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陆春美,崔秀明
(1.红河卫生职业学院，云南 红河 661100；
2.云南省三七资源可持续利用重点实验室，云南 昆明 650550；
3.云南省三七研究院，云南 昆明 650550)
血瘀作为诸多临床疾病的表征之一，通常表现出有肿块、疼痛、瘀青斑等现象。在中医里关于其诱因有“因寒生凝、因凝而生瘀”“阳气虚衰所致脉道拘急”“行不畅致血瘀”“性情暴怒而致气血运行不畅”，终成气滞寒凝血瘀体质等说法。现代科学实验研究进一步证实了血瘀与血液循环障碍有不可分割的关联性。研究已证实三七总皂苷具有显著的活血化瘀作用，能预防血栓动脉硬化[1]。屏边三七具有一定的药用价值，其功效和三七接近[2]。在云南的屏边县、文山马关和麻栗坡及靠近越南北方一带，流传民间有用屏边三七治疗跌打损伤及强筋健骨的习惯[3],但尚未载入中国药典，至今未能大量开发应用。基于此，本研究对屏边三七皂苷进行活血化瘀及镇痛效应初步评价，为屏边三七在治疗外伤包扎、跌打损伤等方面的药用价值评价提供一定的科学依据，也为日后开发外伤用药提供一定的理论基础。
1.1 实验动物
屏障环境(SPF级)雌性SD大鼠，体质量170～200 g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(浙)2018-0033。
屏障环境(SPF级)昆明小鼠，雌雄各半，体质量17～22 g，由湖南省长沙市天勤生物技术公司提供,动物许可证号为SCXK(湘)2014-0011。
1.2 实验药品
盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，规格：1 mL/mg)；
乌拉坦(百奥莱博生物有限公司，规格：51-79-6,试剂级)；
凝血四项检测试剂盒(赛科希德科技有限公司，规格：2 mL×6支)；
云南白药粉(云南白药集团股份有限公司，规格:4 g/瓶)；
0.6%冰醋酸(天津市风船化学试剂有限公司，规格：500 mL/瓶)。
1.3 主要设备仪器
电子天平，型号：CP114,上海奥豪斯仪器有限公司;万能高速粉碎机，型号：FLB-200，上海菲力博食品机械公司;超声清洗仪，型号：BL10-2506 上海比朗仪器有限公司;旋蒸器，型号：RE-5205，上海亚荣生化仪器厂;紫外分光光度计，型号：UV-2000，日本津岛公司;电热干燥箱，型号：DGG-9123AD，上海森信实验仪器公司;离心设备，型号：TD25-WS，湖南湘仪器实验室开发有限公司;血液流变学测定仪，型号：LG-R-80B；
血小板聚集率测定仪，型号：LG-PABER-1，均由北京世帝科学仪器有限责任公司提供。
2.1 屏边三七总皂苷的制备
屏边三七根部药材购于红河州苗乡屏边县玉屏镇大份子村委会个体户彭兴国三七资源训化种植大棚，清水洗净后参照有关文献方法进行提取制备。称取粉末1 kg，用70%乙醇(10 L)进行超声提取3次，每次提取时间约40 min,合并提取液并浓缩形成浸膏[4-5]。用5倍量的水溶解后大孔树脂上样，按(水∶30%乙醇∶70%乙醇)依次洗脱，收集洗脱液旋干后的黄白色粉末即得含量约为31.69%的屏边三七总皂苷[5-7]。
2.2 实验分组及给药
2.2.1 屏边三七总皂苷活血化瘀实验
取雌性大鼠60只，适应性喂养2 d，每组10只，随机分为正常组，模型组，云南白药组，屏边三七皂苷低、中、高剂量组，共6组[7]。在同等喂养的情况下，云南白药组按0.4 g/kg灌胃云南白药，实验药物3组按屏边三七总皂苷低、中、高剂量(分别为0.20、0.40、0.80 g/kg)灌胃给药，正常组和模型组灌胃生理盐水，连续灌胃10 d，末次给药2 h后，除正常组外，其余组参照有关参考文献方法用盐酸肾上腺素和冰浴进行造模[5-10]。上述造模实验完成后，大鼠禁食12～16 h，用20%乌拉坦(剂量为5 mL/kg)麻醉后从腹主动脉取血5 mL，用含肝素钠的采血管封存备用[10]。参照文献方法检测各组大鼠血液的全血黏度、血浆黏度、红细胞积压值及凝血四项、血小板聚集率指标[10-11]。
2.2.2 屏边三七总皂苷镇痛效果评价实验
取昆明小鼠60只，雌雄各半，按上述方法分为6组，于末次给药2 h后，除正常组外，其余组参照有关文献进行腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，记录给药后15 min内各小鼠的扭体次数，并计算扭体抑制率[12]，扭体抑制率=(对照组扭体次数-实验组扭体次数)/对照组扭体次数×100%。
2.3 数据分析方法
3.1 屏边三七总皂苷对模型大鼠血液流变学影响
与正常组大鼠相比，模型组大鼠全血黏度值、血浆黏度值均显著升高(P<0.05)，提示造模成功。与模型组比较，实验药物组中大鼠的全血黏度、血浆黏度和全血相对黏度均显著降低(P<0.05)，见表1。
表1 屏边三七总皂苷对血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响
3.2 屏边三七总皂苷对模型大鼠的凝血四项指标的影响
各组大鼠的凝血酶、凝血酶原时间，部分凝血酶、纤维蛋白含量变化差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。
表2 屏边三七总皂苷对血瘀模型大鼠凝血四项指标的影响
3.3 屏边三七总皂苷对血瘀模型大鼠血小板聚集率的影响
各组大鼠的血小板聚集率和抑制率差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。
表3 屏边三七总皂苷对大鼠血瘀模型的血小板聚集率的影响
3.4 屏边三七总皂苷对醋酸所致小鼠扭体实验次数及扭体抑制率影响
各组扭体模型小鼠的扭体次数及扭体抑制率存在显著差异(P<0.05)，见表4。
表4 各组小鼠扭体实验次数及扭体抑制率结果
已有研究表明，血瘀是血液循环异常的一种状态，与血液的流变异常、凝血异常等现象有关[11]。而血液流变异常的主要原因为HCT升高、红细胞聚集率上升、血浆黏度增大等。炎症介质会引发循环血容量减少而造成血液的浓缩，造成局部红肿疼痛，从而引发FIB等血浆蛋白浓度的相对升高而诱发血浆黏度的增加[11，13]。在出血的状态下，机体凝血活性因子被激活，凝血指标如PT、TT、APTT 等就会发生缩短[13]，促使凝血功能紊乱，从而加剧其他血浆凝血指标升高，最终导致血瘀证[14-15]。
屏边三七目前尚未载入中国药典，仅作为药用植物来使用，在对屏边野生资源使用调查的过程中发现，其主要作为治疗跌打损伤和强筋健骨的内服药及治疗外伤包扎、跌打损伤等外用药的形式使用。本实验研究结果显示，屏边三七总皂苷药物实验组(低、中、高3个不同剂量)对血瘀大鼠的血液流变学指标和凝血指标均有改善作用,对醋酸所致扭体模型小鼠具有一定的抑制作用，表明屏边三七总皂苷成分具有活血化瘀和镇痛的活性。
本实验的研究为考察屏边三七的活血化瘀和镇痛作用提供了一定的参考。为开展屏边三七在治疗外伤包扎、跌打损伤、滋补气血等方面的功效研究提供了一定的实验基础依据。但还有不足之处，日后将继续深入开展活血补血的分子药理实验研究，为下一步的开发应用提供更全面的实验数据。
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