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【摘要】 目的 比较不同炮制方法中β-谷甾醇(β-sitosterol)含量变化。方法 薄层扫描法。结果 β-谷甾醇含量：药典法(2000年版) 0．019 9%<河南法(河南省中药炮制规范) 0．026 1%[１]。有报道白附子具有抗炎[2] 、镇静、抗惊厥[3]、祛斑美容[4]等作用。药效学证明白附子各种炮制品也具有相似的抗炎作用[2]及镇静、抗惊厥、镇痛[3]作用。研究表明白附子中含有胆碱、油酸、β-谷甾醇[5]、天师酸、尿嘧啶、β-谷甾醇-3-O-葡萄糖苷等多种成分[6]。其中β-谷甾醇具有降低血胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等作用，临床可治疗慢性气管炎[7] ，因此是白附子的活性成分之一，炮制对β-谷甾醇含量有一定影响。本文对药典法与河南法进行改进,设计新的方法。新方法具有省工、省时、省燃料的优点，口尝微有麻舌感，符合药典对白附子炮制的要求，并用薄层扫描法测定白附子药典法(2000年版) 、河南法(河南省中药炮制规范) 、新法1 (即冷浸法)、新法2（即热浸法）以及生品中β-谷甾醇含量，进一步比较不同炮制方法对白附子中β-谷甾醇含量的影响，方法和结果报告如下。
1 药材与仪器
1．1 仪器 CS-9301双波长薄层扫描仪（日本岛津）、定量点样毛细管（sigma）、索氏提取器、蒸发皿150 ml蒸馏烧瓶。
1．2 试剂 β-谷甾醇对照品（河南中医学院药物化学冯卫生教授鉴定提供，含量98． 1%）、硅胶G(青岛海洋化工厂) ；其它化学试剂均为分析纯。
1．3 药材 白附子药材购自河南禹州地区，经河南中医学院鉴定教研室陈随清教授鉴定为天南星科植物独角莲（Typhonium giganteum Engl）的干燥块茎。
1．4 白附子样品炮制:分别取净白附子200 g，按照药典法、 河南法、 新法1和新法2炮制加工，制备样品。
2 实验条件的选择
2．1 薄层板的制备 按1份硅胶G加入3份0．6%的CMC-Na溶液，研磨均匀，用手动涂铺器铺板，厚度为0．5 mm，晾干后105℃活化30 min，置干燥箱中保存备用。
2．2 展开剂与显色剂 展开剂：石油醚-乙酸乙酯(8∶3)； 显色剂：磷钼酸-乙醇（5%）。
2．3 最大吸收波长（λmax）选择 将显色后的薄层板放入薄层扫描仪样品台上，采用反射法单波长锯齿扫描，狭缝1．25 mm×1．25 mm，灵敏度×1，纸速20 mm/min，扫描速度20 mm/min, 测得β- 谷甾醇最大吸收波长为670 nm，而在390 nm有最低吸收，因此确定λS＝670 nm, λR=390 nm为波长和参比波长，扫描幅度X=9 mm，Y=20 mm SX=2。
3 方法与结果
3．1 不同炮制品中β-谷甾醇定性比较[8] 精密吸取各供试品溶液1 μl，点于同一硅胶G薄层板，中间分别点1 μl、4 μl对照品溶液（1．035 mg/ml），按上述层析条件展开、显色、结果斑点显蓝色且分离良好,计算Rf值为0．575。结果证明不同炮制品种均含有β-谷甾醇。见图1。
3．2 标准曲线的绘制[5] 精密称取标准品2 mg置2 ml的容量瓶中，用氯仿-甲醇(2:1)稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（1．035 mg/ml）。分别精密吸取此对照品溶液1、2、3、4、5 μl点于同一硅胶G薄层板上，然后放入层析缸中，用石油醚-乙酸乙酯(8:3)展开系统展开，磷钼酸-乙醇（5%）显色。100℃烘烤5 min,得到蓝色斑点，迅速进行薄层扫描，测定其积分峰面积值见表1,2。以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得标准曲线，积分峰面积与浓度呈良好的线性关系，回归方程为Y=5 486．5X+1 885．5 r=0．999。
3．3 精密度试验 精密吸取β-谷甾醇对照品溶液（1．035 mg/ml）1 μl重复点样5次，展开，显色，测定，β- 谷甾醇各斑点峰面积积分值RSD＝0．29%,精密度良好，结果见表3。
3．4 稳定性试验 精密吸取热浸法样品提取溶液1 μl，β-谷甾醇标准品溶液(1．035 mg/ml)1 μ、3 μl点于硅胶G薄层板上，展开后显色,扫描测定,每隔25 min测定一次，结果表明在实验时间内其稳定性良好，峰面积积分值见表4。
3．5 加样回收率试验 取药典法炮制之白附子粉末（40目）约1．7 g共7份，精密称定，分别装于定量滤纸筒,置于索氏提取器中，其中1份不加对照品作为随行对照，其余6份分别加入0．178 mg/ml β-谷甾醇对照品溶液2 ml,其余照供试品溶液制备项下同法操作,得各供试品溶液。分别精密吸取空白对照和各加样回收供试品溶液1 μl，β-谷甾醇对照品溶液(1．035 mg/ml)1 μl、2 μl，点于同一薄层板上,展开、显色、扫描测定,根据外标二点法计算,见表5。
3．6 供试品溶液的制备 分别取不同炮制品白附子粉末（40目）5g,精密称定，装于滤纸筒置于索氏提取器中，于150 ml蒸馏烧瓶中分别加入60 ml氯仿，30 ml甲醇,即氯仿-甲醇(2∶1)�,连接装置(80℃)水浴锅上连续回流提取6 h[9],将提取液过滤于蒸发皿中置于水浴锅上(100℃)挥干，残渣用氯仿-甲醇(2∶1)混合溶媒溶解,转容于2 ml容量瓶,并定容至2 ml，摇匀，得各供试品溶液。
3．7 含量测定 照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)，精密吸取各供试品溶液1 μl，点于同一硅胶G薄层板，中间分别点1 μl、4 μl对照品溶液，按上述层析条件展开，显色，于λS＝670 nm, λR=390 nm处扫描测定，用外标法计算白附子中β-谷甾醇的含量，将测得值按公式计算百分含量(%)β-谷甾醇%=(测得值×样品ml)/(样品重×点样量μl×10) 。结果见表6。
4 结论与讨论
4．1 白附子具有祛风痰、定惊搐、解毒散结止痛的功效,用于中风痰壅、口眼歪斜、偏正头痛、喉痹咽痛、破伤风;外治痰核、毒蛇咬伤等,有报道其还具有抗炎、抗癌、抗肿瘤、镇静、抗惊厥、祛斑美容等作用,且药效学证明各种炮制品有相似的镇静、抗惊厥、抗炎及镇痛作用。β-谷甾醇具有降低血胆固醇、止咳、抗炎、抗癌等作用，临床可用于治疗慢性支气管炎。因此可作为白附子有效成分之一。本实验再次采用薄层扫描法对白附子不同炮制品中β-谷甾醇进行含量比较，试验结果说明炮制方法不同，β-谷甾醇含量有一定区别。生品中β-谷甾醇的含量高于各种炮制品, 其原因可能是由于各种炮制方法均经过不同时间的浸泡，造成有效成分的流失,从而使β-谷甾醇含量降低。各炮制品中β-谷甾醇含量药典法炮制最低，河南法次之,而冷浸法和热浸法均较前二者含量高,且热浸法含量又较冷浸法含量高,并且是药典法炮制的2倍多,是河南法炮制的近2倍,可能是药典法与河南法长时间浸泡、每日换水及换水量多、煮透时加水量多等因素造成β-谷甾醇等脂类成分含量下降；而新炮制法β-谷甾醇的含量高,可能是由于没有换水。
4．2 虽然β-谷甾醇具有降血胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等作用，临床可治疗慢性气管炎，是白附子的活性成分之一，本实验用其含量比较不同炮制方法，结果说明炮制对其含量确有一定影响，并且与炮制方法和工艺是否合理有密切关系。但由于β-谷甾醇存在于许多药物之中，故专属性不强，单独以其含量的高低衡量白附子炮制工艺尚不够，应结合药效和毒理以及其他有效成分含量等方面对炮制工艺进一步综合比较，以寻找合理的炮制方法，保证药物的质量。
参考文献
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2 吴连英,毛淑杰,王孝涛,等.白附子不同炮制品抗炎作用比较研究.中国中药杂志, 1992，17(6):339.
3 吴连英,毛淑杰,王孝涛,等.白附子不同炮制品镇静、抗惊厥作用比较.中国中药杂志,1992，17(5):275.
4 李艳莉,钟理,梁丽红.祛斑中药白附子提取工艺研究.中国医药工业杂志,2002，33(11):538.
5 姚三桃, 傅桂兰,洪海燕.白附子炮制前后成分含量的变化.中国中药杂志,1989，11 (10):18.
6 陈雪松,陈迪华,斯建勇.中药白附子的化学成分研究(Ⅰ).中草药,2000，31(7):495.
7 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册.人民卫生出版社，1986，968.
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9 毛杏飞,巫朝伦,张丽君.薄层扫描法测定白花蛇草中β-谷甾醇含量方法的考察.东南国防医药, 2003，5(6):420.
