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摘要：目的：建立复方丹参片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rbl含量测定的HPLC法。方法：采用Venusil-XBP-C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以乙腈(A)和水(B)为流动相梯度洗脱，流动相梯度：0min(20％A)→12min(20％A)→60min(36％A)。流速：1.0ml.min-1，柱温：30℃，检测波长：203nm。结果：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rbl线性范围分别为0.99～4.95ug、3.14～15.7μg、2.27～11.35μg。该方法加样回收率：三七皂苷R199.8％、人参皂苷Rgl为99.5％、人参皂苷Rb1,为99.8％，RSD分别为0.87％、0.62％、0.90％。结论：本法操作简便、结果准确、灵敏度高，重复性好，能有效的控制复方丹参片的质量。
关键词：复方丹参片；HPLC;三七皂苷Rl；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；含量测定
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
文章编号：1007－2349(2007)07－0038－02
复方丹参片由丹参、三七、冰片组成，具有活血化瘀、理气止痛的功效。用于气滞血瘀所致的胸痹。《中国药典》规定测定丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量，未对三七进行质量控制。笔者认为，三七在复方丹参片中是主要成分，为了有效控制其产品质量，应对其进行质量控制。本文采用高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,的含量，结果表明，本法简便、迅速、结果准确，现报道如下。
1 仪器试剂与材料
1．1仪器高效液相色谱仪(日本岛津)，LC－10ATVP泵，SPD－10PVP紫外一可见检测器，CTO－10ASVP柱温箱，SCL－10AVP系统控制器，CLASS－VPLC工作站。
1．2试剂对照品：三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rb1,分别由中国药品生物制品检定所提供(批号分别为：110745-200312 110703-0200322 110704-200318)。
乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水。复方丹参片(批号20060204、20060401、20060202)规格每片含丹参酮ⅡA不得少于0.2mg，平均片重分别为0.3129g，0.3064g，0.3029g，由云南白药集团文山七花有限责任公司提供。
2 方法与结果
2．1色谱条件及系统适应性试验色谱柱：Venusil－XBP－C18(250X4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱；流速：1.0m1．min-1，柱温：30℃，检测波长：203nm。在此条件下，组分在60min内出完，在记录的色谱中，按保留时间先后的出峰顺序为：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1，供试品溶液保留时间与对照品溶液保留时间一致，理论塔板数按三七皂苷R1的峰计算应不低于4000，分离度大于2.0。空白溶液无干扰。见表1及图1。
2．2对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rb1,对照品适量，加甲醇溶解配制成三七皂苷Rl为0.198mg．ml-1、人参皂苷Rgl为0.628mg．ml-1、人参皂苷Rbl0.454mg.ml-1的混合溶液，作为对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备取复方丹参片20片，精密称定，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上加热回流2h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。作为样品溶液。同法制备缺三七的阴性对照。
2．4线性关系考察精密称取三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl对照品适量，加甲醇溶解配制成三七皂苷Rl0.198mg.ml-1、人参皂苷Rgl为0.628mg．ml-1、人参皂苷Rbl0.454mg.ml-1的混合溶液，分别精密吸取此混合溶液5μl、lOμl、15μl、20μl、25μl进行分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制工作曲线，计算回归方程，见表2。
由表2可见，三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl进样量分别在0.99～4.95μg、3.14～15.7μg、2.27～11.35μg范围内线性关系良好。
2．5精密度试验精密吸取上述对照品溶液l0μl，重复进样5次，测定峰面积，结果精密度良好。三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的RSD分别为0.68％、0.36％、0.42％。
2．6稳定性试验将同一供试品溶液，每隔2h进样测定1次，分别为0、2、4、6、8、10h内测定，RSD分别为1.0％、0.52％、0.78％，表明供试品溶液在l0h内基本稳定。
2．7重复性试验取同一批号的样品(20060204)5份，按供试品溶液制备的方法制备溶液，依法进行测定，结果样品中测得三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl平均含量分别为0.87(mg／片)、3.79(mg／片、2.76mg／片)，三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的RSD分别为0.65、0.49％、0.51％。
2．8加样回收率试验精密称取已知含量的复方丹参片(批号：20060204)样品5份，分别加入三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl对照品，分别测定计算平均回收率，分别为99.8％、99.5％、99.8％。RSD分别为0.78％、0.37％、0.97％。结果见表3。
2．9样品含量测定取复方丹参片20片，精密称定，研细，取约1.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备。精密吸取供试品溶液及对照品溶液各l0μl，按上述色谱条件进行测定，测定结果见表4。
3 讨论
因三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl在甲醇中溶解度较好，故选择甲醇为提取溶媒。笔者比较甲醇80℃加热回流2h提取后萃取、超声30min提取后萃取和甲醇浸渍提取后萃取。结果显示，甲醇80℃加热回流2h提取后萃取测得的含量较高，另对回流提取时间进行了考察，比较回流提取1h、2h、3h三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的提得量，结果2h和3h提得量较高，且相差不大，故选择甲醇80℃加热回流2h提取后萃取为复方丹参片的提取法。
用HPLC法测定复方丹参片中三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的含量，经方法研究结果表明此方法重现性，稳定性，回收率好，专属性较强，可作为复方丹参片中三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl,的测定方法，以便有效的控制该制剂的质量。
