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摘 要：目的：建立复方金刚痛风颗粒中菝葜的TLC鉴别方法和含量测定方法。方法：以薯蓣皂苷元为对照品，采用氯仿-乙酸乙酯(10∶1)为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，对复方金刚痛风颗粒中的菝葜进行了TLC鉴别；采用大连依利特C18色谱柱(HypersilODS，5μm，4.6×250mm)，乙腈-水(90∶10)为流动相，流速为1mL.min-1，203nm为检测波长，柱温为35℃，测定了复方金刚痛风颗粒中薯蓣皂苷元的含量。结果：薯蓣皂苷元斑点清晰，阴性对照无干扰。薯蓣皂苷元线性范围为0.212μg～1.908μg (r=0.9999)，平均回收率为100.50%，RSD为1.49%。方法灵敏度高、结果准确、重现性好。结论：所建立的方法简便可行、重现性好，为复方金刚痛风颗粒质量控制提供了有效途径。
关键词：复方金刚痛风颗粒；菝葜；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)05-043-03
复方金刚痛风颗粒是由菝葜、两面针、山银花等中药制成，具有清热解毒、活血化瘀、养筋通络、散寒止痛之功效。用于高尿酸血症、急性关节炎反复发作、痛风石形成、关节畸形、肾实质性病变和肾尿酸结石等症。为控制其质量，本篇对薯蓣皂苷元定性定量方法进行了研究，对制剂中的菝葜进行了薄层色谱鉴别。采用HPLC法测定制剂中薯蓣皂苷元的含量，可作为该制剂的质量控制方法。
1 材料、仪器与试剂
1.1 材料
菝葜药材、绵萆�药材均为市售品经我院蔡毅教授鉴定为百合科植物菝葜Smilax chinaL.的干燥根茎和薯蓣科植物绵萆�Diosorea septemLoba Thunb.的干燥根茎；薯蓣皂苷元对照品由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为1539-200001；复方金刚痛风颗粒(广西中医学院药学院药剂教研室自制)。
1.2 仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)；AgilentVWD紫外检测器；Agilent色谱化学工作站；AgilentALS自动进样器；C18柱(大连依利特分析仪器有限公司，HypersilODS，5μm，4.6×250mm)；BP211D电子分析天平(德国赛多利斯)；Millipore simplicity-185超纯水器(美国密理博公司)；SB3200-T(上海必能信超声有限公司)；LG16-W高速离心机(北京医用离心机厂)；939薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 菝葜、绵粉�的定性鉴别
取本品颗粒5g，加乙醇50mL，超声处理30min，滤过，滤液加盐酸5mL，加热回流2h，放冷，回收乙醇至无醇味，用石油醚(60～90℃)振摇提取4次(35，35，25，25mL)，合并提取液，蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜对照药材和绵萆�对照药材各1g、缺菝葜阴性样品、缺绵萆�阴性样品、缺菝葜与缺绵萆�阴性样品(双阴性)各2g，同法制成对照药材溶液、缺菝葜阴性溶液、缺绵萆�阴性溶液及缺菝葜与缺绵萆�双阴性溶液。另取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005年版药典附录VIB)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、缺菝葜阴性溶液、缺绵萆�阴性溶液及缺菝葜与缺绵萆�的双阴性溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；而在缺菝葜与缺绵萆�的双阴性对照品色谱处无此斑点，结果见图1。
1~2供试品；3绵萆�对照药材；4菝葜对照药材；5缺菝葜药材阴性对照品；6缺绵萆�药材阴性对照品；7缺菝葜与缺绵萆�双阴性对照品；8薯蓣皂苷元对照品.
图1 菝葜、绵萆�薄层鉴别色谱图
3 含量测定[1]
3.1 色谱条件
色谱柱：C18柱(大连依利特分析仪器有限公司，5μm，4.6×250mm)；流动相：乙腈-水(90∶10)；流速：1.0mL/min；检测波长：203nm；柱温：35℃；进样量：10μl理论塔板数按薯蓣皂苷元峰计算应不少于8000。
3.2 对照品溶液制备
精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加乙腈制成0.108mg/mL的薯蓣皂苷元对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
取本品颗粒适量，研细，取约5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇80mL，加热回流提取2h，滤过，加盐酸10mL，加热回流水解2h，回收溶剂至约50mL，用石油醚振摇提取4次(35，35，25，25mL)，合并提取液，水浴蒸干，残渣加乙腈溶解并移入2mL量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，作为供试品溶液。同法制成缺菝葜与缺绵萆�双阴性溶液。
3.4 方法学考察
3.4.1 标准曲线制备
精密称取薯蓣皂苷元对照品10.60mg，加乙腈使溶解，定容至100mL量瓶中，再精密量取此溶液2、6、10、14、18(mL)，分别置25mL量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以薯蓣皂苷元峰面积(A)为纵坐标，薯蓣皂苷元进样量 (μg)为横坐标做回归计算得回归方程Y=6.1152C-2.8888，r=0.9999，结果表明薯蓣皂苷元对照品进样量在0.212～1.908μg之间与峰面积值呈现良好的线性关系，标准曲线见图2。
图2 薯蓣皂苷元工作曲线图
3.4.2 精密度试验
精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液(0.108mg/mL)10μl，连续进样6次，分别测其峰面积值，其平均峰面积值为651.54，RSD为1.37%，表明仪器精密度良好，结果见表1。
3.4.3 稳定性试验
取同一供试品溶液，每隔4h分别进样10μl，测定薯蓣皂苷元峰面积值，计算RSD=0.31%(n=6)，表明供试品溶液在24h内保持稳定，结果见表2。
3.4.4 重复性试验
精密称取同一批号供试品各6份，按样品测定项下方法进行测定，结果见表3。
3.4.5 加样回收率试验
取已测薯蓣皂苷元含量的供试品干燥粗粉约2.5g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，按上述色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表4。
3.5 样品测定
分别取不同批号的复方金刚痛风颗粒供试品干燥粉末约5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，注入高效液相色谱仪，测定峰面积值，以外标一点法计算薯蓣皂苷元的含量，结果见表5。
图3 薯蓣皂苷元对照品HPLC色谱图
a为薯蓣皂苷元
图4 复方金刚痛风颗粒供试品HPLC色谱图
a为薯蓣皂苷元
图5 缺菝葜与缺绵萆�双阴性供试品HPLC色谱图
4 小结与讨论
(1)在菝葜、绵萆�的薄层鉴别及薯蓣皂苷元的HPLC含量测定中，因为菝葜、绵萆�中均含有薯蓣皂苷元，所以采用缺菝葜与绵萆�的双阴性供试品作对照。
(2)在薯蓣皂苷元的HPLC含量测定中，在制备供试品溶液时，分别用氯仿、石油醚以及醋酸乙酯进行萃取，结果表明以石油醚(35，35，25，25mL)直接萃取4次的效果最优。本品薯蓣皂苷元的含量测定在供试品溶液制备时需进行水解，然后用石油醚分次萃取，这是测定样品中薯蓣皂苷元含量最佳的方法，但处理过程中的步骤较多，会使方法的重复性变差。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中国药典(2005年版 一部).北京：化学工业出版社，2005：216，116～117，21~22.
(责任编辑：陈涌涛)
Study on Identification and Quality for Smilax ChinaL of Compound Gout Granules
CHEN Yong，WANG Qin，LI Bing，LILI，PANLi-na，HUANG Ying
Abstract：Objective：To establish TLC identification method and HPLC assay method for Smilax ChinaL of compound gout granules.Methods：Smilax chinaL were identified by TLC respectively，using diosgenin as reference substances，and (10∶1) as mobile phases.Diosgenin were determined by HPLC using the HpersilODS reversed-phase column of C18(4.6×250mm，5μm)，the mobile phase was a combination of acetonitrile and water (90∶10) at the flow rate of1.0mL・min-1，and the eluate was monitored withUV absorption at 203nm，retention at 35 degrees.Result：The TLC chromatograms of diosgenin were of clearness，good separation，and no interference.The diosgenin contents in Compound gout granules by HPLC，in the linear range of 0.212μg to1.908μg (r=0.9999) and the recoveries of100.50%(RSD=1.49%).Conclusion：The established methods are simple，feasible and reproducible.This study provide a method for the quality control of compound gout granules
Key words：Compound gout granules；Smilax ChinaL；TLC；HPLC
