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[摘要] 目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑组织水通道蛋白-4(AQP-4)的表达变化及依达拉奉(edaravone)对其治疗效果的影响。方法:将7日龄Wistar大鼠120只随机分为3组:假手术组、缺氧缺血模型组(HIBD组)及依达拉奉治疗组,每组各40只。每组根据处死的时间不同又分5个亚组:6、24 h、3、5、7 d组,每亚组各8只,各组分别于不同时间点处死动物,测脑组织含水量,并采用免疫组化方法检测AQP-4的表达。结果:AQP-4在缺氧缺血6 h即增强,3 d达高峰,5～7 d逐渐降低(P 将各时间点脑组织分别置于电子天平称湿重(精确到0.1 mg),然后置于100℃恒温烘箱24 h称干重。按Elliot公式,含水量=(湿重-干重)/湿重×100%。
1.5 HE染色
常规石蜡切片-二甲苯脱蜡-梯度酒精脱水-苏木素,伊红染色-二甲苯透明-中性树胶封片-显微镜下观察。
1.6 免疫组化
切片常规脱蜡至水,3%H2O2室温孵育15 min;枸橼酸缓冲液中抗原修复2 min;滴加封闭用正常山羊血清工作液,室温中孵育20 min;滴加一抗AQP-4(1:200),湿盒置于4℃冰箱中过夜,PBS液洗2 min/次×3次;滴加生物素化二抗,室温下孵育15 min,PBS液洗2 min/次×3次;滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP),室温下孵育15 min,PBS液洗2 min/次×3次;用DAB显色剂显色(镜下观察显色程度),自来水终止;苏木素复染、脱水、透明、中性树胶封片。阴性对照切片用PBS液代替一抗,余步骤相同。
1.7 图像分析
采用BI-2000医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)进行图像采集与分析,在相同光亮强度和放大倍数(10×40)条件下统计阳性细胞平均灰度值,每只鼠3张片子,每张片子取4个视野,算出其均数进行比较与分析。
1.8 统计学分析
数据以x±s表示,用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验,P
