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[摘要] 目的 探讨腹腔镜与开放式手术治疗卵巢良性肿瘤对患者免疫功能的影响。方法 选择120例卵巢良性肿瘤患者，分为对照组及腔镜组，分别采用开放式手术及腹腔镜行肿瘤切除术，术后24h采用玫瑰花环实验检测红细胞凝集率，细菌吞噬法检测中性粒细胞吞噬功能，流式细胞技术检测CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T表达变化。 结果 术后24h腔镜组患者血清细胞凝集率高于对照组，中性粒细胞吞噬率及吞噬指数高于对照组，CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T淋巴细胞表达水平高于对照组。结论 腹腔镜治疗妇科良性肿瘤能够减少手术的免疫损伤，有利于患者机体免疫功能的保护。
[关键词]腹腔镜；卵巢良性肿瘤；红细胞；中性粒细胞；T淋巴细胞
[中图分类号] R737.31 [文献标识码] B [文章编号]1673-9701（2011）24-34-02
Effect of Laparoscope and Open Operation to Immunological Function in Patients with Ovarian Benign Tumor
SUN Yunming TANG Yuxin
Department of Gynaecology and Obstetrics，Maternal and Child Health Hospital of Zhoushan City in Zhejiang Province，Zhoushan 316000， China
[Abstract] Objective To investigate the effect of laparoscope and open operation to immunological function in patients with ovarian benign tumor. Methods One hundred and twenty cases of patients with ovarian benign tumor were selected and randomly divided into control group and laparoscope groups，and ovarian benign tumor were excised with laparoscope or open operation，24h after operation， agglutination rate of red blood cell were detected with rosettes test， phagocytosis function of neutrophil were detected with phagocytosis bacteria way， level of CD3+T，CD4+T and CD3+T/CD4+T were detected with flow cytometry. Results Twenty-four hour after operation， agglutination rate of red blood cell was higher in laparoscope groups than in control groups， phagocytosis rate and phagocytosis index was higher in laparoscope groups than in control groups，level of CD3+T，CD4+T and CD3+T/CD4+T were was higher in laparoscope groups than in control groups. Conclusion laparoscope operation in patients with ovarian benign tumor can decrease immunologic injury，and is beneficial for protecting immunological function.
[Key words] Laparoscope； Ovarian benign tumor； Red blood cell； Neutrophil； T lymphocyte
腹腔镜技术能够减少手术创伤，利于患者术后康复，是卵巢良性肿瘤治疗的理想微创手术方式，外科手术过程对于机体是创伤应激的过程，对机体的免疫功能存在影响，过度的免疫损伤能够引起机体免疫力下降，增加术后并发症的发生几率，本文就卵巢良性肿瘤腹腔镜治疗对机体免疫功能的影响进行研究，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院妇产科2006年1月~2010年12月收治的卵巢良性肿瘤患者120例，患者年龄24~63岁，平均（44.7±11.6）岁，其中卵巢囊肿92例，卵巢畸胎瘤11例，卵巢黏液性腺瘤9例，卵巢浆液性腺瘤8例，并排除既往有腹部手术史等腹腔镜手术禁忌证患者及近期使用免疫抑制剂者。患者入选后随机分为对照组及治疗组，每组60例，对照组年龄24~61岁，平均（43.9±12.4）岁，治疗组年龄26~63岁，平均（45.6±11.2）岁，两组患者年龄及疾病种类无显著差异。
1.2 手术方法
两组患者均采用气管内插管静脉复合麻醉。对照组采用常规开放式手术，选择下腹部横切口或正中切口进腹，探查下腹部及盆腔，纱布垫保护术区，沿瘤体边缘电刀切开皮质，游离肿瘤，出血点电凝或结扎止血，切除肿瘤后常规放置盆腔引流管。腔镜组采用标准的四孔操作法，CO2气腹压力维持在12~14 mmHg，囊壁处将皮质剪开一小口深达肿瘤囊壁，分离钳牵拉、电凝钩及分离钳分离，血管肽夹夹闭离断，创面电凝止血，肿瘤较大者放入塑料袋剪碎后取出，放置盆腔引流管，患者术后常规抗生素预防感染。
1.3 检测方法
1.3.1 红细胞玫瑰花环实验 红细胞凝集率检测采用C3bR花环试验，酵母试剂（碧云天生物试剂公司）用Hank’s液洗离心，配成含酵母细胞1.00×108/mL的悬液，新鲜豚鼠血清（碧云天生物试剂公司）致敏，混匀，37℃水浴， Hank’s液恢复原浓度，即为C3b酵母细胞悬液。采集静脉血1mL，用Hank’s液洗稀释成1.25×107细胞/mL的悬液。 取致敏酵母菌悬浊液和红细胞悬液各50μL，混匀，于37℃水浴40min后取出，加0.25%戊二醛溶液20μL固定5min， Hank’s液稀释、涂片、干燥，甲醛固定，姬姆萨染色，高倍镜检查。以1个红细胞黏附2个或2个以上酵母细胞为1个花环，计数200个红细胞，求出花环率。
1.3.2 中性粒细胞吞噬功能 中性粒细胞测定采用细菌吞噬法，金黄色葡萄球菌（ATCC12598菌株）接种高温灭活后用无菌生理盐水配制成6×108 菌液1mL，洁净凹玻璃片的凹孔内加入20μL肝素、40μL静脉血及20μL葡萄球菌菌液混匀，置入37℃预热铺有小湿纱布的有盖容器内，37℃作用30min，间隔10min 搅匀1次。然后载玻片涂片，甲醇固定，碱性美蓝染色，油镜观察。吞噬细胞百分数：100个中性粒细胞中吞噬有细菌的细胞数；吞噬指数：100个中性粒细胞所吞噬的细菌均数。
1.3.3 CD3+T、CD4+T细胞检测 T细胞亚群检测采用Coulter Epics-XL流式细胞仪进行分析，上机管底部加入血液标本100μL，分别加入CD3+、CD4+单克隆抗体（南京建成生物工厂研究所），室温孵育，加入500μL红细胞裂解液裂解红细胞，振荡混匀。常温下静置20min，PBS缓冲液500μL混匀，静置20min后离心检测，操作过程严格按照试剂及仪器使用说明书进行。
1.4 统计学处理
数据处理采用SPSS11.5统计学软件，统计学方法采用t检验，检验水准α=0.05，P＜0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者血液免疫功能及中性粒细胞免疫功能比较
对照组术后24h红细胞凝集率、中性粒细胞吞噬率及吞噬指数分别为（38.50±5.24）%、（72.80±5.90）%及（4.60±1.76），腔镜组分别为（44.90±6.29）%、（78.60±5.06）%及（7.40±1.58），腔镜组红细胞凝集率、中性粒细胞吞噬率及吞噬指数高于对照组（P ＜0.01）。见表1。
2.2 两组T细胞免疫功能比较
术后24h腔镜组CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T表达比例高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。
3 讨论
腹腔镜技术是微创外科的代表技术，近年来发展迅速，该技术手术创伤较小，是妇科良性肿瘤的理想手术方式，其对神经内分泌、代谢、免疫功能、呼吸、循环等方面也有一定的影响，但是相对于开放式手术，其创伤相对较小，腹腔镜手术采用微创切口，术中腹腔处于密闭环境，因此腹腔内温度不容易发生变化，有利于术中保持患者体温恒定，由于体温波动引起的应激反应相对较轻，而其对腹腔干扰较小，出血量及手术创伤都优于常规的开放式手术，有利于患者的术后恢复。
既往的研究认为[1，2]，腹腔镜手术术中采用CO2充盈腹腔， 容易被吸收溶解于血液中，引起血液系统高碳酸，损伤血液系统的免疫功能，引起红细胞免疫及粒细胞免疫功能下降。对卵巢良性肿瘤患者观察发现，腹腔镜手术患者红细凝集率高于对照组，中性粒细胞的吞噬率及吞噬指数高于对照组。红细胞凝集率能够反映细胞表面C3b受体的表达情况，C3b抗体是红细胞与抗原免疫复合物结合的主要受体，能够通过该区域的过氧化物酶系破坏抗原抗体复合物，同时通过C3b受体的介导，将循环系统中的免疫复合物运送到网状内皮系统，清除免疫复合物[3，4]。中性粒细胞是血液系统防御的第一道防线，含有丰富的溶酶体、溶菌酶及过氧化物酶等，能够吞噬血液中的免疫复合物、细菌等，中性粒细胞的功能是机体免疫状态的直接体现，在免疫力降低时，其吞噬作用及趋化作用减弱，容易发生感染等手术并发症。两组的比较发现，术后24h在腔镜组红细胞凝集率、中性粒细胞吞噬率及吞噬指数均高于对照组，说明采用腔镜手术治疗腹腔良性肿瘤对于体液免疫功能干扰较小[5]，同时也说明手术对体液系统免疫的影响主要来自手术的创伤，而术中建立气腹应用的CO2对体液免疫的影响较小，使用较为安全。
T细胞系统是机体细胞免疫的主要形式，CD3+是淋巴细胞的共有标志物[5]，CD4+是辅助T淋巴细胞的表面标志物，CD4+T淋巴细胞主要参与MHCⅡ抗原的识别及呈递，同时也是免疫记忆产生的主要识别免疫细胞，在研究中发现，腔镜组术后24h血液中CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T高于对照组，说明卵巢良性肿瘤采用腹腔镜及治疗能够减少T细胞免疫的损伤[7]，同时CD3+T/CD4+T的降低也说明在对照组T淋巴细胞对MHCⅡ类抗原的识别能力及记忆能力下降，腹腔镜治疗不仅能够保护T细胞免疫，同时也有助于T细胞免疫平衡[8]，减少对T细胞免疫的损伤。研究结果显示，采用腹腔镜治疗卵巢良性肿瘤，能够减轻体液系统红细胞免疫及中性粒细胞免疫损伤，同时有利于保护T淋巴细胞免疫功能及免疫平衡，减轻机体的免疫损伤。
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（收稿日期：2010-06-07）
