【www.zhangdahai.com--酒店工作总结】
[摘要] 目的 对胶体金免疫层析（GICA）技术检测患者血清抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体进行性能验证和评价。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和GICA，同时对104例可疑类风湿性关节炎（RA）患者进行抗-CCP抗体检测，计算两种方法检测结果的阴性符合率、阳性符合率、总符合率以及Kappa值。用±20%临界值浓度标本各重复检测20次，记录阴性和阳性结果数，验证GICA法重复性。结果 两种方法检测结果比较，阴性符合率、阳性符合率、总符合率、Kappa值分别为92%、100%、96%、0.92。GICA法检测+20%临界值浓度标本结果阳性数为20次 ，阳性率100%；-20%临界值浓度标本结果阴性数为15次，阴性率为75%。结论 GICA法与ELISA法检测抗-CCP抗体结果一致性良好，而且GICA方法简单、快速，敏感性和特异性较高，是早期筛查类风湿性关节炎值得推广的方法。
[关键词] 抗环瓜氨酸肽抗体 ；胶体金免疫层析法 ；性能评价
[中图分类号] R593.22 [文献标识码] B [文章编号]1673-9701（2011） 32-84-02
Performance Evaluation of Colloidal Gold Test for the Detection of Anti-cyclic Citrullinated Peptide Antibody
MU Yinyu WU Qiaoping WU Ludan
Department of Clinical Laboratory，Ningbo Medical Treatment Center Lihuili Hospital in Zhejiang Province，Ningbo 315040，China
[Abstract] Objective To verify and evaluate the performance of the anti-cyclic citrullinated peptide antibody（CCP） by the rapid colloidal gold immunochromatographic strip．Methods All 104 serum samples were detected parallelly by ELISA and GICA，calculating the negative rate，the positive rate，the total rate and Kappa value．The samples of ±20% concentration of cutoff were detected 20 times repeatedly，recording the positive and negative number．Results The negative rate，the positive rate，the total rate and Kappa value of the two test were 92%，100%，96% and 0.92．The positive rate of +20% concentration of cutoff was 100% ，and the negative rate of -20% concentration of cutoff was 75%. Conclusion The consistency of the ELISA and GICA for the anti-cyclic citrullinated peptide antibody is good．GICA kit is simple and easy to operate，relatively high sensitivity and specificity．It is a useful assay in the clinical early screening inspecting of RA．
[Key words] Anti-cyclic citrullinated peptide antibody；Colloidal gold immunochromatography；Performance evaluation
类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的自身免疫性关节病，病因和病理机制还不是很明确。其特征性症状为对称、多个周围性关节的慢性炎症病变，临床表现为受累关节疼痛、肿胀、功能下降，病变呈持续、反复发作的过程，很多患者两年内出现不可逆骨破坏。RA可发生于任何年龄和性别，但多数在40～60 岁发病，严重威胁人类特别是老年人的健康；我国的发病率为0.32%～0. 36%[1]。目前对于RA 的诊断采用2009年第73届美国风湿病学年会（ACR/ARPH）公布的最新的RA诊断标准，新标准将抗-CCP抗体检测纳入其中。在临床应用中，抗-CCP抗体逐步发展成为早期诊断RA的首选检测指标。近10年世界各国检测抗-CCP抗体多采用ELISA法，由于该方法繁琐，操作复杂，并未在国内医疗机构普遍使用。随着实验技术的改进和发展，2010年5月上海富莼科芯公司首家研制出抗-CCP抗体胶体金免疫层析法试剂盒，使RA的早期筛查的普及成为可能。本文通过与ELISA方法对比，对该公司的该试剂盒检测抗-CCP抗体的性能进行了验证和评价，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
根据2009年第73届美国风湿病学年会（ACR/ARPH）公布的最新的RA诊断标准，收集2010年10~12月间宁波李惠利医院门诊和住院可疑RA患者104例，其中男23例，女81例，年龄22～82岁，平均年龄52岁；其中抗-CCP抗体阳性和阴性标本各52例。
1.2 试剂与仪器
ELISA法试剂盒由德国欧蒙公司生产，GICA试剂盒由上海富莼科芯生物技术股份有限公司生产。美国伯乐（BIO-RAD）680酶标仪。
1.3 方法
1.3.1 胶体金免疫层析技术检测抗-CCP原理 以硝酸纤维膜作为固相载体，分别在检测区和质控区划线包被CCP抗原和质控物。测试时，样本滴入加样孔后，血清中的IgG与包被在聚酯膜上的胶体金标记的抗体结合，结合物随之在毛细效应下横向层析。当血清中含有特异性抗-CCP抗体时，泳动到检测区时被CCP抗原捕获，出现阳性条带，游离标记物继续向前移动与结合标记物自动分离，泳动至质控区被捕获形成阳性质控线。若样本中不含抗-CCP抗体，则检测线处不发生特异性结合反应，胶体金标记物继续层析向前与包被于质控线处质控抗体结合而形成阳性条带，多余的胶体金标记物继续层析到吸水垫上。
1.3.2 方法学比较 （1） 将104份标本随机分成13组，每组8份，保存于-20℃，每天取出一组，测定前充分复融。室温下严格按照说明书操作。（2）根据定性试验评价方案[2],每天用两种方法平行测定一组，连续13d。将所有检测结果汇总，以ELISA方法为参考方法，进行Kappa检验，评价一致性。同时计算两种方法阳性和阴性符合率以及总符合率。
1.3.3 重复性试验 高值：在临界值（25RU/L）基础上准备+20％浓度（30RU/L）的样本。低值：在临界值基础上准备-20％浓度（20RU/L）的样本。经ELISA方法检测后，收集混合而成。将高值和低值各分装20份，保存于-20℃。室温下严格按照说明书操作。每天取出高值和低值各1份，连续检测20d，记录阴性及阳性结果数。
1.4 性能验证标准
1.4.1 两种方法一致性验证标准 Kappa值＞0.75表示具有优秀的一致性；Kappa值0.4～0.75，认为相当好的一致性；Kappa值＜0.4，一致性很差。
1.4.2 阳性、 阴性符合率验证标准 若检测结果和参考方法结果相比较一致，则视为验证的方法阳性、阴性符合率性能符合要求。
1.4.3 临界值±20%重复性验证标准 当实验结果表明+20%浓度的样本产生阳性结果数≥95%，同时-20%浓度的样本产生阴性结果数≥95%，说明用该方法检测临界值+20%的样本检测结果一致。
1.5 统计学处理
用SPSS11.5软件进行统计学分析，统计两种方法检测抗-CCP抗体阴性符合率、阳性符合率、总符合率；两种方法一致性比较采用Kappa检验。
2 结果
2.1 两种方法一致性
两种方法检测104 例血清抗-CCP抗体结果：ELISA法检出52例阳性，52例阴性；金标法检出阳性56例，阴性48例。可算出两种方法检测抗-CCP抗体，阴性符合率为92%，阳性符合率为100%，总符合率为96%。Kappa值等于0.92。见表1。
2.2 GICA法重复性
由表2可见，用GICA法重复检测20次高值，20次阳性，阳性率100%；重复20次检测低值，阳性5次，阴性15次，阴性率75%。
3 讨论
目前临床上检测抗-CCP抗体多采用ELISA法，特异性和敏感度都比较高，但检测时间长，操作过程繁琐，不适合常规操作。而GICA法具有简单、快速、准确和无污染等优点[3]，可单份测定，特别适合标本量少、人手紧张、设备有限的中小医院广泛开展与使用，便于临床推广。
本研究以ELISA法作为参考方法，与GICA法进行比较，研究结果显示两种方法检测总符合率为96%，Kappa值为0.92，两方法一致性良好。此外，GICA检测52例阴性标本，有4例弱阳性，说明GICA敏感性比较高，可能有假阳性产生，尤其是弱阳性的标本。所以临床应用过程中，要结合临床症状，排除假阳性现象。
GICA重复性试验显示，+20%临界值浓度标本，重复性为100%，说明用该方法检测，+20%临界值浓度标本的检测结果一致。而-20%临界值浓度标本，重复性只有75%，不是很理想，说明-20%临界值浓度的样本，用该方法检测，却不一定能得到一致结果。这也是定性试验的缺陷，临界值附近的浓度标本，可出现阴性或阳性的结果。
类风湿性关节炎2009年新诊断标准，将抗-CCP抗体纳入其中，为RA早期诊断提供了金标准，临床上运用也越来越广泛。大量研究己证实了抗-CCP抗体对RA具有高特异性，有助于与其他风湿性疾病相区别[4~6]。抗-CCP抗体不但能及早提示RA的发病，且对已明确诊断的RA患者，和其他自身免疫性疾病患者，检测抗-CCP抗体也是有临床意义的[7]，它的阳性可能提示患者易发生或已发生骨侵蚀破坏，治疗时，应注重联合治疗，且预后往往较差。因此常规体检，尤其是中老年人的体检可以在原有血清学检测中加入抗CCP抗体检测，以达到早筛查、早诊断、早预防、早治疗、改善预后。
总而言之，胶体金免疫层析法检测抗-CCP抗体，性能可靠，操作简便、快速，完全能够满足对RA的初步筛查，值得在临床推广使用。
[参考文献]
[1] Bukhari M，Harrosiont B，Lunt M，et al ．Time to first occurrence of eroaions in inflammatory polyarthritis：results from prospective community-based study[J]. Arthritis Rheum，2001，44（6）：1248-1253．
[2] 王治国．临床检验方法确认与性能验证[M]．北京：人民卫生出版社，2009：346-348．
[3] Wang WS，Chen PM，Su Y．Colorectal carcinoma：from tumorigenesis to treatment [J] ．Cell Mol Life Sci，2006，63（6）：663-671．
[4] Goldbach-Mansky R，Lee J，McCoy A，et al．Rheumatoid arthritis associated autoantibodies in patients with synovitis of recent onset[J]. Arthritis Res，2000，2（3）：236-243．
[5] Bizzaro N，Mazzanti G，Tonuti E，et al．Diagnostic accuracy of the anti-citrulline antibody as say for rhumatoida rthritis[J]. Clin Chem，2001，47（6）：1089-1093．
[6] Suzuki K，Sawada T，Murakami A，et al．High diagnostic performance of ELISA detection of antibodies to citnrllinated antigens in rheumatoid arthritis[J].Scand J Rheumatol,2003，32（4）：197-204．
[7] 汤卫菊. 抗环状瓜氨酸肽（CCP）抗体检测的临床应用[J].中国医药导报 ，2007，8（11）： 103.
（收稿日期：2011-08-23）
