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2005年9月，我市某养猪场在1周内先后有10头猪出现高温体征后死亡，同时有2名养猪人员在参与宰杀处理病死猪后出现化脓性脑脊髓膜炎症状。现将调查结果报告如下：
1 材料与方法
1.1 调查对象
某养猪场所有接触病死猪人员及所有猪。对发病人员采集血液标本与脑脊液标本，并采集病死猪心腔内血标本和1头濒死猪耳背静脉血标本。
1.2 材料
双相培养基、血琼脂基础、革兰氏染液、氧化酶试剂、API 20 Strep链球菌鉴定条均为法国生物梅里埃公司生产；MH培养基为江苏省卫生防疫站微生物试剂厂产品；无菌羊血由苏州天能生物有限公司提供；触酶试剂自配。
1.3 方法
1.3.1 采样 9月20日采集病例1血液标本与脑脊液标本（考虑到病人入院后已采集脑脊液标本，不宜再采，即转种新区医院检验科采集的脑脊液标本）；9月22日采集病例2血液标本与脑脊液标本（同为转种标本）；9月22日到养猪场解剖采集1头病死猪心腔内血标本和1头濒死猪耳背静脉血标本。另新区医院检验科对2病例各采集血液标本行病原学检验。
1.3.2 检测 按照“人感染猪链球菌病样品的采集运送与实验室检测方案”（下称“方案”）采集标本接种双相培养基进行37℃增菌培养，每天观察增菌培养情况，若有菌生长，取双相培养基固相上单个菌落行革兰氏染色（G�+球菌，呈链状排列），立即转种血平板（37℃24 h长有针尖状α溶血菌落，革兰氏染色为短链状排列球菌，结晶紫着色不良）、MH平板（生长缓慢，37℃48 h才有针尖状菌落生长）进行分离纯培养；触酶试验阴性、氧化酶试验阴性，同时取单个菌落在血平板三区密集划线获得大量纯培养菌落后，应用API 20 Strep链球菌鉴定条进行生化鉴定（操作严格按试剂盒规定进行）；若连续37℃增菌培养7 d仍无菌生长，则转种血平板确认无菌生长，报告无菌生长。
2 结果
2.1 流行病学调查
该养猪场共养母猪15头，苗壮猪111头，9月16日出售壮猪12头。9月16～22日共有10头猪病死，分别为16日1头、17日3头、20日2头、21日1头及22日3头（22日以后未再有猪病死现象），猪罹患率8.77%（10/114），发病猪全部死亡。 其中9月16、17日病死的4头猪自行宰杀。参与宰杀处理人员共有6人，另有其家人3人食用过煮熟的死猪肉，有2人分别于9月17、18日发病，罹患率22.22%（2/9），无死亡病例。
2.2 临床症状及剖检病变
2.2.1 病死猪体征及剖检病变 病猪主要症状为发热（体温�＞39.5℃），精神状态很差，濒临死亡，四肢跛行，有神经症状，病情变化急剧，几小时后出现口吐白沫，四肢呈游泳状后死亡。对病、死猪剖检发现：全身淋巴结肿大、化脓，肝门淋巴结出血，脾脏边缘有出血点，呈锯齿状，有1头猪眼结膜充血，其余实质性器官及外表无明显的病理变化，高度疑似猪链球菌病。
2.2.2 病人临床表现 病人主要临床表现为先发热（体温�＞39℃），咽痛，约2～3 d后，病情急剧变化，出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻，并迅速出现头痛、神志不清。查体：皮肤未见明显伤口，无皮下出血、瘀点、瘀斑，颈项强直，脑膜刺激症阳性。实验室检查：血常规白细胞计数明显升高（＞27×10�9/L），中性比例＞90%；脑脊液为淡黄色、浑浊，有大量有核细胞，潘氏试验阳性，葡萄糖浓度明显降低，氯化物略偏高；肝、肾功能均正常。临床考虑为化脓性脑脊髓膜炎，给予较大剂量青霉素、罗氏芬等抗菌治疗后病情逐渐好转，神志逐渐清楚，后病痊愈，整个病程时间超过1个月。
2.3 病原学检验
2.3.1 病例标本结果
① 脑脊液标本： 2份病例的标本增菌后转种血平板37℃ 24 h长有针尖状α溶血菌落，G�+链状排列球菌（结晶紫着色不良），触酶、氧化酶试验阴性，其中1份标本API 20 Strep 链球菌鉴定条24 h生化反应结果：V-P、马尿酸盐水解、七叶苷、β-半乳糖甙酶、碱性磷酸酶、核糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、山犁醇、菊根粉、淀粉试验阴性，吡咯酮基芳胺酶、α-半乳糖甙酶、β-葡萄糖醛酸酶、亮氨酸芳胺酶、精氨酸双水解酶、乳糖、海藻糖、棉子糖、糖原试验阳性，鉴定为猪链球菌（Ⅱ型），生化编码0741452（%id=98.3，T=0.59）；另1份标本API 20 Strep链球菌鉴定条24 h生化反应结果除精氨酸双水解酶试验阴性外其余同前一标本，鉴定为猪链球菌（Ⅱ型），生化编码0740453�（%id=97.9，T=0.67）。
② 血液标本：均无菌生长（新区医院检验科对2份病例血液标本的检测结果为均无菌生长）。
2.3.2 病、濒死猪标本结果
① 病死猪心腔内血标本:标本增菌后转种血平板，37℃ �24 h长有针尖状α溶血菌落，G�+链状排列球菌（结晶紫着色不良），触酶、氧化酶试验阴性， API 20 Strep链球菌鉴定条24 h生化反应结果：V-P、马尿酸盐水解、碱性磷酸酶、核糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、山犁醇、菊根粉试验阴性，七叶苷、吡咯酮基芳胺酶、α-半乳糖甙酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖甙酶、亮氨酸芳胺酶、精氨酸双水解酶、乳糖、海藻糖、棉子糖、淀粉、糖原试验阳性，鉴定为猪链球菌（Ⅱ型），生化编码4751453�（%id=99.5，T=0.94）。
② 濒死猪耳背静脉血标本：无菌生长。
上述分离鉴定到3株菌株经送省疾病预防控制中心复检全部符合。
3 讨论
经流行病学调查、临床症状及剖检病变分析和实验室病原学检验，基本可以认定这是一起由Ⅱ型猪链球菌（脑脊髓膜炎型）引起的较小规模的人畜共患疫情。猪链球菌（Streptococcus suis）病是由多种不同群的链球菌引起的不同临床类型传染病的总称，是一种人畜共患的国家乙类传染病［1］。根据荚膜多糖抗原的差异，可将猪链球菌分为很多血清型，其中Ⅱ型是最有致病力、最常从病猪体分离出的血清型［2］。人感染猪链球菌病平均潜伏期2～3 d，临床表现有发热、头痛、恶心、呕吐的脑脊髓膜炎型，皮肤出现出血点、瘀点、瘀斑的败血症型及两者混合症状，重者可出现昏迷、凝血功能障碍、肝肾功能不全、急性呼吸窘迫综合征。
在这起疫情病原学检验中，应用双相培养基前增菌,结合API 20 strep生化鉴定，结果满意，但需注意以下问题：① 该菌二代转种后，革兰氏染色结晶紫着色不良，易误判为G�-球菌；② 该菌MH平板上生长缓慢，按常规双歧索引需时较长，在实际鉴定中，先用API 20 strep进行生化鉴定，后补充触酶、氧化酶试验加以证实，缩短了检测时间；③ 此次检出病原菌的均是病例脑脊液，而多次病例血培养均未检出，这同临床专家组会诊确认为脑脊髓膜炎型猪链球菌病,无败血症是相符的。此外，我们在野外深埋处进行组织标本采集时，为了避免环境杂菌污染，我们没有按“方案”的规定无菌采集淋巴结、肝脾等脏器，仅用腰穿针无菌穿刺采集了污染可能很小的心腔内瘀血，获得病原菌纯培养。
据江苏省农科院兽医研究所调查，发现正常猪群中链球菌Ⅱ型的带菌率非疫区平均为42.6%，疫区平均为39.0%［3］。猪链球菌Ⅱ型不一定都有致病性，其毒力也有差异。致病因子溶菌酶释放蛋白（MRP）和细胞外蛋白因子（EF）是Ⅱ型猪链球菌的2种最重要的毒力因子，并可作为判定菌株毒力的指标。根据MRP和EF的有无,Ⅱ型猪链球菌存在3种表型，即MRP�+、EF�+（致病性强），MRP�+、EF�-（致病性较弱），MRP�-、EF�-（不致病）［2］。而MRP和EF的有无，能否为临床采取合理治疗、判断预后及预测疫情是爆发流行或是散发流行提供依据，目前无更多资料证实。在本起疫情中，2病例在整个病程中均未出现DIC、肝肾功能不全等并发症，愈后良好，整个疫情呈局部散发流行，是否与菌株毒力有关，有待省疾控中心进一步检验确认后探讨。
4 参考文献
［1］Higgins R,Gottschalk M,Boudreau M,et al.Description of six new capsular type of Streptococcus suis［J］.J Vet Diag Invest,1995,7:405-406.
［2］刘华雷,赵永刚,王君玮,等.四川资阳猪源猪链球菌病病原的分离与鉴定［J］.中华微生物学和免疫学杂志,2005,25(12):1006～1010.
［3］何孔旺,倪艳秀,王继春,等.猪链球菌Ⅱ型的分子流行病学研究［J］.中国人畜共患病杂志,2002,18(5) :45～47.
(收稿日期：2006-03-13)
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