【www.zhangdahai.com--活动方案】
【摘要】目的：探寻虎杖有效成分提取的最佳工艺条件。方法：运用超声技术辅助提取虎杖的虎杖苷，采用高效液相测定其含量，辅以适当的分析及实验对比。结果：提取方法影响大于提取次数，大于溶剂量优选条件为采用超声辅助回流提取3次。加入20倍的溶剂量。结论：该方法稳定，可靠，简便，快速，准确。
【关键词】虎杖；提取工艺；提取率
虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum CuspidatumSieb.et Zucc.的干燥根茎及根。［1］具有清热解毒，活血定痛，祛风利湿，化痰止咳，泻下通便的功效，其制剂目前许多法定标准及各类文献均有记载，多数厂家的提取工艺大都采用水煮醇沉法或醇提法，其法存在一些不合理因素，从而影响了成品的主要成分含量，为了进一步提高产品质量，我们对虎杖的提取工艺进行了探讨并对提取溶媒的用量，提取方法，提取次数等工艺条件进行了实验，并以虎杖苷为指标进行提取条件论证及含量测定。通过实验对比，从中选择最佳提取工艺条件。希望可以为虎杖有效成分提取的新方法研究提供参考。
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪（岛津SPD―10AVP监测器，岛津LC―10ATVP 泵）,柱温箱（汉邦HB―230A型，汉邦科技有限公司），25KHz超声波清洗器（KQ2200E型，昆山市超声仪器有限公司），十万分之一电子天平（梅特勒・托利多，瑞士梅特勒・托利多仪器有限公司），万分之一电子天平（梅特勒・托利多，瑞士梅特勒・托利多仪器有限公司）。
1.2试药
虎杖苷对照品（中国药品生物制品坚定所，编号111575―200502，供含量测定用），乙醇（分析纯，南京宁试化学试剂有限公司），乙腈（色谱纯，上海陆都化学试剂厂），水（超纯水），虎杖（批号20061206，安徽协和成药业有限公司，由本厂质量部陈主任鉴定）。
2方法与结果
2.1因素与水平
根据相关文献报道和预实验，确定正交试验的考察因素为溶剂的用量A，提取次数B，提取方法C。各因素选取3个水平，采用L9（33）正交表安排试验，见表1。
表1 因素水平
2.2色谱条件
色谱柱（SinoChrom ODS―BP C185μm4.6mm×200mm），流动相：乙腈―水（23∶77），紫外检测波长：306nm，流速：0.8mL・min-1，柱温：25度，进样量：10μL。在该色谱条件下，虎杖苷与本品其它组分达到基线分离，与其相邻峰的分离度大于1.5，按虎杖苷峰计算理论塔板数大于3000。
对照品（1虎杖苷）供试品（1虎杖苷）
2.3对照品制备：精密称取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的虎杖苷对照品11.26mg。置25mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度。摇匀，精密量取1mL，置25mL量瓶中，加乙醇至刻度。摇匀，即得（C对=18.02mg・L-1）。
2.4线性关系
分别精密吸取2.3项下虎杖苷对照品溶液2.0，4.0，8.0，12.0，16.0和20.0mL进样，以峰面积积分值为纵坐标（Y），虎杖苷的进样量为横坐标（X）进行线性回归，得到回归方程为：Y=7.1606X+0.5551，r=0.9999，结果表明虎杖苷进样量在36.04―360.40mg范围内呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，测得对照品溶液峰面积，计算RSD为0.6%（n=5）表明精密度良好。
2.6稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于0，1，2，4，8和24小时进行测定，结果24小时内测定结果稳定，RSD为1.05%（n=6）。
2.7重复性试验
取同批样品（批号20061206）5份，按2.9样品测定项下所述方法测定，结果RSD为1.74%，结果表明本方法重现性良好。
2.8加样回收率试验
精密取已知含量的虎杖粉末0.02g（样品含量为1238.4μg・g-1）5份，分别置25mL量瓶中，各精密加入一定浓度的对照品溶液（2.3项下对照品溶液）5mL。加乙醇至25mL，摇匀，照供试品溶液同法制备。按上述色谱条件，每次进样10μL，测定虎杖苷含量，虎杖苷平均回收率为98.99%，RSD为1.54%。测定结果见表2。
2.9样品测定
精密取本品虎杖粉末0.02g，称定后置25mL量瓶中。加乙醇适量，采用适当方法提取1小时，[2]取出避光放冷至室温。用乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤。取续滤液作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件测定，分别对在不同因素下制备的供试品测定，测定结果见表3。
表3 正交实验虎杖苷含量测定结果
3分析和结论
根据表3直观分析可知，3因素对实验结果影响的程度为CBA，即提取的方法影响最大，其次是提取的次数，最后是溶剂的用量。结合各因素K值的大小可知最优的[3]工艺条件是C＞B＞A即采用回流加超声的方法，提取3次，加入20倍的溶剂量。由方差分析可知，在本实验的考察范围内，3因素对虎杖苷的提取都有显著影响。
本实验利用高效液相（HPLC）测定虎杖苷的含量，方法稳定可靠，准确性高，操作简单。并且通过正交试验确立了最优的工艺条件。但本文最为重要的意义在于超声波提取技术辅助回流提取的应用，［4］虽然由于没有适合大生产的提取设备，以及超声波提取设备的工程化暂时无法向产业化发展，但这一技术的应用为将来进一步的工业化生产提供了参考。
参考文献
［1］中国药典［S］．一部．2005∶145
［2］谭桂莲，秦邦才．时珍国医药［J］．2006（1）：4
［3］原思通．医用中药饮片学［M］．中华人民共和国人民卫生出版社．2001∶135
［4］谢秀琼，周叔芳，韩丽．现代中药技术［M］．北京：化学工业出版社．2004∶38
