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【摘要】 目的 探讨自动化微板法筛查献血者不规则抗体临界值的选择。方法 通过已知不规则抗体阳性及阴性标本试验结果的OD值，选择判读是否凝集的临界值，并观察所选临界值的实际应用效果。结果 所选临界值判读准确率达99.89%，实现了不规则抗体检测的自动化、标准化、结果的数据化。结论 自动化微板法筛查献血者不规则抗体，适用于血站系统献血者的大批量筛选和管理。�
【关键词】微板法;不规则抗体;临界值
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作者单位：454000河南省焦作市中心血站
不规则抗体能引起免疫性输血反应、新生儿溶血病或使输注红细胞存活时间缩短1］，严重影响临床输血的安全性和有效性。因此，对受血者开展不规则抗体的日常筛查目前在多数医院已经普遍实施，但对大量献血者标本进行筛查，传统的试管法因存在操作步骤繁琐、工作效率低、实验结果无法数据化等不足而未能普及开展。为此，我们尝试将抗人球蛋白试验改良后在微板中进行检测。为能准确地判读结果，避免漏检，笔者对自动化微板法检测不规则抗体的临界值进行了探讨，设置出恰当的临界值，通过酶标仪读取微孔板各孔的OD值，再根据判读软件中设定的临界值自动判读结果，实现了不规则抗体检测的自动化、标准化、结果的数据化，并与试管法对比效果良好，现报告如下。�
1 材料和方法�
1.1 试验标本�
1.1.1 选择在日常工作中用试管法筛查并已用谱细胞确定了抗体特异性的已知不规则抗体阳性标本22份，已知不规则抗体阴性标本36份作为选择临界值的标本。�
1.1.2 随机抽取2009年4月至2009年9月本站采集的无偿献血者血液标本共计1920份(枸橼酸钠抗凝) 作为常规试验标本，分批检测并和试管法进行对照，阳性标本用谱细胞在聚凝胺、抗人球等介质中鉴定抗体特异性，从而观察所选临界值的实际应用效果。�
1.2 仪器设备 STAR全自动样本处理系统(瑞士HAMILTON公司)； TS温控孵育振荡器(奥地利ANTHOS公司)；Sunrise酶标仪(奥地利TECAN公司)；Labofuge400平板离心机(美国Beckman公司)；96孔硬质U形微板(丹麦Nunc公司)。�
1.3 试剂 抗人球蛋白试剂、筛选细胞、谱细胞由上海血液生物医药有限责任公司提供；聚凝胺试剂盒由珠海贝索生物技术有限公司提供；所有试剂均在有效期内使用。�
1.4 应用软件 Liswell实验室管理软件(烟台海深威公司)。�
1.5 方法按参考文献2］处理微板，然后:①用STAR全自动样本处理系统加入检测样品，每孔100 μl，37℃孵育30 min。②用生理盐水洗涤5遍，拍干。③加入稀释好的抗人球蛋白试剂，每孔50 μl。④ 1200 g离心2 min。⑤振荡悬浮，振频1000 r/min，振幅1 level，时间2 min。⑥用630 nm滤光片扫描读板。�
2 结果�
2.1 临界值的测定和选择 已知不规则抗体标本OD值结果见表1。�
表1
已知不规则抗体阳性及阴性标本OD值分布表
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阳性阴性
n OD值范围n OD值范围
2 ＞2.00016＜0.100
4 1.500~2.000130.101~0.149
6 1.000~1.499 70.150~0.200
8 0.500~0.999
2 0.300~0.499
实验结果显示，阴性OD最大值为0.200，阳性OD最小值为0.300，因此，阴性临界值定为0.200，阳性临界值定为0.300，0.201~0.299为可疑区域。按此临界值判断，即阳性标本OD值均大于0.300，阴性标本OD值均小于0.200。因此临界值选定为：OD值≥0.300为凝集，即判定为阳性；OD值≤0.200为不凝集，即判定为阴性；0.201≤OD值≤0.299为可疑结果，需进一步用试管法重复试验。�
2.2 无偿献血者血液标本检测结果 使用该方法随机抽查本站2009年4月至2009年9月的1920份无偿献血者血液标本进行不规则抗体筛查，共检出不规则抗体6人份，占所检人数的0.31%。试管法平行筛查出不规则抗体4人份，所设临界值判读准确率达99.89%。�
3 讨论�
对献血者开展不规则抗体筛查可以减少受血者输血反应的发生，提高输血安全。目前在发达国家已经普遍实施，但在国内还开展得并不普遍，其原因是由于采用传统手工方法，费时费力，给日常筛查带来很大困难3］。自动化微板法检测不规则抗体，采用全自动加样设备加注样品和试剂，扫描酶标仪读板，通过实验室管理软件进行结果判读及数据保存，实现了不规则抗体筛查的自动化、标准化、规范化，克服了传统试管法操作繁琐的弊端，使试验变得方便快捷，满足了血站简便、快速、准确的检测大批量献血者标本的需要。�
微板法判读结果的准确与否，关键在于临界值的定位，阳性结果与阴性结果OD值相差越大，酶标仪扫描点数越多，判读效果越好。本实验室通过对已知阴、阳性标本进行扫描判读，根据OD值范围设置出最佳临界值，并通过无偿献血者血液标本的检测和判读，证实所选临界值的实际应用效果良好。考虑到弱阳性结果可能会出现漏检，故临界值设置较低，出现了一定的假阳性。但由于对可疑结果均进行人工判读和重复试验，所以与假阴性结果相比假阳性可以进一步保证输血安全。�
但该方法操作时应注意:①按最佳实验参数制定标准操作规程，实验室所有工作人员均要严格执行，避免人为因素造成实验结果的不一致或错误。②血液标本要抗凝，否则会造成加样针堵塞、加样量不准确，甚至引起错误结果。③悬浮震荡后立即判读，保证结果的准确性。④微板保持干净。微板底部有异物或有划痕时，会误判结果。微板重复使用前，要用清洁液浸泡，自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗一遍，晾干备用。⑤筛查出的所有阳性标本，用谱细胞在聚凝胺、抗人球等介质中进行特异性鉴定。�
总之，在自动化微板法检测不规则抗体的过程中，应根据所使用仪器的性能特点，设置最佳的实验参数，特别是要选择好临界值，以提高结果判读的准确性。�
参 考 文 献�
［1］ 王培华.输血技术学.第2版.北京：人民卫生出版社,2002:166.�
［2］ 李雪英,韩惠云,李志平.批量筛检献血者不规则抗体的方法.中国实用医药,2010,5(22):223�224.�
［3］ 郑小凡,祝宏,吴亚玲,等.应用Olympus PK7200血型仪筛查献血者意外抗体.中国输血杂志,2009,22(1):48.
