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[摘要] 目的 探讨婴幼儿人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）的感染状态与其感染标志物的关系及其临床意义。方法 收集我院住院婴幼儿（0～3岁）病例，以化学发光法（chemiluminesence immunoassay，CLIA）定量检测其HCMV-IgM以及HCMV-IgG，以实时荧光定量PCR法（Fluorescence Quantitative PCR，FQ-PCR）检测HCMV-IgM阳性者尿液标本中病毒核酸载量，分析婴幼儿HCMV的感染状态及其临床意义。结果 在900例患者中，HCMV-IgM阳性病例为161例（17.9%），即HCMV现症感染率达到17.9%；HCMV-IgG阳性者738例（82%），即82%的婴幼儿通过胎盘获得HCMV-IgG抗体，其中148例为HCMV-IgM及HCMV-IgG同时阳性（16.4%），即16.4%的婴幼儿在从母体获得了HCMV-IgG抗体的基础上感染了HCMV；HCMV-IgM及HCMV-IgG均阴性者为73例，即未获得HCMV感染及免疫力的患者占8.1%。在161例现症感染患者中，有59例检测到HCMV的DNA（36.7%），即约有一半的现症感染患儿出现了病毒活动性感染。结论 虽然绝大部分婴幼儿从母体获得了HCMV-IgG抗体，但由于该抗体缺乏中和病毒的作用以及0～3岁婴幼儿免疫系统的不完善，有超过四分之一（17.9%+8.1%）已经感染HCMV或者将受到HCMV感染的威胁，且活动性HCMV感染主要发生在婴儿组（28d～1岁）。该病毒感染是导致婴幼儿肝功能损害的重要病原体之一，因此加强HCMV的防治具有十分重要的意义，尤其是目前出现了对更昔洛韦等抗病毒药物耐受的病毒突变，开发疫苗将是行之有效的手段。
[关键词] 人巨细胞病毒；化学发光法；实时荧光定量PCR
[中图分类号] R185 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）27-95-03
The Analysis and Clinical Value of the HCMV Infection Status in the Infant of Wenzhou City
QIAO ZengpeiZHENG XiaoqunXIE Qipeng
The Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，the Yuying Children’s Hospital of Zhejiang Province，Wenzhou 325027，China
[Abstract] Objective To analyze the clinical value of the relationship between the markers of human cytomegalovirus（HCMV）infection and its infection status in the infants. Methods To collect in-patient blood samples of infants between 0-3 years old，of which the HCMV-IgM and HCMV-IgG were quantitatively detected by chemiluminesence immunoassay（CLIA），and urine would be collected from the IgM positive children to be analyzed for HCMV DNA load by Fluorescence Quantitative PCR，to analyze the current status of HCMV infection in this population. Results Among the 900 samples，161 were positive for HCMV-IgM，meaning a current infection rate of 17.9%，while 738 were positive for HCMV-IgG，meaning 82% children inherited HCMV-IgG by placental circulation，among which，148 were double positive for the two HCMV-IgG & HCMV-IgM meaning a current infection occurred with a presence of HCMV-IgG（16.4%）. The rest was double negative for HCMV-IgM and HCMV-IgG，meaning 8.1% were not infected or passively immuned. Among the 161 current infected，76 were positive in HCMV-DNA test，meaning an active infection rate of about 47.2%. Conclusion Tough most infant can inherit HCMV-IgG from mother，over one fourth of the children between 0-3 years old have been infected by HCMV or at risk of infection because of the insufficiency of neutralization of HCMV-IgG and infant’s immature immune system. Furthermore，the active infection more likely occurs in the infant between 28 days to 1 year old. HCMV is one of the most important pathogens that cause infant liver damage，so the prevention and treatment of HCMV infection showed an absolute importance，especially when the virus occurred mutation to withstand ganciclovir，making the vaccination looks more workable to prevent HCMV infection.
[Key words] Human cytomegalovirus；Chemiluminescence；Fuorescence quantitative PCR
人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）属于β疱疹病毒亚科，有严格的种属特异性，人是其唯一宿主。HCMV感染在人群中极为常见，其血清IgG抗体阳性率因社会经济状态、生活条件和卫生习惯而异。在发达国家高社会经济地位的人群，HCMV抗体阳性率达到40%～80%，而在发展中国家或者低收入人群抗体阳性率甚至达到90%～100%。在免疫力正常的人群，HCMV感染一般不会引起严重的临床表现，而在免疫力低下人群可以引起较为严重的预后。婴幼儿是一个免疫系统不很完善的群体，容易受到HCMV的感染，并表现出一些临床症状。本研究通过化学发光法（CLIA）定量分析900例我院门诊儿童血液样本中HCMV的IgM、IgG抗体以及IgM阳性患者的尿液标本进行HCMV的DNA检测，以了解该群体的HCMV感染状态，为HCMV感染的预防和治疗提供依据。
1资料与方法
1.1一般资料
收集本院2009年5月～2011年5月住院的0～3岁患者900例，根据年龄分为新生儿组（0～28d）、婴儿组（28d～1岁）和幼儿组（1～3岁）。
1.2方法
采集静脉血并分离血清，于-20℃保存，一周内以化学发光法（CLIA）定量检测血清中HCMV-IgM和HCMV-IgG抗体。方法参照雅培化学发光试剂盒，同时设置空白及阴性对照。对HCMV-IgM抗体阳性者采集尿液标本，以FQ-PCR法检测其HCMV病毒核酸载量。具体方法如下：取晨尿1mL于无菌离心管中，2000rpm离心5min，弃上清，沉淀中加入50μL的DNA提取液，混匀，100℃煮沸10min，取出12000rpm离心5min，取上清5μL HCMV DNA扩增体系，扩增条件为93℃2min预变性，93℃ 5s，57℃ 45s，40个循环，37℃ 1s。在Light Cycler自动荧光PCR仪上进行反应，每次实验按照试剂盒提供的定量阳性标准品做标准曲线，同时设置阴性、空白对照。反应结束后，用电脑自动分析计算定量结果。
1.3统计学分析
采用SPSS18.0统计软件进行统计学分析，率的比较采用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
全部900例研究对象中，HCMV-IgM和HCMV-IgG均阳性者为148例，占16.4%，HCMV-IgM阳性而HCMV-IgG阴性者为13例，占1.4%；HCMV-IgM阴性而HCMV-IgG阳性者为590例，占65.6%；HCMV-IgM及HCMV-IgG均阴性者为73例，占8.1%。161例HCMV-IgM阳性病例中，59例检测出HCMV-DNA，占36.7%，其中101例出现了肺炎、支气管炎等症状的呼吸系统疾病，占62.7%；有32例出现了肝胆损伤，占19.9%；其余出现了如胃肠道功能紊乱症状、粒细胞减少和血小板减少等血液系统疾病等症状，占17.4%。详见表1～3。
表1各年龄组HCMV感染阳性率比较[n（%）]
年龄组nHCMV-IgM & IgGHCMV-IgG HCMV-IgMHCMV-DNA
新生儿组 223 28（12.5） 189（84.7） 1（0.4） 17（7.6）
婴儿组 511 102（19.9） 305（55.4） 7（1.3） 57（11.2）
1～3岁组 166 18（10.8） 96（57.8） 5（3.0） 2（1.2）
总计 900 148（16.4） 590（65.6） 13（1.4） 76（8.4）
注：HCMV-IgM＞5为阳性，HCMV-IgG＞15为阳性，HCMV-DNA＞5.0E+02为阳性
表2HCMV IgM、DNA阳性患者的临床表现
临床表现 例数
肺炎及毛细支气管炎 92
上呼吸道感染9
婴儿肝炎 23
婴儿高胆红素血症 11
胃肠道功能紊乱9
血液系统疾病 17
表3 HCMV IgM、 DNA关联性分析
项目DNA（+） DNA（-） 合计
IgM（+） 59102161
IgM（-） 17 646 663
经过两两四格表χ2检验，新生儿组与婴儿组的HCMV-IgM阳性率以及HCMV-DNA的阳性率之间有显著性差异（P均＜0.05），且婴儿组的HCMV-IgM阳性率和HCMV-DNA阳性率高于新生儿组；婴儿组与1～3岁幼儿组的HCMV-IgM及HCMV-DNA阳性率之间有显著性差异（P均＜0.05），且婴儿组的HCMV-IgM阳性率及HCMV-DNA阳性率高于1～3岁组；新生儿组与1-3岁幼儿组的HCMV-IgM阳性率之间的差异无统计学意义（P＞0.05），而HCMV-DNA阳性率之间有显著性差异（P＜0.01），且新生儿组的HCMV-DNA阳性率高于1～3岁幼儿组。
3讨论
人巨细胞病毒（HCMV）属于广泛感染人类的β疱疹病毒，为双链DNA病毒，具有严格的种属特异性。如同其他疱疹病毒属的病毒一样，在免疫力正常人群，一般在初次感染后即建立终生存在的潜伏感染，在我国成人的感染率可高达80%～100%[1]。Ping Zhao等[2]研究发现，该病毒感染在女性比男性高，在不同职业中以农民和医生最高。在免疫力正常人群，常常在初次感染后就形成潜伏感染，没有临床症状，当宿主的免疫力降低，如HIV感染、长期使用免疫抑制剂的器官移植患者以及妊娠期妇女，曾经潜伏的病毒可以激活成为活动性感染并导致临床症状[3，4]。在妊娠期妇女，HCMV可以由潜伏感染转变为活动感染，常可造成胎儿先天性感染，表现为流产、死胎以及先天畸形等[4，5]，是造成出生缺陷的重要病原体。婴幼儿以免疫机能不很完善为特点[6]，极易受到HCMV的感染，并表现为以黄疸为主要表现的肝炎综合征、肺炎等症状[7]。
本文综合分析了温州地区婴幼儿的HCMV-IgM、HCMV-IgG以HCMV-DNA的拷贝数与婴幼儿HCMV感染状态的关系及不同年龄组之间的HCMV感染状态的差异以及HCMV-IgM与HCMV-DNA之间的关联性。分析表明婴儿组（28d～1岁）的HCMV-IgM阳性率最高，而在1～3岁幼儿组和28d～1岁新生儿组，HCMV-IgM阳性率没有显著性差异； HCMV-DNA的阳性率在婴儿组最高，其次是新生儿组，1～3岁幼儿组最低。分析表明，在各年龄组中，婴儿组HCMV活动性感染发生率最高，其次是新生儿组以及1～3岁幼儿组，这可能是由于新生儿通过胎盘或者母乳从母体获得高滴度的HCMV-IgG，使得新生儿阶段发生的HCMV感染大多转变为潜伏感染，极少发生活动性感染。随着婴儿与外界环境接触频繁以及HCMV-IgG消耗殆尽，再加上在28d～1岁婴儿阶段自主免疫机能不完善，导致潜伏的HCMV再激活并开始复制而形成活动性感染，部分甚至造成严重的呼吸系统感染和肝胆功能损害。而随着自主免疫功能的逐渐完善，幼儿体内的效应细胞如细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的作用，活动感染的HCMV再次转变为潜伏感染，所以在1～3岁幼儿组其HCMV-IgM及HCMV-DNA的阳性率都是三组中最低的。
综合上述研究，可以发现人群的HCMV感染主要发生在围产期或新生儿期，而且约有25%的婴幼儿发生了HCMV现症感染，其中约有一半出现了病毒复制，发生了HCMV活动性感染，引起以呼吸系统感染和肝胆系统感染为主的临床表现。由于新生儿通过胎盘获得HCMV-IgG的保护性作用，在绝大多数新生儿都是潜伏感染而没有明显的临床症状。综合上述的分析，可以发现该地区婴幼儿HCMV感染现状不容乐观，加强预防和治疗HCMV感染十分重要。
目前，治疗和预防HCMV感染最有效的抗病毒药物是更昔洛韦（GCV）、万缬洛韦（VGCV）等，然而国内外已经有报道HCMV对这些抗病毒药物产生耐受[8]，有近95%对GCV耐药的HCMV病毒株在UL97编码基因发生了突变[9]。
鉴于HCMV感染在婴幼儿的高发生率和严重的临床表现以及越来越多地发生HCMV对抗病毒药物产生耐药，为了预防HCMV感染，加快研制能有效预防HCMV感染的疫苗变得越发重要。
[参考文献]
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（收稿日期：2011-06-27）
