂志,1999,17(1):47.
[2] 梁崴.电化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较[J].中华医学检验杂志,2001,24(4):25.
