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[摘要] 目的 观察茵陈五苓散对脂肪性肝纤维化小鼠的保护作用。方法 通过复合因素造成小鼠慢性脂肪性肝纤维化病理模型，观察茵陈五苓散对肝纤维化小鼠肝脾指数、血清ALT、AST水平及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量的影响。结果 茵陈五苓散各剂量组均能降低脂肪性肝纤维化小鼠肝脾指数、血清ALT、AST水平及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量，与模型组比较，高、中剂量组差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。结论 茵陈五苓散对复合因素致小鼠慢性脂肪性肝纤维化具有一定的保护作用。
[关键词] 茵陈五苓散；脂肪性肝纤维化；小鼠
[中图分类号] R965.1[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2011）20-13-02
Study on Protective Effects of Yinchenwuling Powder on Fatty Hepatic Fibrosis in Mice
YANG Jianqiao1YAN Qinghe2
1.Department of Internal Medicine，Meilin Community Hospital of Ninghai County of Ningbo City in Zhejiang Province，Ninghai 315609，China；
2.Department of Digests，First People’s Hospital of Ningbo City in Zhejiang Province，Ningbo 315010，China
[Abstract] Objective To evaluate the protective effects of Yinchenwuling powder on fatty hepatic fibrosis in mice. Methods Fatty hepatic fibrosis model was made by multiplex factors in mice. The liver weight index，the spleen weight index，the levels of ALT，AST，HA，PCⅢ，LN and Ⅳ-C in serum of mice were measured. Results All dose groups of Yinchenwulingsan could decreased the liver weight index，the spleen weight index，the levels of ALT，AST， HA，PCⅢ，LN and Ⅳ-C in serum. Compared with model control group，high and moderate dose groups significantly decreased（P＜0.01 or P＜0.05）.Conclusion Yinchenwuling powder has protective effect on fatty hepatic fibrosis in mice induced by multiplex factors.
[Key words] Yinchenwuling powder；Fatty hepatic fibrosis；Mice
肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是指肝脏内纤维组织异常增生的病理过程，是一种临床常见的慢性进行性疾病，可进一步发展成肝硬化[1]。2009年1月～2010年12月，我们采用高脂饲料、酒精、四氯化碳（CCl4）等复合因素造成小鼠脂肪性肝纤维化病理模型，观察茵陈五苓散对小鼠脂肪性肝纤维化的保护作用，为临床治疗脂肪性肝纤维化提供基础性资料依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1药物与试剂茵陈五苓散方中泽泻、茵陈、白术、茯苓、桂枝等中药材购自浙江中医药大学附属医院中药房，按原方比例配伍，水煎液浓缩成按生药计浓度为1g/mL，白酒（北京红星股份有限公司）；胆固醇（上海新兴化工试剂研究所）；猪油、花生油（市售），联苯双酯滴丸（北京协和药厂）；CCl4（国药集团化学试剂有限公司）；丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原 （PCⅢ）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原 （Ⅳ-C）等试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
1.1.2动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重（20±2）g，由浙江大学医学动物试验中心提供，动物合格证号：SCXK（浙）2007-0005。
1.2方法
1.2.1动物分组取小鼠60只，适应性喂养3d后随机分为6组，即正常对照组、模型组、阳性药对照组、茵陈五苓散高、中、低剂量组，每组10只。
1.2.2动物模型建立与干预[2]除正常对照组外，其他各组动物于试验第一天皮下注射40% CCl4花生油溶液0.1mL/10g体重，每周注射2次，造模期间，以20%猪油、79.5%普通饲料、0.5%胆固醇混合而成的高脂饲料饲养小鼠3周后，继以普通饲料饲养2周，另以10%白酒代替水饮用。造模期间，阳性药对照组按0.15g/kg给药量ig联苯双酯，茵陈五苓散高、中、低剂量组分别按77.4、51.6、25.8g/kg给药量灌胃茵陈五苓散水煎液（人体剂量的30、20、10倍），每日1次，正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水。
1.2.3指标检测及方法于第五周末试验结束时分别将各组小鼠摘眼球取血，分离血清，按试剂盒方法测定ALT、AST活性及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量；处死小鼠后，摘取肝、脾，称体质量，计算肝、脾脏器指数。
1.3统计学处理
采用SPSS13.0统计软件处理数据，统计学方法采用方差分析，组间两两比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1茵陈五苓散对脂肪性肝纤维化小鼠肝、脾指数及血清转氨酶的影响
由表1可知，模型组小鼠肝、脾指数明显高于正常对照组（P＜0.01），说明酒精、CCl4、高脂饲料等复合因素对小鼠肝功能有损伤作用。阳性药对照组、茵陈五苓散水煎液各剂量组均能抑制肝纤维化小鼠肝、脾肿大，高、中剂量的茵陈五苓散水煎液与阳性对照药效果相当。高剂量组与模型组比较差异显著，具有统计学意义（P＜0.01）；中、低剂量组效果稍弱于高剂量组，与模型组比较差异亦显著，亦具有统计学意义（P＜0.05）。模型组小鼠血清中AST、ALT水平明显高于正常对照组（P＜0.01），说明酒精、CCl4、高脂饲料等复合因素对小鼠肝功能有损伤作用。此外，茵陈五苓散水煎液各剂量组均能降低小鼠血清ALT、AST水平，呈剂量依赖性，高剂量的茵陈五苓散水煎液与阳性对照药效果相当。阳性对照组、茵陈五苓散水煎液高剂量组小鼠血清ALT、AST值与模型组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）；中剂量组效果稍弱于高剂量组，与模型组比较差异亦显著，具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2茵陈五苓散对脂肪性肝纤维化小鼠肝纤维化指标的影响
由表2可知，模型组小鼠血清中HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量均明显高于正常对照组（P＜0.01），说明酒精、CCl4、高脂饲料等复合因素致小鼠脂肪性肝纤维化病理模型造模成功。茵陈五苓散水煎液各剂量组均能降低小鼠血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平，呈剂量依赖性，高剂量的茵陈五苓散水煎液与阳性对照药效果相当。阳性对照组、茵陈五苓散水煎液高、中剂量组小鼠血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C与模型组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）；低剂量组效果弱于高、中剂量组，与模型组比较差异亦显著，亦具有统计学意义（P＜0.05）。
3讨论
中医认为，肝纤维化属于“胁痛”、“黄疸”、“积聚”等病范畴，治疗此病宜采用清热利湿、健脾益气的治则[3]。茵陈五苓散源自《金匮要略》，是以《伤寒论》中经典方剂五苓散加茵陈而成方。五苓散由泽泻（15 g）、茯苓（9 g）、猪苓（9 g）、白术（9 g）、桂枝（6g）等药味组成，方中重用泽泻为君药，取其甘淡寒凉之性，直达肾与膀胱，利水渗湿；茯苓、猪苓二药为臣药，增强君药泽泻利水渗湿之力；白术与桂枝二药，前者可燥湿健脾、运化水湿，后者可温经通脉、助阳化气，共为佐药。在五苓散组方基础上加入倍量茵陈（4 g），即可发挥健脾和胃化浊、清热解毒利湿之功效[4]，具有利湿清热退黄作用，适用于黄疸诸证。现代药理研究表明，茵陈五苓散具有显著的保肝作用，对小鼠免疫性肝损伤、大鼠酒精性肝损伤及大鼠胆汁淤积性肝损伤均具有较强的保护作用[5，6]；茵陈、茯苓、白术均可通过下调血清ALT、AST活性对受损肝细胞起到保护作用，茵陈亦可保护肝细胞并可通过促进胆汁分泌、增加胆汁排泄量，对胆汁淤积性肝损伤起到保护作用[7，8]，茯苓尚可对肝损伤动物免疫功能起到调节作用，泽泻、猪苓可通过扩张肾血管、增加肾血流量而产生利尿作用，对肝损伤动物疾病恢复起到辅助作用[9]。因此，用茵陈五苓散治疗脂肪性肝纤维化，既符合中医辨证施治理论，又符合现代药理理论。
CCl4进入动物机体后，在肝内经氧化而形成自由基，后者可启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞膜，导致肝细胞变性坏死[10]。而CCl4结合酒精、高脂饲料等复合因素的方法制造动物肝纤维化模型，可加速脂肪性肝纤维化的形成，造模成功率高[2]。
本研究结果表明，高脂饲料、酒精、结合CCl4等复合因素的造模方法可行，实验中小鼠肝纤维化病理模型造模成功；茵陈五苓散水煎液25.8、51.6、77.4g/kg剂量组均能不同程度地降低复合因素致脂肪性肝纤维化小鼠肝、脾指数及血清ALT、AST等肝功能指标水平，并可显著降低小鼠血清中HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C等肝纤维化指标含量，表明茵陈五苓散在保护复合因素致小鼠肝纤维化方面有较好的效果，但其作用机制与临床应用尚有待于进一步探讨。
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（收稿日期：2011-04-15）
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