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羟乙基淀粉(HES)在临床上广泛用于治疗低血容量、休克、微循环障碍及血液稀释。动物实验结果表明,新一代中分子低取代级羟乙基淀粉130/0.4可降低血浆中促炎因子过度释放、上皮细胞黏附分子表达,降低可溶性黏附分子浓度从而改善微循环、减少内皮激活、降低内皮损伤、降低毛细血管通透性,减轻炎性反应。而羟乙基淀粉的临床效应如何却鲜见报道。我们在2008年3月―2009年7月观察了急性胆管炎患者术前输注羟乙基淀粉后外周血中性粒细胞(Polymorphonuclear neutrophil, PMN)凋亡及炎性因子的变化,探讨羟乙基淀粉对急性胆管炎患者围术期炎性反应调控的影响,为临床提供参考。��
1 资料与方法�
1.1 临床资料�
1.1.1 诊断及纳入标准 所有患者均符合急性胆管炎诊断标准,严格选择40例病例,并剔除符合以下标准的病例:凝血机制异常、接受抗凝治疗及肝、肾功能异常者,合并有心、脑、肝、肾等重要脏器疾病、内分泌疾病以及其他感染性疾病和肿瘤患者。资料统计分析前,由统计人员和主要研究者讨论判断病例是否剔除。�
1.1.2 病例分组 采用抽签法(符合研究标准的病例进行抽签,抽取1号者进入对照组,抽取2号为治疗组)随机分成两组,对照组20例,其中男12例,女8例,年龄46.0～69.0岁,平均56.3岁;治疗组20例,其中男11例,女9例,年龄48.0～69.0岁,平均58.7岁。两组在年龄、性别、病程上差异无统计学意义,具有均衡性。�
1.2 治疗方法
治疗组于手术前静脉注射羟乙基淀粉15 mL/kg(南京正大天晴制药有限公司生产),对照组给予乳酸钠林格液15 mL/kg,30 min输完。两组输完后即行全身麻醉,手术中以复方乳酸钠溶液持续输注。�
1.3 麻醉方法
所有患者采用静脉复合全身麻醉,开始静脉麻醉诱导。诱导用药依次为:咪唑安定0.05 mg/kg、芬太尼�5 μg/kg�、维库溴铵0.1 mg/kg、丙泊酚1.5～2.0 mg/kg。麻醉维持用药为:每小时给予丙泊酚1～3 mg/kg +芬太尼2 μg/kg +维库溴铵0.05 mg/kg持续静脉泵注。在强手术刺激前注射合适剂量的芬太尼。若出血量过大术中或术后需输血者,剔除出本观察。�
1.3.1 PMN 的分离及培养 参阅文献\方法进行。分别在麻醉前(T0)、麻醉后(T1)、手术开始后2 h(T2)、手术后6 h(T3),手术后12 h(T4)和手术后24 h(T5)时点采集外周静脉血5 mL(肝素抗凝),分别加人6%的葡聚糖3 mL以沉淀红细胞,分层后取上清液少量-70℃保存,待测细胞因子。余移置4 mL淋巴细胞分离液(percoll,军事医学科学院血液研究所)上,500 r/min离心30 min,去上清液,加低渗NH4Cl 3 mL(NH4Cl 155 mmol/L,KHCO3 10 mmol/L,EDTA 0.1 mmol/L)混合沉淀以溶解红细胞,2000 r/min离心2 min,PBS洗脱2次备用。体外细胞培养取2×106/L PMN加含10%小牛血清的1640培养液悬浮细胞,使其浓度为2×107/mL(PMN>95% ) ,应用苔盼蓝排斥试验检测活细胞>98%。在37℃含5%CO2饱和湿度条件下孵育24 h取出细胞检测PMN凋亡。�
1.3.2 PMN凋亡的检测 培养24 h后取细胞采用流式细胞术检测PMN凋亡。即取PMN用pH 7.4的PBS洗涤2次, 调整细胞浓度为2×106/mL,加入碘化丙啶(PI),室温避光放置30 min,上流式细胞仪(Beckman Coulter公司)检测,通过观察细胞周期变化及亚二倍体峰的出现确认细胞凋亡及比例。�
1.4 观察指标
炎性因子包括血浆白细胞介素-6 (IL-6) 、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α( TNF-α) 。采用ELISA法,试剂盒购自美国Genzyme公司,实验操作按试剂说明书进行。所有样品设立复孔,均在同一批内检测。�
1.5 统计学方法
应用SPSS 13. 0统计分析软件对结果进行处理,符合正态分布的数据均以均数±标准差(x-±s)表示,不符合正态分布的数据,经自然对数转换正态化分析。各组间计数数据比较采用χ2检验,计量数据采用单因素方差分析,组间比较采用t检验。��
2 结果
两组40例患者剔除术中需输血者4例(对照组3例,治疗组1例),术中麻醉药用量两组差异无统计学意义。
两组PMN凋亡率于麻醉开始后(T1)即降低, 且随时间的延长PMN凋亡率逐渐下降,T4时点降至最低点,与T0比较P *:与本组麻醉前比较, P
