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【摘要】肝炎标志物的检验在国内的临床实验室中最常用的是酶联免疫吸附试验(ELISA)。ELISA灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低。 【关键词】血清标志物;肝炎病毒;酶联免疫吸附试验
肝炎标志物的检验在国内的临床实验室中最常用的是酶联免疫吸附试验(ELISA)。ELISA灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低。该方法的结果报告以各试剂所设定的判断值(Cutoff值)为依据。由于ELISA影响检测结果的因素较多,因此其重复性较差。以乙肝表面抗原(HBSAg)为例,就一个低含量HBSAg标本结果而言,有一部分处于Cutoff值附近的标本就会产生假阳性或假阴性的结果,这些结果可能会影响一些人的就业、升学和献血等,还会引发医患之间的纠纷。对这些临界结果的处理和报告,一直是困扰检验人员的一个问题。我从长期的检验工作和质量控制分析,提出几点建议,仅供临床检验工作者参考。
1产生临界结果的影响因素
临界结果的产生除方法学本身在Cutoff定值时存在的“灰区”和标本被检物含量较低外,其他干扰因素主要有内源性的类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、嗜异性抗体,某些自身抗体等;外源性的有标本溶血、标本被细菌污染、标本凝固不全、标本剧烈震荡、检测过程中的操作误差等。
2临界范围的界定
临界范围是包含“灰区”在内,且因方法的不精密度而产生的更大的不确定的范围。以最常用的酶免法检测肝炎标志物为例,国产试剂盒的结果判断均以Cutoff值为依据,但没有临界范围的界定,测定结果也不要求复检,进口的HBSAg试剂盒则有阳性结果均需复检要求。但对低于Cutoff值的阴性结果则没有复检的要求。其原因有:①检验方法的灵敏度高于Cutoff值的灵敏度,假阴性存在的可能性极小;②低于Cutoff值灵敏度的标本无临床诊断意义;③检测的精密度较高,就一个低含量HBSAg标本结果而言,实验批间的CV均�10%
进口的HBSAg检测试剂盒说明书中均说明阳性结果需作双份复检,结果的报告均为复检双孔阴性报阴性,复检双孔阳性报阳性,复检双孔一阴一阳加做确认实验。
各实验室可根据具体情况来确定本实验室的临界范围,可用低浓度的定值室内质控品的检测结果来设定临界阳性的复检范围。如采用2ng/ml的HBSAg室内质控品,以此测定值为界,低于此测定值的阳性标本复检。要设定一个最佳的临界范围应在本实验室的特定条件下对一定数量的弱阳性和接近于Cutoff值的阴性标本进行复检,以复检和初检结果不相符合较多的一个范围定为临界复检范围。一个好的临界范围的设定既可避免不必要的复检,减少试剂和人力的浪费,又可保证临界范围内标本结果的正确性。
3对临界结果的确认方法
临床检验对临界结果的确认可参照抗人类免疫缺陷病毒(HIV)《全国艾滋病检测技术规范》中明文规定:凡初筛成阳性反应的标本,首先应用2种不同原理或不同厂家的试剂复测,复测成阳性反应的标本均需送确认实验室确认后才能发阳性报告。其他项目在临床检测中对临界结果的进一步确认还没有一个统一的标准。按进口试剂的规定,所有的阳性标本都要进行双孔复检,复检结果不一致的再做确认实验,其目的是要排除内源性的干扰因素。
日常检验中对临界结果的复检,只是用相同的方法、相同的试剂,严格按操作规程重复检测一次,以排除由于检测操作过程中一些人为的影响因素,但不能排除内源性的影响因素。
4对临界结果的处理和报告
4.1献血员的筛检应偏重于临界阴性血样的复检,复检结果仍为临界阴性的,应告知采血机构尽可能不用此类血源。
4.2体检人员应偏重于临界阳性标本的复检,复检结果仍为临界阳性的,可报告“可疑”,并建议受检者作进一步的复查,改用灵敏度较高的免疫测定方法或定量的基因扩增方法,不要轻易地发阳性报告。
4.3患者复检结果仍为临界阴、阳性的,应综合分析其他标志物的检测结果,如非初诊患者还可以查阅以往的检测结果,了解临床用药等情况做出阴性、弱阳性、可疑报告;也可以与临床医生沟通,报告测定结果S/CO的比值,供临床医生参考
