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[摘要]目的 探讨RegⅠα蛋白表达与原发性胃癌发展过程的病理特性和相关性。方法 收集本院胃癌标本138例，设胃癌组和癌旁正常黏膜组，采用免疫组化观察RegⅠα蛋白在原发胃癌的表达，并对2年原发性胃癌患者生存率进行分析。结果 与对照组比，胃癌RegⅠα 阳性率为64.1 %；早期胃癌和进展期胃癌Reg I α 表达无差异，但Borrmann IV RegⅠα 阳性表达强于其他分期；阳性主要集中在胃窦；印戒细胞癌阳性表达较高；淋巴细胞转移与血行转移 Reg I α 阳性表达较高；临床分期、分化程度与RegⅠα表达有关，与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小无关。胃癌患者RegⅠα 蛋白表达阴性的2年生存率为84.9 %。结论RegⅠα可作为评价胃癌预后的参考指标。
[关键词] 原发性胃癌；RegⅠα蛋白；免疫组化
[中图分类号]R735.2 [文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2011）20-01-03
Expression of RegⅠα Protein and Pathologic Feature in Developing of Primary Gastric Cancer
DAI Weili1 HUANG Yan2HONG Huanping3
1.Department of Pathology， Zhejiang Province Tumour Hospital，Hangzhou310022，China；2.Department of Pathology，Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310009， China ；3.Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310058， China
[Abstract] Objective To investigate the expression of RegⅠα protein in gastric carcinoma， and explore its correlations to clinic pathologic features and prognosis of gastric cancer. Methods Immunohistochemistry was used to reveal the expression of RegⅠα protein in 138 speciments of primary gastric carcinomas and corresponding normal tissues collected from gastric cancer patients enrolled in our hospital. The correlations of RegⅠα protein to clinic pathologic features and prognosis of gastric carcinoma and 2-year survival rate in the patients were analyzed. Results 64.1% patients showed a positive Reg I α protein. Early gastric cancer and advanced cancer Reg I α expression was not different， but Reg I α expression in Borrmann IV is higher than other stages. RegⅠα expression was mainly in the antrum. RegⅠα protein expression in signet ring cell carcinoma was significantly stronger than in other types of tumor. The patients with RegⅠα protein-positive had a significantly higher rate in lymphatic metastasis and venous invasion. RegⅠα expression was irrelevant with age， sex， tumor location， tumor size. The 2-year survival rate in the patients with RegⅠα protein- positive was 84.9%. ConclusionRegⅠα protein may function as a factor in the development of gastric cancer.
[Key words] Primary gastriccarcinoma； RegⅠα Protein； Immunohistochemistry
胃癌的好发年龄在40岁以上，男性多见。原发性胃癌早期临床多无明显的上消化道症状，随着病情的发展，可逐渐出现无特征性的酷似胃炎或胃溃疡的症状。RegⅠα蛋白属于钙依赖性植物血凝素家族（C型植物血凝素家族），研究发现它在哺乳动物生理学和人类疾病中有多重角色，其在胃癌发生发展中的病理生理作用尚不清楚。国内外学者认为，RegⅠα与胃癌的关系密切[1-4]。本课题研究RegⅠα在原发性胃癌发生发展过程中的表达，考察RegⅠα与胃癌的相关性和其病理特点，并对临床诊断提供建议。
1材料与方法
1.1组织标本
收集本院2008年1月～2009年4月手术切除胃癌标本138例，按WHO肿瘤病理学与遗传学分类（胃癌）进行组织学分型[2]。设立胃癌组和癌旁正常黏膜片组（远离肿瘤浸润部位5cm以上的胃黏膜片组织）。所有患者在手术前均未接受过化疗和放疗。组织标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，每个蜡块取4μm厚连续切片做免疫组化染色，所有病例均经术后组织病理学确诊，可参考图1。
1.2试剂
鼠抗人RegⅠα抗体（IgG）、生物素标记的羊抗鼠IgG抗体和抗生素蛋白（ABC）均由瑞士Dako公司生产。
1.3免疫组化方法
经脱蜡处理的原发性胃癌组织切片在含5g/L鼠抗人RegⅠα 抗体（IgG）的PBS中孵育，4℃过夜；采用生物素标记的羊抗鼠IgG抗体于室温内孵育20min，后在已混合的ABC孵育20min，采用对二氨基联苯和过氧化氢显色1min；阴性对照处理同样本。
1.4免疫组化结果判断
所有结果均由两位病例医生独立地按盲法观察，高倍镜（×400）随机取4个不同的视野，记录细胞总数及阳性细胞数，按阳性细胞所占比例计分：阳性细胞率≤5%为0分，阳性细胞率 ＞5%且≤25%为1分，阳性细胞率＞25%且≤50%为2分，阳性细胞率＞50%为3分；同时根据染色的强弱程度计分：无染色0分，弱染色1分，中等强度染色2分，强染色3分。最终根据二者的乘积判断结果，≤1分为阴性，＞1分为阳性。
1.5统计学处理
采用SPSS13.0统计软件，用配对t检验分析RegⅠα蛋白在肿瘤组织和正常对照组的表达，卡方检验分析RegⅠα蛋白表达与各种病理参数的关系；随访资料的生存分析采用Log-rank检验，P＜0.05可认为有统计学差异。
2结果
见表1 、
2.1胃癌组织与癌旁正常胃黏膜组织Reg I α蛋白的表达
免疫组化结果表明，138 例胃癌组织标本中，RegⅠα阳性率为64.1%（89/138），对照组138例癌旁正常组织中RegⅠα阳性率为 20.3%（28/138），统计学分析结果显示，与癌旁正常组织相比，RegⅠα在胃癌组织中的表达显著 （P＜0.01） 。
2.2RegⅠα蛋白表达与原发性胃癌发展过程的病理特性
表1显示，早期胃癌和进展期胃癌的RegⅠα 阳性表达无显著差异，但进展期分期的Borrmann Ⅳ 期RegⅠα 阳性表达强于其他分期；阳性主要集中在胃窦的癌细胞胞浆中，在幽门和胃体表达较弱；组织分型中，阳性表达最高为印戒细胞癌；淋巴细胞转移与血行转移可表达RegⅠα 阳性；临床分期、分化程度与RegⅠα阳性表达有关 （P＜0.01）；RegⅠα表达与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小均无关。
2.3RegⅠα蛋白表达和原发性胃癌生存率的关系
对138例胃癌患者随访2年的生存率结果显示，胃癌患者RegⅠα 蛋白表达阳性患者和RegⅠα蛋白表达阴性患者的2年生存率分别为34.8 %和84.9 %，差异有统计学意义（P＜ 0.01）。
3 讨论
RegⅠα是一组分泌蛋白，其功能相当于急性反应蛋白、抗凋亡因子或胰腺β细胞和神经细胞分泌的生长因子。研究发现它在哺乳动物生理学和人类疾病中有多重角色。Dieckgraefe BK等[3]发现，RegⅠα在胃中表达强度要比肠消化道中高，它参与了消化道黏膜片的增生、分化、抗凋亡、炎症反应。在最近几年，有实验依据支持这些蛋白在肿瘤变化和进展中扮演的角色。RegⅠα可能诱导炎症中上皮细胞的细胞凋亡[4]。因此本课题的研究旨在考察RegⅠα蛋白的表达在原发性胃癌的发生、发展中扮演的角色和可能的作用及对胃癌患者的生存率的影响。
目前的研究显示，RegⅠα不但在早期的胃癌中表达，而且还在癌灶邻近的上皮细胞中有表达，与Sekikawa 等A[1]的试验结果相似。Yutaka Yonemura[5]用RT-PCR法分析RegⅠαmRNA在112例初期胃癌中87例阳性的免疫组化法分析195例初期胃癌中60例阳性（30.8%）。我们的研究结果为64.13%的RegⅠα蛋白表达，与上述文献相当。
RegⅠα蛋白表达与淋巴结和静脉转移相关，与Fukui H 和Yonemura Y 研究结果相同[6，7]。肿瘤静脉转移的发生率RegⅠα蛋白阳性表达比RegⅠα蛋白阴性表达的患者要有意义。本课题发现RegⅠα表达与肿瘤浸润和肿瘤分期有关，与 Yonemura Y[7]的研究结果相似。胃癌患者RegⅠα 蛋白表达阳性患者和RegⅠα 蛋白表达阴性患者的2年生存率存在显著性差异，与刘晓光等[8]的研究结果相似。
我们的课题结果提示，RegⅠα在癌细胞中的表达与肿瘤活动是平行的， RegⅠα在肿瘤细胞增长和转移中扮演着重要角色，可作为评价胃癌预后的参考指标。
[参考文献]
[1] Sekikawa A，Fukui H，Fujii S，et al. Reg I protein may function as a trophic and/or antiapoptotic factor in the development of gastric cancer.Gastroenterology[J]. 2005，128 （3）：642-653.
[2] Fenoglio-Preiser C，Munoz N，Carneiro F.et al. Gastric carcinoma[R]. In：World Health Organization Classification of tumours.Pathology and genetics of tumours of the digestive system，Lyon： IARC Press，2000：39-52.
[3] Dieckgraefe BK，Crimmins DL，Landt V，et al. Expression of the regenerating gene family in inflammatory bowel disease mucosa：Reg Ⅰα lpha upregulation，processing，and antiapoptotic activity[J]. J Investig Med，2002，50：421-434.
[4] Malka D，Vasseur S，Bodeker H，et al. Tumor necrosis factor alpha triggers antiapoptotic mechanisms in rat pancreatic cells through pancreatitis associated protein I activation[J]. Gastroenterology，2000，119：816-828.
[5] Yamaqishi H，Fukui H，Sekikava A，et al. Expression profile of REG family proteins REG Ⅰ alpha and REG IV in advanced gastric cancer：comparison with mucin phenotype and prognostic markers[J]. Mod Pathol，2009，22 （7）：906-913.
[6]Fukui H，Fujii S，Takeda J，et al. Expression of reg I alpha protein in human gastric cancers[J]. Digestion，2004，69 （3）：177-184.
[7]Yonemura Y，Sakurai S，Yamamoto H，et al. REG gene expression is associated with the infiltrating growth of gastric carcinoma[J]. Cancer，2003，98：1394�1400.
[8]刘晓光，杨月琴，李继承.原发性胃癌REG Ⅰα蛋白表达与临床病理特性的相关性研究[J].分子细胞生物学报，2008，3 （1）：573-576.
（收稿日期：2011-05-06）
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