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王善龙
（河南科技大学第二附属医院医学检验科，河南 洛阳 471000）
根据新型冠状病毒肺炎疫情防控工作需要，为全力支援上海市大规模新型冠状病毒核酸筛查检测工作，2022年4月6日，河南省洛阳市卫生健康委员会响应河南省卫生健康委员会统一部署，紧急抽调洛阳市各大医院30名分子检验业务骨干组建成核酸检测医疗队驰援上海。文章就洛阳医疗队在上海市青浦区气膜方舱实验室大规模核酸检测工作的经验进行总结，为将来可能出现的新型冠状病毒核酸或其他突发公共卫生事件的大规模实验室筛查工作提供参考。
（1）气膜方舱实验室由多个封闭式的白色气膜舱组合而成，不同舱体有各自的功能分区，分别是试剂准备区（Ⅰ区）、标本制备区（Ⅱ区）、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增分析区（Ⅲ区）。3个功能区域在物理空间上完全相互独立，只能通过专门设置的传递窗传递标本。以舱体划分功能区，一方面可以避免不同工序的干扰，另一方面也确保了检测人员和检测环境的安全。气膜方舱实验室属于装配式建筑，选址灵活，运输便捷。本次上海市青浦区河南医疗队方舱实验室即是建设在原室内羽毛球场内（图1）。另外，气膜方舱还能重复利用，具备优良的环保属性。当完成检测任务后，可快速恢复场地原貌。
（2）由于医疗队到达上海时，气膜方舱实验室已经建成，生物安全柜、核酸提取仪等许多仪器设备已配置完成，无法对气膜方舱实验室的工作流程进行改动，只能在已有实验室布局基础上进行优化。
图1 河南医疗队气膜方舱PCR实验室示意图
（3）在气膜实验室安装过程中，生产商一定要提前与实验室负责人进行沟通，确保舱体布局合理。各区常压，一定要选择通风良好的场地。根据单一流向的要求开门、封门、安装传递窗。各区根据区域面积配备移动紫外线消毒灯3～5台，门上都要有明确的标识，每个分区内的仪器、设备、实验用品等要有明显的编号及颜色标识。在实验室内要有相应的制冷设备，尤其是仪器较多的Ⅲ区，要根据仪器数量安装相应的空调或冷气扇，以保持舱内温度适宜，同时要注意空调的排水问题，避免造成场地的积水，影响实验室安全。
新型冠状病毒核酸检测是一项风险较高的操作，生物安全防护极为重要。气膜实验室的建设必须符合二级生物安全实验室和临床基因扩增检验实验室的基本要求，还应符合《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》和《新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）》的相关要求。实验室建设完成后，开始实验前要由省级医疗机构院感专家对全队成员进行生物安全防护再培训，尤其是防护服的穿脱、医疗废物的处理等现场培训，并进行考核，所有队员考核合格方可入舱操作[1]。
每个班组、每个实验区均要设置1名生物安全员，每次进出实验室均要有生物安全员对所在班组及区域队员的操作、防护服的穿脱等过程进行监督。严禁队员单独穿脱防护服。每天对所有队员进行至少1次的核酸检测和至少2次体温测量，并建立健康档案。
3.1 标本交接的经验
标本应由专人送检，送检需要送检单、转运箱码等信息。实验室工作人员需对所送检样本来源、数量等信息进行登记、核对，并将所有送检单留存好，按日期进行装订，以备核查。标本接收人员要登录软件对转运箱码进行扫码接收，接收后要及时转运入实验室，在标本制备区生物安全柜内打开转运箱，并对标本编号进行核对，确认无误后进入检测流程。
（1）由于目前大规模核酸检测标本均为10混1或20混1，所以标本体积较大。洛阳医疗队所在的青浦区气膜实验室单日最大可接受标本量为10万管，日均检测量超过6万管。短时间内要接收大量标本，所以在标本接收处的工作人员不仅要操作熟练，而且要有体力，最好安排年轻的检测人员值守。
（2）在全员筛查标本量非常大的情况下，一旦发现其中某管异常需要复查时，要迅速、准确地从几万个标本中找出这个标本，快速复查并上报，需要对标本进行唯一编号。同时，为保证标本具有准确的可溯源性，我们为每个生物安全柜设置了专属字母编号，A、B、C、D、E、F为Ⅱ区1的生物安全柜，G、H、I、M、N、O为Ⅱ区2的生物安全柜。在某个生物安全柜进行加样的操作人员流程表（图2）的编号前加上该生物安全柜的字母编号，同时将生物安全柜与提取仪进行对应，某台提取仪仅对某台安全柜的标本进行提取。这样，即使发现阳性标本，也能在第一时间找到安全柜和对应的提取仪，及时进行消杀处理，最大程度地保证实验室生物安全。
3.2 检测过程和经验
图2 核酸检测流程表
（1）每组队员需提前达到实验室，进行实验前的准备工作，根据当日的工作量领取试剂和耗材，并与上一组进行标本及仪器的交接（由于是24 h工作制，人员轮岗，仪器不停）。一方面可以提高Ⅱ区的工作效率，为标本的检测争取更多的时间；
另一方面可提高仪器的工作效率，保证耗时较长的扩增仪持续 工作。
（2）所有人员按三级防护要求穿戴好防护装备，根据分工迅速到达指定岗位。负责Ⅲ区的2～3名人员迅速与上一组人员进行交接班，并做好相应的登记，及时判读上一组交班的结果。1～2名人员携带扩增试剂迅速进入Ⅰ区，完成本班次的试剂配制。1～2名人员到标本接收处值守，随时准备接收标本。其余人员携带本班次所需的提取试剂及耗材进入Ⅱ区工作。Ⅰ区人员完成本班次所需试剂的配制后，进入Ⅲ区参与扩增仪的操作和结果的判读。形成Ⅱ区与Ⅲ区人数比为4∶1的工作模式。
（3）Ⅱ区的加样及提取操作过程严格按提取试剂及仪器说明书进行。每次加样后用75%乙醇对生物安全柜操作区进行擦拭，每次提取结束后用75%乙醇对提取仪内部进行擦拭，并用紫外灯照射10 min。Ⅲ区每板次结果判读结束后，要通过实验室内的对讲机或智能手机及时将异常结果信息反馈至Ⅱ区，Ⅱ区操作人员接到异常结果信息后第一时间对该标本进行复检，并按医疗废物处理要求及时清理阴性样本。对当班未能及时复查的异常结果标本，要注明异常原因，做好交接班记录，交由下一班次人员进行复检。Ⅱ区操作工作结束后，用75%乙醇擦拭生物安全柜、实验台面和提取仪的内外表面，地面喷洒75%乙醇1 min后，用拖布拖干，开启移动紫外消毒灯。
（4）Ⅲ区操作人员要严格遵循扩增仪标准操作规程，并注意根据扩增试剂的不同，在PCR仪上选择相应的扩增程序，根据Ⅱ区传递过来的流程表对相应的标本结果进行判读。扩增结束后，关闭PCR仪电源，用75%乙醇擦拭PCR仪内外，上报阴性结果或通过对讲机将需要复查的标本信息通知Ⅱ区操作人员。
（5）检测操作过程中经常出现标本溢洒的情况，在出现标本溢洒时，首先要在溢洒区域铺上纸巾（完全覆盖溢洒区），然后用75%乙醇喷洒在纸巾上，作用30 min以上，再将纸巾小心移除。清理过程中，应避免手部接触污染物，清理污染物的纸巾按感染性废物处理，最后用紫外消毒灯对溢洒区进行照射消毒。
（6）洛阳医疗队标本制备队员能在10 min内完成1板90个标本的加样工作，充足的熟练加样人员是保证按时完成任务的关键，熟练的提取仪操作员也是保证检测质量的重要岗位。
3.3 复检原则及上报经验
（1）结果出来后，Ⅲ区人员首先观察反应曲线，对出现的异常曲线，尤其是对于Ct值较低但曲线平斜或非特异性翘尾等情况（图3、图4），要及时进行复检。若出现O基因和N基因双靶位点阳性，应第一时间上报，同时立即用2种扩增试剂进行复检；
若出现O基因或N基因其中1个靶位点阳性，立即用另一种试剂进行复检。检测队在大筛实际操作时发现，Ⅲ区人员必须及时、准确地判读和上报，才能保质保量地完成检测任务，因此保证Ⅲ区人员的数量及熟练程度是工作顺利开展的关键。
图3 反应曲线平斜
注：此种曲线多为反应液配制后保存不当或阳性质控污染，如出现较多需考虑为实验室污染。
（2）大筛检测时往往是多台仪器同时出结果，需要成批量复查和上报结果，Ⅲ区就需要将结果进行汇总后再传递到Ⅱ区。我们通过数次修改完善，发现用表格方式不仅能够快速将结果信息汇总，更能够使Ⅱ区在极短时间内对标本结果进行准确判断，进行下一步工作（图5）。
图5 扩增检测区成批量汇总结果登记表
（1）人员分工。洛阳医疗队共30人，每名队员均持有河南省PCR资格证，并能够熟练掌握核酸提取、扩增和生物安全防护技能，具体人员岗位分工及职责见表1。
（2）注意队员的健康状况。每天至少1次核酸检测，2次体温测量。加强队员心理疏导，通过党组织民主生活会及小组交流等多种方式，舒缓压力，保持积极乐观的心态，避免出现焦虑等情绪，并时刻保持自我防护意识。
（3）严格管理。援沪期间严禁私自外出，要保持方舱实验室、驻地酒店两点一线的状态，尽量避免与本地人员接触，减少感染 风险。
表1 气膜方舱实验室核酸检测队各职能岗位及职责
在援沪期间，为应对大批量核酸检测的需要，提高效率，缩短报告时间，完成疫情防控指挥部分派的检测任务，洛阳医疗队每次检测完成后均认真梳理和优化检测流程以及交接班程序，强化了每位队员操作的规范化、标准化，保证了高质高效地完成核酸检测任务。
总结洛阳医疗队本次援沪的经验，主要有以下几点：（1）各项责任划分明确，各司其职。各医院抽调的都是业务骨干，在各自医院都能独当一面，组成临时团队后要有明确的责任担当，大家齐心协力才能保证各项工作的顺利开展。（2）操作流程规范，注重细节。完整、准确的流程记录表是保证检测结果可溯源的关键，尤其是在大规模筛查中，如何准确、快速地找到异常标本至关重要。（3）专业技术过硬，尤其是Ⅲ区结果判读人员，一定要在短时间内迅速判断出结果，日常工作中，因阳性标本较少，往往只是看Ct值，但在大规模筛查中需要根据诸多因素，综合分析判断，以保证结果的准确无误。（4）上海当地政府部门的沟通协调与配合，在生活、交通、物资保障等方面的大力支持也是援沪工作顺利开展的重要保证。在所有成员的共同努力下，检测队才能圆满完成援沪核酸检测的艰巨任务。
总之，快速、准确的新型冠状病毒核酸检测已成为新型冠状病毒肺炎疫情防控的关键环节，这对实验室检测人员提出了更高的要求。只有做好生物安全防护、严格按照标准操作规程实施，做好全流程质量控制，提高核酸检出率，才能更好地完成疫情防控或将来发生的突发公共卫生事件大规模筛查工作。
执笔王善龙（河南科技大学第二附属医院医学检验科）
河南省洛阳市核酸检测医疗队名单（排名不分先后）
王善龙（河南科技大学第二附属医院），孟景昱（洛阳市东方人民医院），刘俊晓（洛阳市中心医院），郑光禄（洛阳市中医院），粘志光（洛阳市中心医院），李佳根（嵩县人民医院），袁林超（河南科技大学第二附属医院），王熠鹏（洛阳市偃师人民医院），王艳秋（河南科技大学第一附属医院），王德权（嵩县人民医院），刘晓飞（洛阳市妇幼保健院），陶英杰（河南科技大学第一附属医院），马小阳（洛阳市第三人民医院），付晓峰（洛阳市第一人民医院），赵伊萌（洛阳市妇幼保健院），陈嘉楠（洛阳市东方医院），王俊皓（宜阳县人民医院），聂瑞国（宜阳县人民医院），刘丽（新安县人民医院），薛静（新安县人民医院），李琨（洛阳市第五人民医院），韦宝君（洛阳市第五人民医院），王磊（洛阳市第一人民医院），王博（洛阳市偃师人民医院），孙小召（汝阳县人民医院），任梦浩（汝阳县人民医院），李磊（洛阳市第三人民医院），张艺博（伊川县人民医院），高鸿翔（伊川县人民医院），张许静（洛阳市中医院）
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