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赵海忠，李良华，宋忠旭，孙 华，彭先文，梅书棋
（湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北 武汉 430064）
猪链球菌是由多种致病性猪链球菌引起的一种人畜共患病，可引起猪的关节炎、脑膜炎、败血症、心内膜炎、淋巴结脓肿等[1]，主要表现为高热便秘、跛行、皮肤发红、败血症为特征。猪链球菌病传染源为病猪和带菌猪，病菌经鼻液、唾液、伤口感染等途径传播，常呈地方性流行，临床上其发病率逐年升高，成为威胁猪场的主要致病性病原菌，给我国养猪业带来了严重的经济损失[2]。猪链球菌还可感染人，是一种重要的人畜共患病原菌[3]，做好猪链球菌病综合防控，在畜牧业和公共卫生方面具有重大意义。笔者分享一起某小型猪场保育猪感染猪链球菌诊断和防控案例，为养猪同行对猪链球菌感染的防控提供借鉴参考。
2021年12月下旬，武汉某小型猪场外购引进保育猪陆续开始发病，现场临床诊断时已死亡5头，病猪主要表现精神沉郁，食欲下降或废绝，体温41.0～42.5 ℃，稽留热，四肢划水，转圈，眼结膜发红，皮肤充血、潮红，便秘，有的粪表面上附有黏膜，尿黄，四肢内侧、腹下皮肤发紫，关节肿胀（图1），且局部出现波动感，驱赶时因疼痛发生尖叫，触诊出现明显的疼痛反应，跛行，共济失调，少部分病猪后躯软弱无力，倒下卧地不起，出现角弓反张等神经症状，后期犬坐姿势，呼吸困难，最后衰竭死亡，其中1头急性死亡的猪天然孔流出暗红色血液。
图1 关节肿胀
挑选4头具有典型临床症状的病、死猪进行解剖，血液呈酱油色，凝固不良；
断牙处呈黑灰色；
全身淋巴结出血、水肿，切面外翻；
胸腔和心包积液，呈淡黄色；
关节周围水肿、滑膜肿胀充血、关节液混浊、化脓性干酪样物质。其中1头病例可见肺表面散布有出血点，肺脏边缘有黄色纤维素性渗出物，肺间质增宽；
脾稍微肿胀，呈暗红色，脆而软，边缘有少量出血梗死区；
肾脏肿大，肝、胃、肠未见明显病理变化。分别无菌采集胸腔积液、关节液、淋巴结、脾、肺脏等病料4份冷藏保存后立即送实验室进行检测。
3.1 细菌分离培养
4份样品分别接种于鲜血琼脂平板，37 ℃培养24 h，观察菌落形态，菌落呈灰白色、圆形或椭圆形、针尖大小见图2，出现β型溶血。挑取典型菌落进行革兰氏染色、镜检，镜检结果见图3，呈革兰氏阳性，单个、成对、短链或长链的球菌。
图2 猪链球菌培养结果
图3 分离菌株染色镜检结果
3.2 PCR检测
分别挑选单个菌落接种于含10%胎牛血清的TSB液体培养基，37 ℃、160 r/min震荡培养18 h，增殖培养后按照要求制备细菌DNA模板，采用25 µL的反应体系对链球菌（SS）基因进行PCR扩增，当样品中含有链球菌时会扩增出294 bp的阳性片段[4]。PCR检测扩增产物电泳结果见图4。结果1号、2号、4号样品中扩增出294 bp的片段，检出SS阳性比例为75%。
图4 PCR扩增产物电泳结果
3.3 动物致病性试验
取增菌培养后的猪链球菌菌液，3 000 r/min离心去上清液，对菌体用PBS液重悬，将菌液浓度稀释至1×109CFU/mL。选择20只SPF级昆明小鼠，随机分为2组，每组10只，试验组腹腔注射稀释后菌液0.2 mL/只，对照组注射生理盐水，相同条件下饲养观察7 d，每天记录存活情况。攻菌12 h后试验组部分小鼠出现精神沉郁、采食下降，至试验结束共有7只小鼠死亡，对照组小鼠无死亡。试验结果表明，该场分离菌株具有较强的致病性。
3.4 药敏试验
将增菌培养后菌液用生理盐水稀释为1×105CFU/mL，取0.2 mL用玻璃棒将其均匀涂布于5%新生牛血清TSA平板上，然后用无菌镊子取20种常见药物的药敏纸片，贴于已接种被检菌株的平板上，每个平板药敏纸片不超过6个，纸片之间距离1～2 cm，37 ℃培养18 h，取出分别测定抑菌环直径。参考药敏纸片说明书判定药敏结果，分析菌株对各种药物敏感性。链球菌药敏试验结果见表1，结果表明，分离的菌株对阿莫西林、头孢吡肟、头孢曲松、氨苄西林、头孢噻肟、头孢噻呋高度敏感，对环丙沙星、恩诺沙星、阿奇霉素、庆大霉素、林可霉素、链霉素、四环素、红霉素、磺胺嘧啶、氟苯尼考、多黏菌素耐药。
表1 链球菌药敏试验结果
根据该场发病情况、流行病学调查、临床剖检、实验室细菌分离培养和PCR检测结果，确诊该场保育猪感染猪链球菌。
5.1 生物安全防范
首先加强猪群健康巡视，及时隔离疑似病猪，集中隔离栏有效治疗，控制人员和物品流动，对病死猪及其排泄物和污染的饲料进行无害化处理，减少环境中病原菌，防止交叉污染。其次加强消毒管理，使用0.5%过氧乙酸对食槽、栏舍、工具、周围环境消毒，同时栋舍主走道铺撒生石灰。
5.2 药物预防保健
对无临床症状猪群及时进行药物保健紧急预防，每吨饲粮分别添加10%阿莫西林600 g+10%盐酸多西环素700 g+30%替米考星500 g，连用5～7 d；
采用每100 kg水中添加复方黄芪多糖100 g+电解多维60 g+维生素C 60 g，自由饮用，连用5 d。
5.3 对症治疗
早发现，早治疗，及时选择本场猪链球菌敏感药物并保证用药量。首选头孢类药物，头孢噻呋5 mg/kg+安乃近2～4 mL+地塞米松1～2 mL，肌注1 d 1次，连用3 d；
如果病猪关节出现严重脓肿，可用无菌手术刀切开脓肿部位，将脓液全部排除，使用0.1%高锰酸钾溶液冲洗干净，涂碘酊，对创面敷撒1瓶（1 g）氨苄西林粉剂，采用绷带包扎，隔离饲养。严重病例需及时输液（头孢噻呋5 mg/kg+复合维生素B 1 mL+维生素C 1 mL+地塞米松1 mL+5%葡萄糖氯化钠注射液40～60 mL），且肌注安乃近2～4 mL。对采食基本正常保育猪也可选择中草药蒲公英30 g+紫花地丁30 g+七叶一枝花15 g，全部煎汁拌料喂服，每天1次，连用3 d。
5.4 精细化饲养管理
首先加强饲养管理，搞好环境卫生，改善饲养环境，舍内添加暖风机，注意通风，改善空气质量，温湿度控制在猪只适宜范围内，保持猪舍清洁、干燥，营造舒适猪舍小环境。其次提供优质饲料和洁净饮水，减少应激，提高机体的免疫力与抗病力。最后做好猪群管理，实行全进全出，科学调节猪群饲养密度，如果猪只出现外伤时要及时进行处理，做好消毒工作，防止猪链球菌感染。
病因初步分析。首先外购引进保育猪未检测隔离，因气温骤降，在应激状态下猪群免疫力下降；
其次仔猪并栏时相互咬架导致皮肤、黏膜损伤，而且饲养员清扫栏舍时用力过大，造成部分仔猪皮肤划痕，通过伤口传播成为链球菌感染的主要方式；
最后猪舍环境卫生差，通风不良，有害气体超标，未进行有效消毒，为链球菌的繁殖提供了有利条件。猪链球菌为条件致病菌，与猪的免疫状态、环境因素、致病菌株的毒力有直接的关系，良好的饲养管理和适当的药物保健可有效降低猪链球菌病发病风险[3]。当环境温度与通风出现矛盾时，优先考虑温度，猪的体温在一定程度内具有自我保健的本能，体温升高，猪的免疫力增强。
本次药敏试验结果表明，链球菌分离菌株对头孢类药物高度敏感，在临床防治猪链球菌病过程中，在其发病早期首选头孢类药物，选择交替用药方式，科学、合理、规范用药。因猪链球菌灭活疫苗免疫效果不达预期，临床上防治猪链球菌仍然依靠抗菌药物。由于大量抗菌药物使用和滥用，猪链球菌的耐药特性呈上升趋势，同一地区不同猪场流行的猪链球菌耐药情况差异较大，应引起养猪场的高度关注。肖延光等报道2021年湖北分离菌株对氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素高度敏感[5]，但本场分离菌株对氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素均产生了耐药，建议养猪场根据本场药敏试验结果首选高敏感药物，避免临床盲目用药，遏制病原细菌耐药性的产生[6]。在禁抗、减抗的大背景下，开展猪链球菌耐药性检测及中草药替代防治研究将对指导临床科学选药及控制其耐药性的传播具有重要的指导意义。
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