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【摘要】目的 分析幽门螺旋杆菌(HP)感染时血清及胃黏膜组织肿瘤坏死因子α(TNF)、白细胞介素(IL-6)的水平,探讨它们之间的关系。方法 采用放射免疫法和酶联免疫吸附实验夹景法分别检测了HP阳性患者在治疗前后,血清和胃黏膜组织中的TNF-α、IL-6的水平。结果 幽门螺旋杆菌感染程度越严重者,胃黏膜组织中TNF-α、IL-6水平越高,各组间差异均有显著意义(P2受体拮抗剂和铋剂等药物。
1.2 方法 所有受检查者在胃镜下,距幽门口5cm内不同部分取黏膜标本4块,分别用于病理学检查、快速尿素酶法测HP检查及TNF-α、IL-6检测。将用于检测TNF-α、IL-6的2块取材放入含10%胎牛血清的RPLMI1640培养液中置放37℃孵育24小时,研磨匀浆后离心20000r/min20分钟,取上清液1 mL置-30℃冰箱保存待测TNF-α、IL-6活性,并用紫外分光光度法测定其蛋白含量。胃镜检查取材后抽空腹血清TNF-α、IL-6含量。TNF-α用上海华冠生物芯片有限公司生产的放射免疫分析药盒测定。IL-6检查采用第四军医大学免疫学教研室生产的酶联免疫吸附实验夹心法检测试剂盒。IL-6ELISA体外诊断试剂盒购置于北京晶美生物工程有限公司。
另采用14尿素呼气实验(14C-UBT)同时检测HP。14C-UBT采用液体闪烁计数法,使用YH01B型14C-UBT采用液体闪烁计数仪(福州晋安福利总厂产)。
慢性胃炎患者经口服奥美拉唑胶囊20mg,1次/d,4周。停药1月追踪复查。复查快速尿素酶法、14C尿素呼气实验法均为阴性,或14C尿素呼气实验法为阴性者判定HP根除。本组HP转阴者为37例。比较HP根除前后血清和胃窦黏膜组织中TNF-α、IL-6的活性变化。
1.3 结果判定标准 根据快速尿素酶实验及14C尿素呼气实验检测方法,将HP感染程度分为(+)、(++)、(+++)。
1.4 统计方法 采用SPSS10.0统计软件进行t检验,P(++)>(+),各组间有显著性差异(P0.05),见表2。
表1 慢性胃炎HP感染与TNF-α、IL-6活性关系
幽门螺旋杆菌感染程度例数
肿瘤坏死因子α
血清(μg/L)胃黏膜(pg/mg蛋白)
白细胞介素6
血清(μg/L)胃黏膜(pg/mg蛋白)
+161.68±1.24.94±1.910.1±1.35.74±1.6
++201.82±2.46.82±1.811.6±2.37.92±2.4
+++144.12±2.39.76±2.612.2±2.810.98±2.6
表2 HP根除前后TNF-α、IL-6的活性变化
检测时间例数
肿瘤坏死因子α
血清(μg/L)胃黏膜(pg/mg蛋白)
白细胞介素6
血清(μg/L)胃黏膜(pg/mg蛋白)
治疗前373.28±1.67.64±2.911.30±2.68.85±2.3
治疗后371.12±1.43.45±1.75.60±2.33.42±2.1
3 讨论
HP感染相关性胃炎病原菌的致病与HP菌株、毒力和密度有关。HP感染改变了黏膜侵袭因素和防御因素之间的平衡,改变局部环境,引起黏膜炎症[3]。HP对胃型黏膜(胃和胃化生的十二指肠)的侵袭作用较强,凭借其毒力因子的作用,菌体菌体定居在胃型黏膜后能产生氨、细胞毒素、磷脂酶A�2、细胞空泡毒素(VaA)、细胞毒素相关基因(CagA)产物等多种致病性代谢产物。这些物质有些直接对细胞有毒害作用,有些则破坏胃黏膜屏障的保护作用,使上皮细胞直接与胃腔内的攻击因素如胃酸、胃蛋白酶等接触,损伤上皮,破坏了细胞间的紧密联系[4]。
目前多数学者认为HP感染主要作用于癌变的起始阶段,即在活动性胃炎、萎缩性性胃炎和肠化生的发展中起主要作用。HP感染导致胃炎的发生并进一步促进胃黏膜炎症,使萎缩与肠化生逐渐发生并进行性加重,进而产生癌变。根除HP感染后可减轻萎缩及肠化生程度,尤其对胃窦部肠化生的影响更为显著[5]。张筱菌等[6]的研究提示,胃癌病人血清中IL-6、TNF-α升高。从HP提纯的尿素酶可刺激胃黏膜上皮细胞释放IL-6、TNF-α。HP阳性胃癌、癌组织与相应非癌性黏膜组织相比,CD8�+细胞中IL-6、TNF-α mRNA的水平明显增高,上皮细胞中,TNF2α mRNA的水平明显增高。说明胃黏膜细胞因子的产生与HP感染和癌变两种因素都有关联。
TNF-α本身具有细胞毒作用,可激活T细胞、B细胞,增加自然杀伤细胞的杀伤能力,可直接或间接引起肝细胞的免疫损伤。TNF-α还有强烈的诱生能力,可诱导TNF-α本身、IL-1、IL-6、IL-8等因子的大量分泌,使之对细胞因子的灭活能力下降害[6]。本研究组HP感染者中,血清及胃黏膜组织中TNF-α、IL-6水平随HP感染加重而增加,且随着HP根除后TNF-α、IL-6水平明显下降,与根除前相比有显著性差异。这一结果与上述理论相吻合。重度HP感染患者TNF-α、IL-6水平明显增高,考虑与HP刺激胃黏膜上皮细胞分泌大量的TNF-α、IL-6可能与毒株基因表达有联系。说明TNF-α、IL-6与HP感染密切相关,TNF-α、IL-6亦能激活中性粒细胞参与胃黏膜损伤的病理过程。
参考文献
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[6] 张筱菌,陈咏仪,刘冰,等.胃癌组织细胞因子表达的变化与幽门螺旋杆菌感染相关[J].中华微生物学和免疫学杂志,2002,(22)535-536.
